CXCR4、RGS4及RAGE在小儿肾母细胞瘤中的表达及临床意义

胡传兵 韩暖 于宝华 田俊严 孙劲松

肾母细胞瘤又称为威尔姆斯瘤，为婴幼儿较为常见的一种腹部恶性实体肿瘤，组成部分为肾源性上皮以及间质［1］。由于肾母细胞瘤的生物学行为多变，加之当前对肾母细胞瘤发生、发展的分子机制并未完全明确，故寻找特异性肿瘤标志物十分重要［2］。随着分子生物学的不断发展，研究者发现选择趋化因子受体（C-X-C motif chemokine receptor 4，CXCR4）、蛋白信号调节因子4（Recombinant Regulator Of G Protein Signaling 4，RGS4）、晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycationend products，RAGE）在神经母细胞瘤、胃癌、乳腺癌及肺癌等多种实体肿瘤中表达异常，且和肿瘤的发生、发展有关，而关于CXCR4、RGS4 及RAGE 在肾母细胞瘤的发生、发展过程中的作用却鲜少报道［3-4］。基于此，本研究将通过检测小儿肾母细胞瘤患者CXCR4、RGS4 及RAGE 的水平，探讨上述指标水平在小儿肾母细胞瘤中的表达及临床意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年6月至2020年6月本院收治的98例小儿肾母细胞瘤患者，手术留取肾母细胞瘤组织纳入研究组。其中男59 例，女39 例，平均年龄为（3.82±0.74）岁。纳入标准：①经病理、影像学检查确诊［5］；②临床资料完整者；③术前未进行化疗、放疗等治疗；④患儿监护人皆自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：①存在其他系统病变或恶性肿瘤者；②存在严重心、肺、肝等器官功能不全患者；③存在精神疾病无法配合本研究或依从性差者。选取距离肿瘤边缘5 cm 以外的正常肾组织纳入对照组（经病理筛查无癌细胞后最终纳入73例）。本研究经医院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法

所有标本组织于手术切除后立即使用10%甲醛固定，组织切片后脱蜡、水化。并采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（Streptomycin avidin peroxidase，S-P）免疫组化染色法对CXCR4、RGS4 及RAGE 进行检测，CXCR4 兔抗人多克隆抗体浓缩型购自武汉博士德生物技术公司，RGS4 及RAGE兔抗人多克隆抗体浓缩型北京博奥森生物技术有限公司提供，试剂盒、DAB 显色剂由河北博海生物工程开发有限公司提供，具体方法严格按照试剂盒说明执行。每批切片染色均以磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，PBS）代替一抗作低表达对照，用已知高表达的组织切片作高表达对照。一抗的稀释比例皆是1/100。

根据高表达细胞百分比及染色情况判定CXCR4、RGS4 及RAGE 表达水平［6］：0 分：无高表达细胞；1 分：高表达细胞低于10%，2 分：高表达细胞在11%～15%的范围内，3 分：高表达细胞＞50%。染色情况判定：0 分：无色，1 分：淡黄色，2 分：棕黄色，3 分：棕褐色。总积分：上述2 项评分的乘积。低表达为3 分及以下，高表达为4 分及以上。

1.3 观察指标

①比较对照组与研究组CXCR4、RGS4 及RAGE 表达情况。②分析CXCR4、RGS4 及RAGE表达与肾母细胞瘤临床病理特征的关系。③对患者进行为期1年的门诊或电话随访，记录预后生存、死亡的情况，分析影响肾母细胞瘤患者预后死亡的独立危险因素。

1.4 统计学方法

采用统计软件SPSS 22.0 进行统计分析。计量资料以（）表示，行t检验；计数资料以n（%）表示，行χ2检验；影响因素采用多元Logistic 回归分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CXCR4、RGS4 及RAGE 表达情况比较

对照组CXCR4、RAGE 高表达率显著低于研究组，RGS4 高表达率高于研究组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1、图1。

图1 免疫组化染色图（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemical staining（SP，×400）

表1 两组CXCR4、RGS4 及RAGE 表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison on CXCR4，RGS4 and RAGE expression between the two groups［n（%）］

2.2 CXCR4、RGS4 及RAGE 表达与肾母细胞瘤临床病理特征的关系

临床分期Ⅲ～Ⅳ期、预后不良组织结构（unfavorable histology，UH）、有淋巴结转移者CXCR4、RAGE 高表达率明显高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、预后良好组织结构（favorable histology，FH）及无淋巴结转移者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。FH 者RGS4 高表达率高于UH 者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 CXCR4、RGS4 及RAGE 表达与肾母细胞瘤临床病理特征的关系［n（%）］Table 2 the relationship between the expressions of CXCR4，RGS4 and RAGE and clinicopathological features of Wilms tumor［n（%）］

