肺炎支原体抗体滴度和RNA病原检测在儿童肺炎支原体肺炎诊断和治疗中的应用价值

林琳 应媛媛

肺炎是临床常见病症之一，多见于儿童，支原体（Mp）感染是主要致病原因，在儿童社区获得性肺炎（CAP）中占比高达10%～32%，且地区性爆发流行时可达到55%～80%，对患者危害极大[1]。由于Mp感染而引起的儿童肺炎，与其他病原体所引起的感染疾病在影像学、体征及症状等方面具有相似性，难以准确区分，因此，实验室病原检测成为儿童支原体肺炎（Mpp）的有效诊断方法之一[2]。对于血清学检测Mp感染的诊断方法，临床常用肺炎支原体抗体滴度检测，而RNA实时荧光恒温扩增技术（SAT）可对RNA病原准确检测，研究发现，两种方法联合检测具有较高的准确率[3]。本次选取442例患儿，研究儿童Mpp诊治中肺炎Mp抗体滴度与RNA病原检测的应用价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取我院于2018年1月～2020年12月诊治的442例CAP患儿为研究对象，以实验室诊断结果为依据，分为支原体肺炎组（M组）和非支原体肺炎组（非M组），分别为312例、130例。M组患儿纳入标准：①均出现呼吸道感染症状，以干咳、发热等为主，经实验室检查确诊为Mpp；②急性期、恢复期双份血清抗体滴度升高≥4倍或单次血清抗体滴度≥1∶160；③资料完整；④家长签署知情同意书。非M组患儿纳入标准：①经临床确诊为非Mpp的其他肺炎类型；②复查结果显示血清Mp抗体滴度≤1∶80；③资料完整；④家长签署知情同意书。排除合并精神疾病者、中途退出者及合并血液系统疾病者。以入院前是否使用大环内酯类药物为依据，将M组患儿分为使用组（规律用药>3d）和未使用组（未用药及用药≤3d）。入组病例中，M组男173例，女139例，年龄1～16岁，平均（5.16±2.45）岁。非M组男72例，女58例，年龄8个月～11岁，平均（5.01±2.51）岁。两组资料比较，差异无统计学意义（P<0.05）。本研究获伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 抗体滴度检测 Mp抗体检测试剂盒由日本富士瑞必欧株式会社提供，采用颗粒凝集法测定抗体滴度，分别设置为<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、>1∶640。

1.2.2 Mp-RNA检测 Mp核酸检测试剂盒由上海仁度生物科技有限公司提供，于患儿入院当天采集咽拭子，并放置于生理盐水中，将等量裂解液加入，制作成待测样本。加入内标后，应用磁珠法对靶标RNA进行提取，对扩增检测液进行配置后应用核酸扩增仪测定。采用4支Mp-RNA标准品，对待测样本进行定量分析。

1.3 观察指标①对比两组抗体滴度分布情况及Mp-RNA检测结果；②分析M组Mp-RNA与抗体滴度检测结果；③分析M组不同检测方法对阳性率的影响因素；④分析不同检测方法对不同病程患儿的检测结果；⑤分析Mp-RNA检测在Mpp疗效评估及短期复发诊断中的意义。

1.4 统计学方法数据经SPSS 19.0软件分析，计量、计数资料分别用±s、%表示，分别经t、χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Mp-RNA检测结果及抗体滴度分布对比M组抗体滴度阴性（<1∶160）64例，占比20.51%；阳性（≥1∶160）248例，占比79.49%。抗体滴度阳性率随病程增加呈升高趋势，Mp-RNA阳性率随抗体滴度升高呈下降趋势；于4～6d后复查，抗体滴度<1∶160患者的滴度均升高≥4倍；以抗体滴度1∶160为截点分组，Mp-RNA阳性率比较，<1∶160组（90.63%）高于>1∶160组（72.85%），差异有统计学意义（χ2=8.810，P<0.05）。于4～6d后复查结果显示，非M组有5例Mp-RNA阳性，占比为3.85%，见表1。

表1 两组Mp-RNA结果及抗体滴度分布

2.2 M组Mp-RNA与抗体滴度检测结果对比M组抗体滴度阳性率（≥1∶160）为79.49%（248/312），Mp-RNA阳性率为77.24%（241/312），未见明显差异（χ2=0.463，P>0.05）。两种检测方法阳性一致率为58.65%（183/312），阴性一致率为1.92%（6/312），见表2。

表2 M组Mp-RNA与抗体滴度检测结果比较（n）

2.3 M组不同方法检测阳性率的影响因素与<3岁组、>10岁组比较，4～6岁组与7～9岁组两种检测方法的阳性率均更高，但整体年龄分组间差异无统计学意义（P>0.05）。与病程较短组比较，病程较长组的抗体滴度阳性率更高，Mp-RNA阳性率更低（P<0.05）；入院前药物使用对两种检测方法的阳性率影响差异有统计学意义（P<0.05），见表3。M组入院时Mp-RNA检测为阴性共73例，其中14例患儿于3～7d后复查，12例复查结果为阴性，2例转阳性。

