苯妥英钠液相含量测定方法的研究*

吴叶群，黄宇婷，廖清怡，丘小萌，罗颖，贾进文，叶东，刘智鹏，李艳萍，聂鑫

(佛山科学技术学院，广东佛山 528000)

苯妥英钠是苯妥英的钠盐[1]。由于苯妥英钠具有广泛的生物学活性和药理治疗作用，在医学上除了被用来作为抗癫痫发作的药物，还常用于治疗轻度高血压、三叉神经痛和心律失常[2]。目前，对于苯妥英钠含量的测定方法有许多，包括紫外分光光度法、玻碳电极伏安法、毛细管区电泳法、单扫描示波极谱法、高精度散射光度滴定法、高效液相色谱法等[3-9]。这些方法均有其优缺点，其中使用较广泛的高效液相色谱法具有稳定、快速、准确、干扰因素少的特点，《中国药典》2015版采用高效液相色谱法对苯妥英钠进行含量测定[10]。现有文献多采用高效液相色谱法对苯妥英钠的制剂如复方制剂、凝胶剂、注射剂、片剂等进行含量测定[11-13]，笔者对实验室合成的苯妥英钠原料进行含量测定，相关研究还较少。

1 试验部分

1.1 主要仪器

主要试验仪器见表1。

表1 主要试验仪器

1.2 主要试验原料

主要试验原料见表2。

表2 主要试验原料

1.3 色谱条件考察

1.3.1 流动相的选择

称取适量苯妥英钠(分析纯)置于100 mL容量瓶中，加少量甲醇振摇至溶解，若不能溶解完全则使用超声清洗仪超声处理，待全部溶解后摇匀且定容，稀释成质量浓度约为100 μg/mL的溶液，用于流动相的探索。选取225 nm为检测波长，以甲醇为溶剂，在波长与溶剂一定的条件下，改变流动相甲醇与蒸馏水的体积比，观察并记录苯妥英钠的出峰时间，对比发现：随着甲醇比例的增大，出峰时间依次递减，在保证峰型前提下，为节约和环保，选择了较短的出峰时，对应的流动相配比为甲醇与水的体积比为57∶43，出峰时间约为4.4 min。

1.3.2 波长的选择

精密称取0.1014 g苯妥英钠标准品A，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容。取上述溶液1 mL稀释于100 mL容量瓶中，即为标准品待测溶液。用紫外分光光度仪对上述溶液进行测定，苯妥英钠最大吸收峰在205 nm左右，参考药典法和其他参考文献，并结合高效液相色谱图谱，发现220 nm时的峰形最好，最终确定以220 nm为检测波长。紫外扫描图谱、苯妥英钠标准品液相色谱图和试样液相色谱图分别见图1、图2及图3。

图1 紫外扫描图谱

图2 苯妥英钠标准品液相图谱

图3 苯妥英钠试样液相图谱

1.3.3 溶剂的选择

分别使用甲醇和(φ)50%的甲醇溶液溶解苯妥英钠标准品，并分别进行测定，比较两者色谱图发现以(φ)50%甲醇为溶剂时峰形更好，因此选择(φ)50%甲醇为标准品和试样的溶剂。

1.3.4 色谱条件

根据上述试验进行色谱条件优化，最终将流动相定为甲醇与水(体积比为57∶43)，将溶剂定为(φ)50%甲醇，检测波长为220 nm，流速为1 mL/min，柱温为室温。

1.3.5 标准品溶液的制备

精密称取0.049 7 g苯妥英钠标准品A，以(φ)50%甲醇为溶剂，定容于50 mL容量瓶，记为原液，取原液20 mL，稀释于100 mL容量瓶，记为稀释液，取稀释液1，2，4，6，8，10 mL，分别加入50 mL容量瓶，配制成质量浓度为3.976，7.952，15.904，23.856，31.808，39.760 μg/mL的标准品溶液。

