混合系激酶区域样蛋白与冠心病的相关性研究

徐静，蔡芬

（广州市中西医结合医院检验科，广东 广州 510800）

0 引言

随着社会经济的不断发展，人们生活水平逐步提高，人口老龄化日趋严重，冠心病(CHD）发病率逐年递增，且年轻化趋势明显。我国冠心病的平均发病率为6.5%，多见于40岁以上的中老年人，男性多于女性，脑力劳动者多于体力劳动者，城市多于农村[1]。因此，CHD早诊断、早发现和早治疗显得尤为重要。

近年来，大规模临床试验已证实，炎症反应和氧化应激在冠心病的发生、发展中起着重要作用[2-4]。程序性坏死是近年来发现的一种新的死亡模式，由死亡受体介导，通常在凋亡被抑制的情况下发生，具有坏死细胞的形态学特征，引起炎症反应加重，并释放大量炎症介质和损伤相关分子，参与神经退行性疾病和缺血性心血管疾病等的发生[5]。

混合系激酶区域样蛋白（MLKL）在人体多个器官中广泛存在，在不少肿瘤组织中，如卵巢癌[6]等呈现低表达状态，并参与多种肿瘤的程序性坏死，干预肿瘤细胞的自噬和凋亡[7]，抑制肿瘤化疗耐药[8]。MLKL已被证明在TNF诱导的程序性坏死下游通路中起着重要作用[9]，然而国内外关于MLKL蛋白与心血管疾病的研究并不多见。C反应蛋白（CRP）是一种由肝脏合成的非特异性炎症标志物，而心肌标志物在心血管疾病中有着重要作用。本研究检测CHD患者血清MLKL、CRP和心肌标志物（cTnT, MYO,CK-MB,NT-ProBNP）水平，分析其相关性，旨在了解MLKL与CHD之间的关系，为CHD诊断、病变程度及预后提供新的实验室依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年2月至2021年2月在我院心内科住院的CHD患者100例。其中AMI组30例，男22例，女8例，年龄44～78岁；UA组35例，男27例，女8例，年 龄43～78岁；SA组35例，男26例，女9例，年龄34～76岁。以上患者均排除严重的肝肾疾病，结缔组织病、风湿性心脏病、肿瘤、血液系统疾病，曾接受经皮冠脉介入治疗（PCI）,并在近一个月未服用抗炎药及阿司匹林等NSAID。以上患者均签署知情同意书。本研究经我院伦理委员会批准。

1.2 方法

收集各组患者的既往病史、临床资料和辅助检查结果。既往史包括：吸烟史、家族史、高血压病史、糖尿病病史、PCI史、冠脉旁路移植术等；临床资料包括：出院诊断、年龄、性别等；辅助检查结果包括：心电图、肝肾功能、血脂、心肌标志物等。患者入院后6h内采集静脉血8～10mL,分离血清后在我院检验科使用Olympus AU5400全自动生化分析仪（日本）和ROCHE cobas601（瑞士）及配套试剂统一检测。采用江苏晶美生物试剂公司生产的ELISA试剂盒检测血清MLKL水平，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学处理

数据采用SPSS 21.0进行统计分析。计数资料采用例数（%）表示，组间比较采用卡方检验；正态分布的计量资料以±s表示，组间比较采用t检验；非正态分布的计量资料采用中位数（四分位间距）表示，多组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AMI组、SA组、UA组及正常对照组MLKL水平比较

AMI组、SA组、UA组三组的MLKL水平高于正常对照组（P均＜0.05），并且呈现AMI组＞UA组＞SA组的趋势，见表1。

2.2 AMI组、SA组、UA组三组的cTnT, MYO, CKMB, NT-ProBNP, TCHO, TG, HDL-C, LDL-C, CRP水平的比较

cTnT, CK-MB水平在AMI组最高，在SA组最低，并且呈现AMI组＞UA组＞SA组的趋势（P均＜0.05），MYO水平在UA组高于SA组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 各组血清MLKL水平比较(±s)

