HPLC法测定双嘧达莫阿司匹林胃内漂浮胶囊的含量

张军

摘要：建立高效液相色谱法，色谱条件：采用Zorbax SB-C18色谱柱，流动相为甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6），检测波长280nm。结果表明：双嘧达莫和阿司匹林分别在80～400μg/ml和10～50浓度范围内线性关系良好（r>0.9993），平均回收率分别为99.69%（RSD=0.28%）和99.34%（RSD=0.48%），本方法可同时测定胃内漂浮胶囊中双嘧达莫阿司匹林的含量，方法简便、快速，结果准确。

关键词：双嘧达莫阿司匹林胃内漂浮胶囊;测定;高效液相色谱法

双嘧达莫（D）用于预防血栓形成，小剂量阿司匹林（A）用于抗血栓、预防血栓形成， D、A的复方制剂（200mg：25mg）的作用为二者的抗血栓作用相加，用于因血栓形成引起暂时性脑缺血发作或完全缺血性中风的病人，降低中风危险，疗效提高，剂量减少，不良反应显著降低〔1，2〕。由于A对胃刺激性大，D在水及碱性环境几乎不溶，而溶于稀酸〔3〕，为此，研究了DA胃内漂浮胶囊，以期提高疗效、降低不良反應、提高生物利用度、缓释长效。本文建立了HPLC法，同时测定胃内漂浮胶囊中D和A的含量。

1 材料与仪器

Waters高效液相色谱仪、515泵、2487双波长紫外检测器、717自动进样器、Millennium32色谱工作站，电子天平FA1604S（上海天平厂）。

D对照品（江苏启东东岳药业有限公司，批号20180733，含量99.36%），A对照品（中国药品生物制品检定所，批号100113-201802，含量100.0%），DA胃内漂浮胶囊（自制，批号191220～191224），甲醇（TEDIA COMPANY .INC USA）;其它试剂均为市售分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱 Zorbax SB-C18（ 4.6×150mm，5μm）;流动相 甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6）;流速1.0ml/min;检测波长 280nm;柱温 40℃;进样量 10μl。

2.2 对照品溶液的配制 精密称取D对照品约25mg、A对照品约200mg，置100ml量瓶中，用含1%甲酸的甲醇液溶解并定容;精密量取上述溶液5ml于50ml的量瓶中，用含1%甲酸的甲醇溶液定容。

2.3 测定波长的选择 取对照品溶液，在200～600nm波长范围内扫描，见图1。结果表明在280nm处D、A有较大吸收，故选择此波长作为检测波长。

2.4 专属性试验 在“2.1”项色谱条件下，取对照品溶液和空白辅料溶液进样，辅料见图2，对照品见图3，D和A的保留时间分别为9.6和3.4min，辅料不干扰测定。经过酸降解（0.1mol/l HCL）、碱降解（0.1mol/lNaOH溶液）和热降解（110℃加热破坏）试验，产生的各分解产物均能与被测组分有效分离。

2.5 线性试验 精密称取D和A对照品适量，用含1%甲酸的甲醇液溶解并稀释成D浓度分别为80、160、240、320、400μg/ml和A浓度分别为10、20、30、40、50μg/ml的溶液，进样测定。以峰面积（S）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程为D：S=1.472×10-8 C-2.995×10-3 （r=0.9995），S：A =1.447×10-7 C-2.624×10-4（r=0.9993）。结果表明D在80～400μg/ml 、A在10～50μg/ml浓度范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密称取D和A对照品适量，用含1%甲酸的甲醇液溶解分别配成高、中、低浓度溶液，分别于1d内测5次，得日内RSD为D0.503%、0.339%、0.207%和A0.403%、0.486%、0.6275%;连续测定5d，得日间RSD为D0.438%、0.693%、0.295%和A1.038%、1.246%、1.085%。

2.7 回收率试验 精密称取D和A对照品适量及处方比例的辅料，用含1%甲酸的甲醇液溶解分别配成高、中、低浓度溶液，每种浓度配制三份，进样测定，得平均回收率为D99.84%、99.83%、99.41%和A 99.25%、99.07%、99.71%，RSD为D 0.23%、0.10%、0.50%和A0.39%、0.33%、0.71%（n=3）。

2.8 样品测定 取本品20胶囊，精密称定，研细，精密称取此细粉适量（约相当于D200mg、A25mg）于100ml量瓶中，用 含1%甲酸的甲醇溶液溶解并定容，用0.45μm的微孔滤膜过滤，精密量取续滤液5ml于50ml量瓶中，用含1%甲酸的甲醇溶液溶解并定容，照“2.1”项下色谱条件下测定。同法测定对照品溶液，按外标法以峰面积计算得样品的含量，结果见表1。

3 讨论

3.1 曾选用0.1mol/L HCL、0.1mol/L HCL-甲醇（1：1）、1%甲酸的甲醇等不同溶剂对样品进行提取。结果表明，A在0.1mol/L HCL、0.1mol/L HCL-甲醇（1：1）中存在不同程度的水解现象;样品在1%甲酸的甲醇中稳定、提取率较高。对提取时间试验的结果表明，提取10min后变化不大，故选择10min。

3.2 参照文献[4，5，6]，用十八烷基键合硅胶为填充剂，分别配制不同比例的流动相考察分离情况。在甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6）时，D和A保留时间较长;比例为60：38.75：0.75：0.5时，D和A保留时间较短，A峰与辅料峰分离不好;比例为50：48.75：0.75：0.5时，D和A的保留时间分别为9.6和3.4min，且能与各降解产物有效分离。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.临床用药须知2000版[M].北京：化学工业出版社，2001.287，153.

[2] Food and Drug Administration U.S. Department of Health and Human Services Public Health Service 5600 Fishers Lane Rockville， MD 20857 .FDA Approves New Drug.November 23， 1999：NDA 20-884

[3] 陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学[M].第十五版.北京：人民卫生出版社，2003.544～545.

[4] 易军，张蜀，谭载友.复方双嘧达莫缓释胶囊中双嘧达莫与阿司匹林含量的RP.HPLC 测定[J].中国医药工业杂志，2001，32（2）：70～72.

[5] 王淑君，孟凡浩，孙进.复方双嘧达莫缓释胶囊的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，2004，35（2）：98～99.

[6] 孔少仪，林染.双嘧达莫胃内漂浮片的研制[J].中国医药工业杂志，2003，34（8）：395～397.