外周血IgG4、IgG及IgG4/IgG比值与Graves眼病严重程度、甲状腺免疫抗体的相关性分析

张 雯，王 嫄，王晟宇，杜兆江

Graves眼病是弥漫性毒性甲状腺肿(Graves病)的并发症之一，患者表现为提上睑肌和眼外肌损害、眼球突出、角膜溃疡等[1]。Graves眼病的发病机制较为复杂，主要是眼肌、眼球后组织的成纤维细胞、脂肪细胞的细胞膜上有促甲状腺素受体，从而引起眼肌、眼球后组织发生免疫炎症反应，导致水肿、炎症、组织纤维化，使眼部病情恶化[2]。有研究显示Graves眼病患者多具有甲状腺抗体异常，检测抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)等可辅助诊断[3]。免疫球蛋白G4(IgG4)是IgG亚型之一，近年来发现IgG4水平升高与Graves眼病密切相关[4]，但目前临床对于IgG4与Graves眼病的病情严重程度、活动性的关联尚不明确。本研究探讨IgG4、IgG及IgG4/IgG比值与Graves眼病严重程度、甲状腺免疫抗体的相关性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年1月—2020年12月我院收治的Graves眼病105例为研究对象。纳入标准：符合Graves眼病的诊断标准[5]；处于疾病的活动期，临床活动性评分≥3分[6]。排除标准：合并IgG4相关性疾病；合并其他免疫性结缔组织疾病或变态反应性疾病；合并严重心、肺、肝、肾、脑血管病；合并免疫缺陷疾病；近3个月内患者使用免疫抑制剂、免疫球蛋白制剂；合并感染性疾病；恶性肿瘤病史；除Graves眼病外的其他眼科疾病。选取同期健康体检者45例为对照组，排除甲状腺疾病以及上述排除标准。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有研究对象知情同意。Graves眼病组男42例，女63例；年龄30～71(51.28±6.65)岁；病程3～11(7.20±1.83)个月；临床活动性评分3～7(5.09±0.67)分。对照组男18例，女27例；年龄33～70(52.30±6.18)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2Graves眼病疾病分级 根据欧洲Graves眼病协作组制定的病情分级标准[7]：轻度为突眼度19～20 mm，眼睑回缩<2 mm，轻度软组织受累，没有或只有间歇性复视，无暴露性角膜炎。中重度为突眼度21～23 mm，眼睑回缩≥2 mm，中度或重度软组织受累，间隙或持续性复视，轻微的暴露性角膜炎。极重度为突眼度>23 mm，眼睑回缩>2 mm，持续性复视，存在角膜溃疡。将Graves眼病患者分为轻度组49例、中重度组40例、极重度组16例。

1.3方法 采集纳入者外周血5 ml，分离血清后待检。①IgG4、IgG采用免疫比浊法检测，试剂盒购自罗氏诊断产品(上海)公司，检测仪器为800TS多功能酶标仪(美国BioTek公司)。按说明书步骤操作，设置标准孔、样品孔、空白孔，依次加入生物素标记的抗体、洗涤3次、加入亲和链酶素、洗涤3次、加入底物，最后于450 nm波长处测定各孔的吸光度(OD)，仪器自动计算出待测样品的浓度。②TGAb、TPOAb、TRAb采用磁微粒电化学发光法检测，试剂盒购自罗氏诊断产品(上海)公司，检测仪器为拜耳公司180SE全自动化学发光仪。按说明书步骤操作，设置标准孔、样品孔、空白孔，依次加入生物素标记的抗体、洗涤3次、加入包被亲和链酶素的磁珠微粒、洗涤3次、加入底物，产生的光信号通过电化学发光仪光电倍增管，测定光单位RLU信号值，仪器自动计算出待测样品的浓度。