表3 M组不同方法检测阳性率的影响因素

2.4 不同检测方法对不同病程患儿的检测结果应用单一方法检测时，病程较长组抗体滴度阳性率较高，而病程较短组Mp-RNA阳性率较高。联合检测以任意一种阳性结果为感染判断标准，除4～7d组阳性率为95.71%，其余病程组阳性率均为100%。8～14d组两种检测方法均阳性率最高，其次是4～7d组，见表4。

表4 不同病程组不同检测方法的阳性率比较[n（%）]

2.5 Mp-RNA检测在Mp疗效评估及短期复发诊断中的意义M组78例患儿入院Mp-RNA结果为阳性，住院时间为（6.63±2.31）d，期间规范用阿奇霉素，于出院当天复查，结果显示，Mp-RNA转阴27例（34.62%），转阴患儿入院前大环内酯类药物服用时间为（4.32±3.01）d。Mp-RNA定量检测结果显示，83.33%（65/78）的患儿复查结果下降，拷贝数下降至原来的16.8%；51例未转阴者首次测定RNA拷贝数高于转阴者；43.14%（22/51）的患儿首次拷贝数>106拷贝数/ml，转阴组为25.93%（7/27）。

M组中29例患儿出院后1个月再次入院，首次诊断Mpp与再次入院时间间隔为（18.29±7.98）d， 首次入院抗体阳性率为62.07%（18/29），Mp-RNA阳性率为86.21%（25/29），再入院时抗体阳性率为100%，且抗体滴度均>1∶640，Mp-RNA阳性率为27.59%（8/29）。

3 讨论

Mp是目前已知独立生活最小的一种病原微生物，可由鼻、喉、咽等吸入气溶胶或飞沫等进行传播，人群普遍易感，多见于学龄儿童、青少年等，以5～10岁为高发年龄。儿童一旦感染Mp，依据身体情况不同可出现不同临床症状，且症状轻重程度具有一定差异，多数以高热为主要表现，体温可达到39℃，也有部分患儿无发热，但多见咳嗽、咳痰等，偶见恶心、斑丘疹及呕吐等症状。Mp侵入呼吸道后，可附着于上皮细胞，对黏膜纤毛的清除作用产生抵抗，进而引起机体氧化应激反应，损伤呼吸道上皮[4～6]。以往，临床多采用X线、CT等诊断儿童Mpp，但准确度较差，且患儿配合度不高。随着医学技术不断发展，Mp抗体滴度、RNA抗原检测等均得到广泛应用，不仅能早期诊断儿童Mpp，还可用于治疗及复发评估，应用价值较高[7]。

本研究发现，M组Mp-RNA阳性率、抗体滴度阳性率均高于75%，提示两种方法单一检测，可取得相近的诊断效率，对于疾病诊断具有较高的准确度。相较于病程较短组，病程较长组抗体滴度阳性率明显更高，而抗体滴度为1∶160患儿的平均病程为5.89d，提示对于发病时间为1～7d患儿，单次抗体滴度检测结果为1∶160进行诊断，可能存在一定假阴性情况，需联合病原检测，以提高诊断准确性。首次抗体滴度检测结果为≤1∶80的M组患者，4～6d后可见抗体滴度升高，而非M组患儿未见明显升高，提示Mp感染后，对于免疫力正常的儿童来说，短时间内可出现抗体滴度明显升高情况，由此，应用双份血清对儿童Mpp进行诊断，可提高诊断准确度。同时，对于首次抗体滴度检测结果较低患儿，考虑可能处于Mp感染早期，机体内抗体仍然处于上升期或尚未产生抗体，应当结合病原学检测结果、临床症状及抗体滴度变化情况等进行综合诊 断[8]。此外，本研究还发现，29例再次入院患儿的首次入院Mp-RNA阳性率为86.21%，明显高于M组平均值，而复查未转阴患儿的早期Mp-DNA定量检测结果也高于转阴组，提示PCR病原学检测中，早期载量高、早期阳性等均与疾病程度密切相关，可作为儿童Mpp重症病例的预警判断因素。分析原因，SAT属于新型分子生物学检测方法的一种，相较于传统PCR检测方法，其诊断准确度、敏感度均更高[9]。RNA仅在活菌体中存在，自身免疫、用药等均可导致病原体死亡，或对其活性产生抑制，RNA降解、载量由此降低，因此对Mp-RNA进行检测，对于儿童Mpp的诊断、治疗、转归等均有较高的价值。早期进行PCR病原学检测，有利于指导临床合理制定治疗方案[10]。

综上所述，联合检测Mp抗体滴度及RNA病原，可为临床诊断儿童Mpp及治疗提供可靠依据。