2015-2019年云南省红河州蒙自市禽流感、新城疫血清学调查研究

王艳芬，黄 鑫，舒相华，董 燕，宗月兰，张雅靖，吕 涛，王余磊，张智慧，张雅伦，宋春莲

（1.云南农业大学动物医学院，昆明 650201；2.云南省红河州蒙自市动物疫病预防与控制中心，蒙自 661199；3.昆明伟牧得生物科技有限公司，昆明 650201）

禽流行性感冒（avian influenza，AI），是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起，以感染禽类为主的一种急性、热性、高度接触性传染病[1]。近年来有人感染禽流感的报道，属于人禽共患传染病。该病的主要传染源是病禽和带毒的禽，病毒通过呼吸系统和消化系统随分泌物、排泄物排出并通过直接接触和间接接触来进行扩散传播。鸡新城疫（Newcastle disease，ND）又称为亚洲鸡瘟，是由副黏病毒科腮腺炎病毒属新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一种烈性病毒性传染病。NDV存在于病禽的全部组织和器官、体液、分泌物和排泄物中，对大脑、脾脏和肺脏具有高度毒性，以呼吸困难、下痢、神经症状明显，黏膜和浆膜出血为特征的急性败血性传染病，死亡率高。鸡在各个阶段都可能感染此病，雏鸡的感染率比成年鸡高。因此，禽流感和新城疫可对养禽业经济发展产生巨大的影响[2]。

禽流感和新城疫都曾给养鸡业带来毁灭性打击。随着现代养鸡业的迅猛发展，鸡产品流通快，市场交易频繁，禽流感与新城疫的防控形式严峻，目前对禽流感与新城疫的预防主要采取强制免疫、加强消毒、隔离、无害化处理等多项防疫措施。定期进行血清学的主动监测，强化补免，形成高水平的免疫抗体屏障，有效防疫两种病的发生。

云南省红河州蒙自市地处云南东南，与 越南接壤，规模化养殖程度不高，有23个的规模场（5个蛋鸡场、6个蛋鸭场、12个肉鸡场），大部分是林下养殖的散养户。为了解本地区禽流感、新城疫疫苗免疫情况，本研究对2015-2019年的全市规模养殖场和散养户进行了跟踪检测，通过数据分析统计，可为该地区的防疫工作提供指导。

1 材料与方法

1.1 材料来源 2015-2019年云南省红河州蒙自市的规模化养殖场和散养户的鸡血清2687份。

1.2 样品采集 11个乡（镇）每年春、秋两季接种疫苗后1个月，采集鸡翅下静脉血液，静置或3000 ×g离心15 min后取上层血清，置于4℃保存，备用。

1.3 实验试剂 禽流感疫苗：山东信得（20150201）；哈尔滨维科（2016010、201605）；广东永顺（2018034、2019002）；哈药集团（2019129）等。鸡新城疫疫苗：云南生物药厂Ⅰ系、Ⅳ系或新支2联苗，批号分别为20150315、20160421、20170623、20180425和20180803等。禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原：哈尔滨维科，批号分别为2018004、2018006、2019004、2019005等。禽流感H5亚型和鸡新城疫阳性血清均购自哈尔滨维科生物技术开发公司，批号分别为2015010、2016003、2017001、2018003、050721、20170801、20181003和20181106等。PBS缓冲液购自天津洋华科技生物有限公司。1%鸡红细胞悬液：采集健康并且未免疫成年公鸡血液，加入采血量十分之一抗凝剂，加入PBS缓冲液2500 ×g离心5～8 min，洗涤3次后弃上清液，加入10倍血量PBS缓冲液，4℃保存备用。

1.4 检测方法 依据国家《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2003）和《新城疫诊断技术》（GB/T 16550-2008R）的标准进行检测。群体免疫抗体阳性率到达70%以上为免疫合格。

1.5 结果判定 血凝试验（HA）以能使红细胞完全凝集的抗原最大稀释倍数为抗原血凝价，以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为血凝抑制试验（HI）效价，HI效价＜51og2判定为阴性，HI效价≥5log2判为阳性。

