益心泰有效组分对慢性心力衰竭兔肝脏组织形态的影响

魏佳明，刘承鑫，李 雅，郭志华，匡 琳，李 卉

(湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)

慢性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是以呼吸困难、水肿和乏力为主要临床表现的临床综合征，是心血管疾病防治中的热点和难点。近年来，中医药治疗CHF的作用越来越得到重视。中药复方有效组分是当前研究的一大热点，研究其效应机制有助于更好发挥中医药治疗疾病的优势作用。益心泰是具备抗心力衰竭作用的中医临床科研方，前期研究表明，益心泰有效组分具有改善心力衰竭心肌病理结构的作用，其效用有待进一步研究。中医认为心力衰竭病本于心，且与肝密切相关。本研究拟以兔CHF模型为研究对象，观察益心泰有效组分干预后兔的室间隔厚度(interventricular septal thickness，IVST)、左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness，LVPWT)等心脏超声指标，及心脏指数、肝脏指数与肝脏病理结构的变化，进一步探讨益心泰有效组分对CHF兔的作用。

1 材料

1.1 实验动物 120只健康新西兰兔，普通级，体质量1.5～2.0 kg，雌雄各半。购自湖南太平生物科技有限公司，动物生产许可证编号为SCXK(湘)2015-0004，合格证号为43608300000615。不限制饮食，通风，室温约23 ℃，湿度50%～60%，正常光/暗周期，分笼饲养。实验获得湖南中医药大学动物实验伦理审查委员会批准，批准文号为LL2018010801。

1.2 实验药物 益心泰有效组分：黄芪、丹参、红花、猪苓、泽泻等购于湖南中医药大学第一附属医院，按照3∶1∶1.5∶1∶1的配伍比例，采用系统溶剂法与大孔树脂吸附法相结合，对益心泰复方中4个不同极性部位的药效组分进行分离，根据最佳工艺条件，分离得到益心泰有效组分提取液，冷冻干燥后得提取物(含总皂苷372.4 mg/g、总黄酮98.3 mg/g、总多糖445.8 mg/g)；氯沙坦钾(每片50 mg，批号 H20000371)：杭州默沙东制药有限公司；注射用盐酸多柔比星(每瓶10 mg，批号 H44024361)：深圳万乐药业有限公司；丙基硫氧嘧啶(每片50 mg，批号 H32020795)：苏州东瑞制药有限公司；乌拉坦(批号 94300)：Sigma；生理盐水(每瓶500 mL，批号 H51021158)：四川科伦药业股份有限公司。

1.3 实验试剂与仪器 多聚甲醛(批号 16005)，苏木精(批号 H9627)，伊红(批号 E4009)：Sigma；石蜡：河南天孚化工有限公司；超声心动图机(型号 Sequoia 512)：西门子公司；石蜡轮转切片机(批号 RM2235)：Leica公司；电子秤：湘仪天平仪器设备有限公司。

2 方法

2.1 动物分组及模型制备 参考文献[5-6]，采用阿霉素耳缘静脉注射+丙基硫氧嘧啶灌胃复制兔慢性心力衰竭模型。采用随机方法将20只实验兔设为正常对照组，余下100只用于模型复制。将兔固定于手术台，给予丙基硫氧嘧啶灌胃，剂量按兔每日进食量的0.2%，每日1次；分别于每周三、周日下午耳缘静脉注射阿霉素溶液1 mg/kg，浓度为1 mg/mL。正常对照组给予等次等容量的生理盐水灌胃与耳缘静脉注射。模型复制8周后第1天，行超声提示模型兔较正常对照组兔IVST、LVPWT上升，差异有统计学意义(

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05)，同时血清脑利钠肽水平升高，差异有统计学意义(

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05)，伴有精神萎靡，水肿，抓起反抗下降，心率和呼吸频率加快，耳温降低，尿量减少等心力衰竭表现，提示模型复制成功。模型复制过程中，模型兔共死亡16只，均死于腹泻。将模型复制成功的模型兔按完全随机设计方法分为5组：模型组(17只)，益心泰有效组分低剂量组(17只)、中剂量组(17只)、高剂量组(17只)，氯沙坦钾组(16只)。

2.2 干预方法 于模型复制后第1周开始灌胃，根据成人体表面积换算，结合临床用药经验和既往实验研究，确定益心泰有效组分低、中、高剂量组分别为2.1、4.2、8.4 g/kg，氯沙坦钾组(制成氯沙坦钾悬液)2.75 mg/kg，正常对照组与模型组灌服同等容积的蒸馏水，各组灌胃量均为每次10 mL/kg，均每日1次，连续4周。

2.3 检测指标及方法

2.3.1 一般情况 观察兔精神状态、心率、水肿等一般情况。

2.3.2 心脏超声检测 麻醉满意后将兔平卧位固定，运用西门子Sequoia 512超声心动图机，探头频率3～8 MHz，于心前区取左室长轴最大直径处，M型超声标记室间隔和左室后壁收缩末与舒张末期心内膜位置，软件自动计算兔IVST、LVPWT等指标数值，取5个心动周期读数的平均值。

2.3.3 心脏指数、肝脏指数测量 空气栓塞法处死兔后，称质量，开胸，取心脏、肝脏，洗尽血液，剪去残余大血管，滤纸吸干后称质量。按照“脏器指数=脏器质量/体质量”公式计算心脏指数、肝脏指数。

