延安地区女性宫颈HPV感染特征及基因分型研究

石 芳，赵建芳

(北医三院延安分院病理科，延安市中医医院，陕西 延安 716000)

HPV是一种属于乳多空病毒科的乳头状瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。已分离出130多种HPVDNA，其中30多种与宫颈感染和病变有关。根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种。低危型主要引起生殖道肛周皮肤和阴道下部的外生性湿疣类病变、扁平湿疣类病变和宫颈低级别上皮内病变(CIN I级)，多呈一过性，可自然逆转；高危型主要导致宫颈高级别上皮内病变(CIN II-III级)和宫颈癌的发生，持续高危型HPV感染的CINⅠ极易进展为CIN Ⅱ～Ⅲ。因此，对HPV进行筛查，统计HPV感染数据，对比分析，可为临床预防宫颈病变、宫颈癌筛查及治疗提供重要依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2020年5月期间在北医三院延安分院(延安市中医医院)进行HPV检测的体检、“两癌”筛查及就诊患者，共计5472例。年龄20～74岁，平均年龄38.17岁。

1.2 仪器与试剂

核酸芯片检测仪(型号BHF-VI)、人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒(生物芯片法)均购自北京博晖创新生物技术股份有限公司。PCR扩增与斑点法均采用该仪器和试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 以专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。临床医师先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，取出宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处将宫颈柄刷折断，旋紧洗脱管盖，做好样本标识，并保持洗脱管直立放置。样本一经采集，应尽快送检；样本室温保存不超过2 h，2～8℃保存不超过1 d，-20℃保存不超过3个月，避免反复冻融。

1.3.2 检测方法 ①样品处理充分洗脱宫颈刷，并在管壁上挤干。取1 mL洗脱液转移到1.5 mL离心管中，13000 rpm离心10 min，弃部分上清液，保留约100 μL，使用移液器轻轻吸打3～5次，混匀待用。②将前期处理好的样本，手动使用移液器取200 μL加入微流控芯片加样孔，关闭仪器舱门。③核酸提取、PCR扩增、反向斑点杂交参考仪器说明书进行。

1.3.3 结果判定 采用微量点样技术，将各位点检测探针与各种质控探针固定在杂交膜上，其中24种亚型HPV检测探针、空白对照、阴性对照各1个点，内参质控探针有3个不同浓度，每个浓度各1个点，显色质控探针重复3个点。探针排布图如图所示(见表1)。

表1 探针排布图

①阳性结果判定：杂交膜的SP点(3个)均有阳性斑点，内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点，且有HPV探针阳性斑点出现，提示样本为该探针对应亚型阳性；

②阴性结果判定：杂交膜的SP点(3个)均有阳性斑点，内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点，且无HPV探针阳性斑点出现，提示该样本HPV为阴性。

1.3.4 HPV检测类型 检测24种人乳头状瘤病毒核酸亚型(18种高危型：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83；6种低危型：HPV6，11，42，43，44，81)。

1.4 统计学方法

用Excel 2007录入2018年1月至2020年5月所有数据资料建立数据库，分析和计算HPV不同亚型感染率、不同年龄组HPV感染率。采用SPSS 20统计学软件进行数据分析。

2 结果

2.1 HPV检出情况分析

受检妇女5472例中HPV感染者1043例，感染率19.06%。主要为单一高危HPV感染，感染率为12.02%；低危单一HPV感染率为2.19%；多重感染HPV率为4.82%(见表2)。

表2 2018年1月至2020年5月延安地区5472例妇女HPV感染情况分析

2.2 阳性标本中HPV亚型分型情况

1043例HPV感染者中，占前五位的高危型分别为：HPV16(12.8%)、HPV52(8.8%)、HPV58(7.6%)、HPV56(4.9%)、HPV51(3.9%)；占前三位低危分型分别为HPV42(3.3%)、HPV6(2.2%)、HPV44(2.2%)(见表3)。

表3 2018年1月至2020年5月1043例HPV感染各亚型分布情况

续表3

2.3 不同年龄组HPV感染的情况分析

将1043例感染者按5个年龄组的划分，5组中30～39岁年龄组感染阳性占比最高，为40.27%；40～49岁年龄组感染阳性占比次之，为27.52%；20～29岁年龄组感染阳性占比为14.77%；20～59岁年龄组感染阳性占比为4.31%(见表4)。

表4 1043例HPV感染者不同年龄组HPV感染情况分析

3 讨论

本次研究通过对延安地区体检、“两癌”筛查及就诊患者5472例妇女进行HPV检测，发现HPV阳性标本1043例，总体检出率为19.06%。主要为单一高危HPV感染，检出率为12.02%；单一低危HPV检出率为2.19%；多重感染HPV率为4.82%。低于王蕾，等[1]对陕西地区9749例女性HPV基因分型检测的总体感染率31.26%，也比广东东莞30.18%的HPV感染率低[2]。这些差异可能与当地的经济水平、人文环境、人员流动性有关。

本研究发现HPV高危感染中，HPV16、HPV52、HPV58位居前三位，与2012年至2016年原荣，等[3]对延安地区高危型别感染前三位基本一致；但与其对低危分型前三位HPV81、HPV11、HPV6不一致，本次研究发现低危感染中，HPV42、HPV6、HPV44占据前三位，应该与HPV低危型多呈一过性感染、反复感染、可自然逆转有关。同时研究发现，30～39岁、40～49岁的妇女，感染率远高于其他年龄组，这可能与这个年龄段妇女的性生活比较活跃有关，感染风险较高。通过研究对比，发现近十年，延安地区HPV感染亚型分布比例基本相差不大。

HPV感染普遍存在，79%的普通人会在一生中感染至少一种HPV亚型，而首次HPV感染时间往往与首次性行为相近，性传播是肛门和生殖器HPV传播的主要途径。我们知道宫颈癌、女阴癌，肛门癌及口咽癌都与高危型HPV感染相关，其中85%以上感染有16/18型HPV；低危型HPV则主要诱发非恶性病变，其中90%生殖器疣与6/11型HPV感染有关。要避免这些疾病的发生，就需要人体产生相应的抗体。但人体感染HPV后，并不一定产生相应的抗体，2006年澳大利亚一项血清学调查表明，感染HPV的女性中只有大概60%的人能够产生相应的抗体。因此HPV疫苗成为宫颈癌及其他HPV相关疾病预防的另一有效手段。目前全球已上市HPV疫苗有三种，分别为2价(预防HPV16/18亚型)、4价(预防HPV6/11/16/18亚型)和9价(预防HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58)HPV疫苗，这些疫苗覆盖了现阶段最高风险的HPV致病亚型。因此，应该提倡适龄人群大范围接种。

但是有一个问题值得大家重视，在HPV疫苗大范围接种后，可能改变自然界中的HPV亚型分布比例，HPV疫苗非覆盖的其它高危亚型可能发展成为新的优势亚型。因此需要重视定期进行地区及全国范围内的HPV基因分型研究，为HPV新型疫苗研发及与HPV相关疾病的发生、发展、治疗提供可靠数据支持及重要临床证据。