1.6 数据分析 对检测结果进行汇总和描述性分析，差异显著性用IBM SPSS statistics 25中的卡方检验进行统计分析。

2 结果与讨论

2.1 2015-2019年各年度禽流感、新城疫抗体检测结果 如表1可见，禽流感除2018、2019年低于国家标准外，其余年份均高于国家标准，抗体总阳性率为78.15%，为免疫合格，高于贵州省（68.10%）[3]和安徽省（67.7%）[4]部分地区。新城疫在这5年间抗体阳性率均达到国家标准，且抗体阳性率均高于84%，总阳性率为87.72%，低于2017年西安市（95%）[5]；高于2015年厦门市同安区（50.1%）[6]；与2018年玉溪通海市（89.87%）[7]检测结果相差不多。

表1 云南省红河州蒙自市 2015-2019年禽流感、新城疫抗体监测结果Table 1 Antibody monitoring results of avian influenza and Newcastle disease from 2015 to 2019 in Mengzi, Honghe prefecture, Yunnan province

2.2 春秋防抗体检测结果比较 云南省红河州蒙自市2015-2019年禽流感、新城疫免疫抗体阳性率季节差异情况如表2和表3所示。2015-2018年禽流感抗体阳性率春防均高于秋防，且2015-2017年阳性率高于80%，免疫效果较好；2019年抗体阳性率秋防高于春防。2018年秋防（50.58%）和2019年春防（65.94%）阳性率低于70%，免疫失败。2015-2018年新城疫抗体阳性率春防均高于秋防，且阳性率均高于89%，免疫效果较好；2019年抗体阳性率秋防高于春防。

表2 禽流感春、秋免疫检测情况比较Table 2 Comparison of spring and autumn immunodetection of avian influenza

表3 新城疫春、秋防免疫检测情况比较Table 3 Comparison of spring and autumn immunodetection of Newcastle disease

2.3 2015-2019年11个乡（镇）禽流感、新城疫抗体检测结果 云南省红河州蒙自市11个乡（镇）2015-2019年禽流感、新城疫监测结果见表4和表5。禽流感抗体免疫合格率，2015年11个乡镇比较中，1个乡镇（冷泉）未检测，4个乡镇（新安所、鸣鹫、老寨、水田）不合格，6个乡镇合格；2016年1个乡镇（芷村）未检测，3个乡镇（老寨、冷泉、西北勒）不合格，7个乡镇合格；2017年5个乡镇（芷村、鸣鹫、老寨、期路白、西北勒）不合格，6个乡镇合格；2018年1个乡镇（芷村）未检测，5个乡镇（雨过铺、新安所、鸣鹫、老寨、西北勒）不合格，5个乡镇合格；2019年6个乡镇（雨过铺、草坝、新安所、期路白、水田、西北勒）不合格，5个乡镇合格。5年的禽流感总平均阳性率除文澜（93.29%）、草坝（89.31%）合格外，其余均为不合格。

表4 2015-2019年11个乡（镇）禽流感抗体检测结果Table 4 Detection results of avian influenza antibody in 11 townships (towns) from 2015 to 2019

表5 2015-2019年11个乡（镇）新城疫抗体检测结果Table 5 Detection results of Newcastle disease antibodies in 11 townships (towns) from 2015 to 2019

新城疫抗体免疫合格率，2015年11个乡镇比较1个乡镇（冷泉）未检测，3个乡镇（鸣鹫、老寨、水田）不合格，7个乡镇合格；2016年1个乡镇（芷村）未检测，5个乡镇（新安所、老寨、期路白、水田、西北勒）不合格，5个乡镇合格；2017年5个乡镇（芷村、老寨、期路白、水田、西北勒）不合格，6个乡镇合格；2018年1个乡镇（芷村）未检测，3个乡镇（期路白、水田、西北勒）不合格，7个乡镇合格。2019年3个乡镇（老寨、期路白、西北勒）不合格，8个乡镇合格。5年的新城疫总平均阳性率除老寨（53.78%）、期路白（30%）、水田（50.94%）、西北勒（20.54%）不合格外，其余均为合格。