2.3.4 肝脏组织形态学检查 处死兔后，取部分肝脏组织，4%多聚甲醛固定组织并修整，经梯度乙醇脱水，透明，浸蜡，包埋，制备切片(厚4～5 μm)，烤片，苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察并拍摄图片。

3 结果

3.1 益心泰有效组分对CHF兔一般情况的影响 各用药组兔精神萎靡、水肿等情况均有所改善，心率较前平稳。益心泰有效组分中、高剂量组和氯沙坦钾组改善程度更为明显，优于益心泰有效组分低剂量组。模型组无好转，并且其中部分实验兔上述症状有所加重。整个用药干预过程中，模型组和益心泰有效组分低剂量组兔各死亡3只，中剂量组兔死亡2只，益心泰有效组分高剂量组、氯沙坦钾组兔各死亡1只，死因均为腹泻，正常对照组兔无死亡。

3.2 益心泰有效组分对CHF兔心脏超声指标的影响 与模型组比较，益心泰有效组分低、中、高剂量组与氯沙坦钾组IVST、LVPWT均明显下降(

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05)。与益心泰有效组分低剂量组比较，益心泰有效组分中、高剂量组和氯沙坦钾组IVST和LVPWT均降低(

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05)。见表1。

表1 益心泰有效组分对CHF兔心脏超声指标的影响

3.3 益心泰有效组分对CHF兔心脏指数、肝脏指数的影响 与模型组比较，各用药组心脏指数、肝脏指数均降低 (

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05)。与益心泰有效组分低剂量组比较，益心泰有效组分中、高剂量组和氯沙坦钾组心脏指数、肝脏指数均明显降低 (

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05)。见表2。

表2 益心泰有效组分对CHF兔心脏指数、肝脏指数的影响

3.4 益心泰有效组分对CHF兔肝脏组织形态的影响 模型组肝小叶区部分细胞出现明显水肿，胞浆稀疏，胞核皱缩、溶解及胞膜破裂，汇管区有大量炎症细胞浸润。益心泰有效组分低、中、高剂量组和氯沙坦钾组以上情况较模型组依次有不同程度的减轻。正常对照组肝脏组织形态结构大致正常，未见病理改变。见图1。

注：A.正常对照组；B.模型组；C.益心泰有效组分低剂量组；D.益心泰有效组分中剂量组；E.益心泰有效组分高剂量组；F.氯沙坦钾组；

4 讨论

随着中国人口老龄化的加速，心力衰竭的患病率呈逐年上升趋势，给人民生活及经济社会发展带来了严重负担。目前对于心力衰竭的治疗目的主要是在改善症状的基础上更注重提高患者生活质量，遏止心肌重构的进一步发展。近年来，中医药治疗CHF效果显著，在减轻症状、提高生活质量、延长寿命、减少不良反应等方面凸显优势。

本研究以兔CHF模型为研究对象，并通过益心泰有效组分对其进行干预，实验结果显示，模型组兔IVST、LVPWT较正常对照组上升(

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05)，心脏指数、肝脏指数升高(

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05)，提示CHF兔心脏、肝脏质量病理性增加，结合肝脏组织形态学检查，进一步说明其肝脏存在病理结构改变。相关研究也表明，心力衰竭的同时存在着肝脏的功能损伤及结构改变。与模型组比较，各给药组兔IVST、LVPWT明显降低(

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05)，心脏指数、肝脏指数下降(

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05)，结合肝脏组织形态学结果说明，益心泰有效组分能下调心脏、肝脏质量病理性增加，改善其肝脏组织形态的损伤，缓解CHF。

中医认为，肝主藏血，且能化精为清血，如肝藏血与化清血功能失用则心无血可主。“肝生筋，筋生心”，肝气通乃心气和，“肝气滞则心气乏”。肝禀春木生发之性，喜条达而恶抑郁，若气机畅达，则气行带动血行、水行，若气机郁滞，则血行迟滞，脉道不通，水道失调，发为心力衰竭。心火受难，更易及于肝木，所谓“子盗母气”。若肝气日渐亏耗，瘀血、水湿等邪不除，则气机愈不循其经，津液愈不走其道，瘀血复又生瘀血，形成恶性循环。肝主情志，有研究发现，心力衰竭患者往往伴有情志抑郁，产生“双心疾病”。研究表明，从“心肝同治”角度治疗心力衰竭的疗效肯定。益心泰在组方时针对以上病机，在处理脏腑关系时兼顾了心肝两脏。方中以黄芪补气升气、利水消肿，以丹参、红花同入心肝，功在活血化瘀，另以猪苓、泽泻利水渗湿。诸药共奏益气活血利水之功。本研究通过观察益心泰有效组分干预兔CHF模型的效果，比较各组兔IVST、LVPWT，心脏指数、肝脏指数及肝脏组织形态的变化。结果表明益心泰有效组分能降低CHF兔IVST、LVPWT，降低心脏指数、肝脏指数，减轻肝脏病理结构损伤，改善CHF，提示益心泰抗心力衰竭的作用机制可能与“心肝同治”有关。

目前，心力衰竭的治疗机制研究多从心脏指标出发，但中药复方诊治过程以中医整体观和辨证论治为其特色，本研究从“心肝同治”角度进行实验研究，在丰富益心泰有效组分实验研究内容的同时，为心力衰竭的中医辨证论治提供了实验依据，但研究尚不深入，其机制仍有待深入探索。