表1 各组血清MLKL水平比较(±s)

注：**P＜0.01，#表示与AMI组比较P＜0.05,△表示与SA比较P＜0.05,※表示与UA比较P＜0.05

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表2 各组相关指标比较

3 讨论

近年来，随着人民生活水平的提高和饮食习惯的改变，冠心病的发病率呈逐年上升的趋势，严重威胁人民身体健康，给社会造成极大的负担。因此，加强CHD防控，提高CHD诊治水平成为医务人员面临的重要任务。

冠心病的病理生理学特征为炎症，动脉粥样硬化（AS），血栓形成。单核细胞粘附到易发生AS部位的内皮细胞上，穿过内皮细胞层迁移到内皮下分化成巨噬细胞，攫取了氧化低密度脂蛋白而成泡沫细胞，在管壁上形成脂肪条，继而在此基础上形成AS斑块[10]。MLKL是目前研究发现的程序性坏死最重要的下游效应器。MLKL激酶结构域的第357位苏氨酸和358位丝氨酸在细胞程序性坏死启动后被PIP3磷酸化，磷酸化的MLKL由单体状态向寡聚体状态转化，寡聚化的MLKL结合磷酸肌醇和心肌磷脂，在细胞膜上形成通透性孔道，破坏膜的完整性，引发细胞坏死[11]。坏死的细胞裂解释放出内含物，引起炎症反应。炎症细胞粘附在血管内皮上，激活单核细胞和T淋巴细胞，从而启动和加速动脉粥样硬化发展。本文研究结果显示CHD患者中AMI组、SA组、UA组三组的MLKL水平高于正常对照组（P均＜0.05），并且呈现AMI组＞UA组＞SA组的趋势，表明MLKL水平与CHD患者的诊断和分型有关。

大量研究表明，炎症反应与AS密切相关。CRP是一种由肝细胞产生的急性时相反应蛋白，具有较好的敏感度。有研究表明，CRP通过增大斑块内脂质核心，加强斑块内炎症活动，减少AS斑块纤维帽厚度，促进AS的不稳定性[12]。NTProBNP是一种心脏神经激素，临床上通过检测静脉血中NTProBNP 的水平来反映心功能情况，cTnT是目前公认的心肌坏死标志物，是心肌的一种调节收缩性蛋白，是AMI诊断的金标准[13]，有研究显示，cTnT累积释放量不但能反映心肌梗死面积大小，且上升程度与死亡风险存在量效关系，并能评估心肌梗死患者的风险及预后[14]。肌红蛋白(Myoglobin，MYO)是一种小分子蛋白，由珠蛋白与正铁血红素(Heme)结合而成。肌红蛋白存在于肌肉中，心肌中含量特别丰富。心肌受损后2～4h，MYO在血中浓度开始升高，6～10h后，几乎所有AMI患者MYO都升高。CK-MB一直是诊断AMI重要指标之一。CK-MB并不是心肌所特有的，当骨骼肌损伤或肾功能衰竭时，血清CK-MB浓度也会升高。由于多数CHD患者临床症状不明显，心电图改变不典型，而冠脉造影检查费用昂贵，故心肌标志物的应用为CHD的诊断和治疗提供了有力的证据。本次研究结果显示CHD患者中cTnT、CK-MB水平增高，呈现AMI组＞UA组＞SA组的趋势，MYO水平呈现UA组＞SA组的趋势，更有力证明了上述4项心肌标志物的水平与CHD发生和发展有着密切关系，并且对CHD患者的预后判断及病情的随访有着重要的价值。

综上所述，血清MLKL水平与CHD的发生有关。MLKL水平对CHD病情的诊断有一定的临床意义。但本研究样本量较少，并且受限于研究周期等多方面原因，其参与CHD的具体机制并没有得到充分的阐述，今后还需加大样本量进行研究。