1.3.6 线性关系考察

按上述色谱条件，对上述6个质量浓度的苯妥英钠标准品溶液进行测定，每次取20 μL，且每个质量浓度的试样连续进样3次，记录峰面积，得到的标准曲线见图4。

图4 标准曲线

由图4可见：在质量浓度为3.976~39.760 μg/mL时，y=0.020 8x－0.470 8(R2=0.999 5)，线性关系良好。

2 结果与讨论

2.1 精密度试验

精密称取0.048 2 g苯妥英钠标准品B，置于50 mL容量瓶并用(φ)50%甲醇溶解定容为原液。取原液10 mL置于50 mL容量瓶，稀释定容得稀释液，再取稀释液4 mL置于50 mL容量瓶稀释定容得测定液，在色谱条件下进行测定，每次进样20 μL，连续进样6次，精密度试验结果见表3。

表3 精密度试验

由表3可见：计算得峰面积的RSD为1.53%，表明精密度良好。

2.2 重复性试验

精密称取0.052 3 g苯妥英钠试样1#，置于50 mL容量瓶中，用(φ)50%甲醇溶解定容为原液，取原液10 mL加入到50 mL容量瓶，用(φ)50%甲醇稀释定容得稀释液，取稀释液4 mL加入到50 mL容量瓶中稀释定容，得测定液，按上述色谱条件下进行测定，试验结果见表4。

表4 重复性试验

表4 中测得的峰面积数据带入已求得的线性方程，计算出试样1#苯妥英钠的平均含量(w)为73.60%，RSD为0.95%，表明重复性较好。

2.3 稳定性试验

取2.2节中的测定液，分别在0，1，2，3，4 h进样测定，记录峰面积平均值，结果见表5。

表5 稳定性试验

由表5可见：在0~4 h，苯妥英钠峰面积的RSD为3.06%，表明该方法稳定性较好。

2.4 加样回收试验

依次精密量取2.2节中试样1#稀释液2，2.5，3 mL，分别加入50 mL容量瓶中，再依次精密加入2.1节中苯妥英钠标准品B稀释液2，2.5，3 mL，用(φ)50%甲醇稀释并定容。分别取上述3个不同质量浓度的对照品-试样混合液进行测定，每次进样20 μL，进样3次，记录峰面积数值，试验结果见表6。

由表6可见：平均回收率为76.03%，RSD为1.68%，表明采用该测定方法是可行的，分析原因可能是某些因素影响了回收率。前期考虑可能因称量、配制过程中不够精确、规范导致，为此进行了2次加样回收试验，但结果相差不大，最终分析可能是由于该试验是分2个阶段进行的，且时间相隔较长，仪器的状态、所用试剂及操作者均会对试验数据产生一定影响，加样回收率所用的标准品与制作标准曲线所用的标准品厂家不同，加样回收率所用的标准品B的含量可能与标示量相差较大，导致标准品的真实加入量低，导致计算的加样回收率也偏低。

表6 加样回收试验

2.5 试样含量的测定

精密称取苯妥英钠试样2#0.051 7 g，置于50 mL容量瓶并用50%甲醇溶解定容得原液，精密量取原液10 mL，置于50 mL容量瓶并用(φ)50%甲醇稀释定容为稀释液，再量取稀释液4 mL，置于50 mL容量瓶并用(φ)50%甲醇稀释定容为试样测定液，取试样测定液进行测定，每次进样20 μL，共3次，记录峰面积数值，结果见表7。

表7 试样含量测定

表7 中峰面积数据带入线性方程，得到苯妥英钠试样2#的含量(w)为67.00%，表明试样2#中杂质含量较高。

3 结论

笔者在之前高效液相色谱测定苯妥英钠含量的研究基础上，对流动相、检测波长及溶剂均进行了摸索和优化。优化后的检测方法可以对苯妥英钠合成试验产物进行含量测定，具有检测时间短，易操作的优点，较药典法成本更低。该检测方法的精密度、重复性、稳定性结果均较好，仅加样回收试验结果不太理想，平均回收率仅为76.03%，应进一步优化加样回收试验结果。