2.3 影响肾母细胞瘤患者预后死亡的单因素分析

术后1年预后死亡者8 例（8.16%）。非条件单因素logistic 回归模型分析显示：临床分期、临床分型、淋巴结转移、CXCR4、RAGE 及RGS4 表达为影响肾母细胞瘤患者预后死亡的单因素（P＜0.05）。见表3。

表3 肾母细胞瘤患者预后死亡的单因素［n（%）］Table 3 univariate analysis on prognostic death in patients with Wilms tumor［n（%）］

2.4 影响肾母细胞瘤患者预后死亡的多因素分析

经非条件多因素logistic 回归模型分析得，临床分期Ⅲ～Ⅳ期、预后不良组织结构、有淋巴结转移、CXCR4、RAGE 高表达及RGS4 低表达是影响肾母细胞瘤患者预后死亡的危险因素（P＜0.01）。见表4。

表4 影响肾母细胞瘤患者预后死亡的多因素分析Table 4 Analysis of multiple factors influencing the prognostic death of patients with Wilms tumor

3 讨论

肾母细胞瘤是小儿肾癌中最为常见的一种类型，据不完全统计，肾母细胞瘤占小儿恶性肾肿瘤发病率的5%左右［7］。由于恶性肿瘤的发生、发展及浸润转移是由各种信号传导、趋化因子、转录因子等途径共同实现，因此，寻找识别肾母细胞瘤发生、发展相关的特异性标志物是近年来研究的热点［8］。

Cheng 等［9］报道显示，CXCR4 为CXCL12 的唯一受体，CXCL12 通过和CXCR4 的N 端特异性结合，在肿瘤侵袭浸润转移、介导免疫反应、增强肿瘤血管新生等病理生理过程中起到关键作用。国外已有较多研究表明，CXCR4 表达异常在乳癌、前列腺癌、肾癌的发生中起到重要作用［10］。RGS4 属于亚家族的因子，可以调控G 蛋白信号转导效率、平衡不同G 蛋白信号转导，参与G 蛋白信号转导偶联功能的调节，同时RGS4 与人体多项生理活动有关［11］。任鹏等［12］研究显示，RGS4 可作为许多疾病的潜在治疗靶点，同时RGS4 与多种肿瘤的产生、发展密切相关。Franklin 等［13］研究显示，在宫颈鳞癌癌组织中RAGE 存在高表达情况，RAGE 为宫颈鳞癌的转移、侵袭中的一个重要环节。RAGE是免疫球蛋白受体的一种，在疾病的发生、发展中有重要的作用［14］。在正常情况下RAGE 在组织细胞中处于较低的水平，仅在肺和脑组织中呈高表达状态［15］。目前鲜有关于CXCR4、RGS4 及RAGE表达与肾母细胞瘤发生发展关系的相关研究。本组研究结果发现，对照组CXCR4、RAGE 高表达率显著低于研究组、RGS4 高表达率高于研究组，且CXCR4、RAGE 高表达率与肾母细胞瘤患者的临床分期、临床分型及淋巴结转移有关，而RGS4 的高表达率仅与临床分型有关，这与相关研究结果相符［16-17］。提示CXCR4、RGS4 及RAGE 表达可能在肾母细胞瘤的发生、发展及转移过程中发挥重要作用。CXCR4 作为趋化因子亚家族中的一员，可有效阻断肿瘤新生血管，从而发挥抑制肿瘤的转移与生长的作用。RAGE 可通过活化MAPK、NF-kB 等信号通路，推动肿瘤细胞生长信号的进一步活化，继而促进肿瘤的转移与生长。RGS4 可通过失活G 蛋白对G 蛋白偶联受体信号的转导通路发挥抑制作用，从而抑制肿瘤细胞转移及侵袭，故推测在肾母细胞瘤中RGS4 可能为抑癌因子。本研究通过对患者预后进行分析发现，CXCR4、RAGE 高表达及RGS4 低表达是肾母细胞瘤患者预后死亡的危险因素，提示CXCR4、RGS4 及RAGE在评估患者预后情况中具有重要的价值。然而关于CXCR4、RGS4 及RAGE 在小儿肾母细胞瘤组织中具体作用机制仍需要进一步的研究探索。

综上所述，CXCR4、RGS4 及RAGE 在小儿肾母细胞瘤组织中表达异常，并与肾母细胞瘤发生、发展有关，临床上可通过检测三者表达情况对患者病情进展及预后进行评估。