2 结果

2.1血清IgG4、IgG、IgG4/IgG比值比较 与对照组比较，Graves眼病轻度、中重度、极重度组血清IgG4水平、IgG4/IgG比值增高，且随着疾病严重程度增高上述指标逐渐增高(P<0.01)。见表1。

表1 不同分级Graves眼病及对照组血清IgG4、IgG、IgG4/IgG比值比较

2.2甲状腺免疫抗体阳性率比较 与对照组比较，Graves眼病轻度组、中重度组、极重度组TGAb、TPOAb、TRAb阳性检出率增高(P<0.01)。见表2。

表2 不同分级Graves眼病及对照组甲状腺免疫抗体阳性率比较[例(%)]

2.3血清IgG4与Graves眼病严重程度、甲状腺免疫抗体相关性 血清IgG4与Graves眼病严重程度、TGAb阳性、TPOAb阳性、TRAb阳性呈正相关(r=0.616、0.599、0.338、0.229，P<0.05，P<0.01)。图1～4。

图1 血清IgG4与Graves眼病严重程度的相关性

图2 血清IgG4与Graves眼病血清TGAb的相关性TGAb为抗甲状腺球蛋白抗体

图3 血清IgG4与Graves眼病血清TPOAb的相关性TPOAb为抗甲状腺过氧化物酶抗体

图4 血清IgG4与Graves眼病血清TRAb的相关性TRAb为抗促甲状腺素受体抗体

3 讨论

IgG4相关疾病为一种自身免疫性疾病，Rotondi等[7]、Li等[8]研究发现，Graves病与IgG4密切相关，部分Graves病患者存在血清IgG4水平升高。近年来多项研究也发现Graves眼病与IgG4有关，IgG4可能在Graves眼病的发病机制中起到一定作用[9-10]。本研究结果显示，血清IgG4水平、IgG4/IgG比值随着病情的加重而升高，血清IgG4与Graves眼病严重程度呈正相关。与吴联群等[11]研究报道相符。在自身免疫反应中，Th2细胞以及Theg细胞调控IgG4的合成与分泌，机体在炎症反应介导下，IgG4分泌增加[12]。Graves眼病具有上述相似的炎症反应机制，也与Th2细胞以及Theg细胞介导的炎症反应有关，这可能是Graves眼病患者血清IgG4水平升高的原因[13]，而且血清IgG4水平越高，炎症反应越严重，疾病活动性越高，表现为Graves眼病的症状越严重。Graves眼病患者经过大剂量糖皮质激素治疗后相关症状明显好转，血清IgG4水平下降[14]；高水平血清IgG4的Graves眼病患者似乎能取得更好的疗效，而低水平血清IgG4的Graves眼病患者治疗有效率相比前者较差，提示IgG4可能作为靶点影响糖皮质激素的治疗效果。

甲状腺免疫抗体是Graves眼病重要的诊断指标。本研究结果显示，与对照组比较，Graves眼病轻度、中重度和极重度组TGAb、TPOAb、TRAb阳性检出率均显著升高，但3组间TGAb、TPOAb、TRAb阳性检出率比较差异无统计学意义，这与上述抗体在Graves眼病中的检出率均较高，加上本研究样本量有限，导致不同病情严重程度患者的抗体检出率相差不大有关。本研究结果显示，血清IgG4与TGAb阳性、TPOAb阳性、TRAb阳性呈正相关，与Luo等[15]研究结果一致。TGAb、TPOAb、TRAb分别与甲状腺球蛋白、过氧化物酶、促甲状腺素受体结合后，相互作用激活自然杀伤细胞，攻击甲状腺细胞以及携带甲状腺相关受体的眼肌、眼球后组织，引起Graves眼病，IgG4可能也在其中发挥一定作用，但具体的免疫学机制尚不明确。

综上所述，外周血IgG4与Graves眼病严重程度、甲状腺免疫抗体具有相关性。Graves眼病导致外周血IgG4水平升高的机制还需今后开展动物实验、免疫组织化学研究进一步探讨。