该市地形多为山区和坝区，其中文澜、雨过铺、草坝、新安、冷泉等地处坝区，与其余乡镇比经济相对发达，农户科学防病思想意识高，家禽养殖规模大，数量多，便于科学管理和 疫情控制，因此免疫合格率较高。而老寨、期路白、西北勒等属于山区乡镇，养殖户居住分散，每户零星养上几十只禽类，防疫意识较差，疫苗基本不做，因此相对检测结果均不达标。这与张小苗[8]云南省建水县调查结果类似。采样困难，数据少，甚至有些乡（镇）某些年份采集不到样品，导致实验产生误差，结果影响总体水平。且很多乡（镇）野生禽类栖息在周边山区，有携带禽流感、新城疫病毒入侵的风险；市区存在的鸽群、观赏禽类没有进行过任何形式的免疫；一些散养户中饲养多种禽类动物但只对鸡进行禽流感、新城疫疫苗免疫，也存在着较大的安全隐患。通过监测及分析，掌握不同乡（镇）禽群免疫状态并向养殖乡（镇）反馈监测结果，有助于养殖场制定科学合理的免疫程序，督促免疫抗体不合格和未免疫养殖场及时做好补免、重免工作[9]。

2.4 该市禽流感和新城疫的免疫程序及分析 规模场禽流感疫苗免疫程序为：蛋鸡7～14日龄初免，3～4周加免，开产前再进行一次强化免疫，之后根据抗体检测结果每半年免疫1次；肉鸡7～14日龄初免，3～4周可加免1次或不免；散养户春、秋两季各进行1次集中免疫，每月定期补免。规模场新城疫疫苗免疫按各自的免疫程序，散养户同禽流感。规模养殖场具有相对较强的防疫意识，严格科学的免疫程序；而很多散养户免疫程序不合理或落实不到位，没有规模场的经验免疫[10]。为了确保免疫水平还应实施合理的免疫措施，规模化养殖场、散养户的抗体阳性率低于70%时，应对所在群体实施紧急免疫接种[11]。

2.5 规模场和散养户检测结果比较 2015-2019年监测的规模场分别有13户（472羽）、12户（456羽）、14户（406羽）、13户（399羽）、16户（395羽），散户分别为19户（140羽）、16户（145羽）、13户（107羽）、15户（103羽）、9户（64羽）。

2.5.1 禽流感检测结果 2015-2019年，规模化户免疫合格率均在70%以上为合格，散养户均为不合格；规模户和散养户比较，除2019年外，其余年份均为差异极显著（P＜0.01）。但规模户免疫阳性率呈下降趋势，散养户呈上升趋势。

图1 规模户和散养户免疫合格率比较Fig.1 Comparison of immunization pass rate between large-scale farms and free-range households

2.5.2 新城疫检测结果 2015-2019年，规模化户免疫合格率均在70%以上为合格，散养户均为不合格；规模户和散养户比较5个年份均为差异极显著（P＜0.01），具有统计学意义。

规模户和散养户比较，禽流感和新城疫免疫合格率均为显著差异，规模户均达到合格，散养户均为不合格，可见散养户的防疫意识较差，免疫程序不合理，甚至部分不愿免疫。这与元振杰等[12]以及潘福宝等[13]对家禽高致病禽流感调查中表明规模场的禽流感免疫合格率极显著高于散养户的情况一致。

本次研究通过对云南省红河州蒙自市规模化及散养户禽流感、新城疫疫苗免疫效果进行调查，为了解该地区禽流感、新城疫的免疫情况并提供科学有效的防控依据。

图2 2015年至2019年规模场与散养户检测结果Fig.2 Comparison of immunization pass rate between large-scale farms and free-range households