用HPLC法测定红茴香注射液中槲皮苷的含量

2021-10-18陈向梅中国人民解放军总医院医疗保障中心药剂科北京100048

药学实践杂志 2021年5期

成程，陈向梅，马健，赵氚（中国人民解放军总医院医疗保障中心药剂科，北京 100048）

红茴香注射液是由红茴香根皮经提取制成的灭菌水溶液，具有消肿散瘀，活血止痛作用。临床用于腰肌劳损，关节或肌肉韧带伤痛等。总黄酮是红茴香注射液的主要成分。原标准以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定总黄酮的量，专属性不强。故笔者参考《中国药典》[1]，以槲皮苷为测定对象，采用HPLC法测定红茴香注射液中槲皮苷的含量[2-5]获得满意结果, 现报告如下。

1 仪器和试药

1.1 仪器

Agilent 1100系列型高效液相色谱仪；HPChemstation色谱工作站。

1.2 试药

乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。槲皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 (批号：111538-200301，含量测定用), 红茴香注射液由浙江泰康药业有限公司提供(批号：20040730)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Dikma C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(25∶75)，流速1.0 ml/min，柱温 30 °C，检测波长256 nm，进样量为10 μl。色谱柱的理论塔板数按槲皮苷峰计算大于3 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取槲皮苷对照品(120 ℃减压干燥至恒重)适量, 加甲醇制成每1 ml含0.1 mg 的溶液, 摇匀, 即得。

2.2.2 供试品溶液

精密吸取本品3 ml，置25 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液

取辅料作为缺样空白样品，按“2.2.2”项下方法制备。

2.3 专属性试验

分别取阴性对照溶液，对照品溶液及供试品溶液适量，滤过取续滤液 10 μl 注入 HPLC 仪，分别记录色谱图。实验结果表明，该方法专属性良好，阴性对照无干扰，结果见图1。

2.4 线性关系考察

精密称取经减压干燥24 h的槲皮苷对照品适量，加甲醇配成每l ml含槲皮苷0.215 0 mg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，以槲皮苷峰面积的积分值为Y，进样量为X(μg)，回归得线性方程Y=1 515.9X+57.088 2，r=0.999 8，表明在0.215～3.225 μg范围内呈良好线性关系。

2.5 重复性试验

取同一批供试品6份（批号：20040730），分别按供试品溶液制备法制备，按“2.1”项色谱条件测定。结果表明含量值分别为：1.187、1.189、1.197、1.196、1.196、1.198 mg/ml，RSD为0.40%（n=6），表明此方法重复性较好。

2.6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液（批号：20040730）10 μl，重复进样6次, 按“2.1”项下色谱条件测定。峰面积分别为2 214.51、2 217.06、2 232.75、2 236.86、2 250.09、2 190.69，RSD为0.86%（n=6），结果表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取同一批号供试品溶液（批号：20040730）10 μl，分别于0、0.5、1、2、8、12、24 h测定峰面积值，结果为2 220.96、2 223.36、2 230.08、2 235.78、2 246.88、2 200.44、2 227.17，平均峰面积为2 226.38，RSD为0.64%（n=6），结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

取已测定含量的样品6份，每份3 ml，分别加入槲皮苷对照品溶液10 ml（浓度为0.225 4 mg/ml），按供试品溶液的制备方法操作，进行回收率测定，结果分别为100.49%、99.33%、98.14%、99.82%、98.89%、99.65%，平均加样回收率为99.39%，RSD为0.82%（n=6）。