山蜡梅叶片提取物清除自由基活性及液质联用分析

陈庆祥 伍全根 胡丰林

摘 要：山蜡梅（Chimonanthus nitens）为腊梅科腊梅属常绿灌木，其叶片中含有多种活性成分。该研究首次采用高效液相色谱、高分辨质谱和二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）联合试验法，对山蜡梅叶片提取物的清除自由基活性及成分进行了研究。结果表明，山蜡梅叶甲醇提取物具有一定的清除DPPH自由基活性，其中安徽黄山、六安和市售的山蜡梅叶对0.4mg/mL DPPH自由基的半数清除浓度分别为2.23、2.31和2.82mg/mL。利用液质联用和清除自由基进行联合分析，山蜡梅叶甲醇提取物的主要成分为C7H12O6、C15H18O9、C15H14O5、C22H26O19和C27H30O16。其中，C15H18O9、C15H14O5和C27H30O16有着较强的清除自由基活性。3种活性化合物可能分别为咖啡酸葡萄糖苷、三羟基黄烷醇和芦丁，其中咖啡酸葡萄糖苷和三羟基黄烷醇为首次从山蜡梅中发现的。

关键词：山蜡梅叶;活性成分;液质联用和DPPH联合分析

中图分类号 Q946  文献标识码 A文章编号 1007-7731（2021）19-0013-03

Radical Scavenging Activity and Constituents Analysis of Methanol Extracts from Leaves of Chimonanthus nitens with HPLC-HRMS-DPPH Method

CHEN Qingxiang1 et al.

（1Forestry Bureau of Huoshan Count， Huoshan 237299， China）

Abstract： Chimonanthus nitens which contained several active constituents is an evergreen shrub of the Chimonanthus family. A combined analysis of HPLC-MS and DPPH assay was used for the first time to study radical scavenging activity and components of extract from leaves of Chimonanthus nitens. Results show that extracts from leaves of Chimonanthus nitens possess radical scavenging activity.  The half scavenging concentrations of leaves from Huangshan， Liuan and Jiangxi are 2.23， 2.31 and 2.82 mg/mL respectively. Results of HPLC-MS and DPPH assay show that the main components in leaves of Chimonanthus nitens are C7H12O6， C15H18O9， C15H14O5， C22H26O19 and C27H30O16， and C15H18O9， C15H14O5， C27H30O16 have radical scavenging activity. Data base enquiry show the three radical scavengers are possibly lutin， caffeoylglucoside and trihydroxyflavanol and the last compounds were detected from Chimonanthus nitens for the first time.

Key words： Leaves of Chimonanthus nitens; Bioactive constituents; Combined analysis of HPLC-MS and DPPH assay

山蜡梅（Chimonanthus nitens Oliv.）别名亮叶腊梅、毛山茶、岩马桑、香风茶，是我国特有的蜡梅科蜡梅属灌木，主要分布在我国湖北、安徽、江西、江苏、浙江、湖南、广西、云南等省份的山地疏林下或林缘处[1]。山蜡梅在安徽山区普遍分布，山区老百姓习惯用山蜡梅叶做茶饮用，用于防治感冒。据报道，山蜡梅多以叶入药，叶气清香，味微苦而辛凉，具有解表祛风、清热解毒之功效，有预防感冒和治疗慢性气管炎等作用[2]。现代药物化学分析与药效试验证明：山蜡梅叶的主要成分为黄酮、生物碱、肌醇和挥发油，具有抗菌消炎、抗病毒、增强肌体免疫力等功能，且无毒副作用[4-8]。

安徽山区有大量的野生山蜡梅。为做好山蜡梅的开发利用工作，本研究采用高效液相色谱、高分辨质谱和二苯基苦基苯肼自由基试验联用的方法，对安徽山蜡梅叶的清除自由基活性成分进行了研究，并与市售样品进行比较，以期更全面地了解该植物的生物活性，同时为安徽山区的山蜡梅资源开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 山蜡梅叶样品 供试样品于2016年9月分别采自安徽六安和黄山，同时从市场购买产地为江西的干燥山蜡梅叶产品做比较。

1.1.2 化学药品 二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）从Sigma公司购买;溶剂甲醇为国产分析纯;用于液质联用分析的甲醇为美国天地公司的HPLC级甲醇。

1.1.3 主要仪器 酶标仪为美国Molecule Device公司的M2型;电子天平为上海分析仪器厂生产的万分之一天平。高分辨液质联用分析仪，包括美国安捷伦公司的1100型高效液相色谱仪（包括自动进样器、二元高压梯度泵、真空脱氣机和二极阵列检测器），安捷伦6210型飞行时间质谱仪。