泽明降脂方对高脂血症大鼠血脂水平及相关炎症趋化因子的影响

刘睿 杨戈 尚坤 张欣 位佳琳 贺丹彤 位鸿

(长春中医药大学 1第一附属医院，吉林 长春 130117； 2基础医学院；3针灸推拿学院； 4药学院)

炎症免疫反应在冠状动脉性心脏病(CAD)的发病机制中起着重要作用，动脉粥样硬化(AS)是引起CAD重要的病理基础之一〔1～3〕，提示调脂药可能通过抑制炎症反应，起到稳定斑块的作用，临床上采用活血祛瘀利水消痰法治疗高脂血症取得明显疗效，本研究立足于此，通过观察泽明降脂方对高脂血症模型大鼠血脂水平及相关血清炎症趋化因子的影响，探索其改善机体脂肪代谢、防治高脂血症及相关病症的作用与机制，为新药的研发与推广奠定实验室基础〔4,5〕。

1 材料与方法

1.1实验动物 选用健康雄性SPF级Wistar大鼠60只，体重(200±20)g，购自长春中医药大学实验动物中心，动物许可证号：SCXK(吉)2016-0004。大鼠适应性饲养1 w，均单笼饲养，可自由饮水摄食。

1.2实验分组与动物模型制备 大鼠适应性喂养1 w后，采用随机数字表法抽取10只大鼠以普通饲料喂养，设为空白对照组，其余50只大鼠以高胆固醇饲料喂养。普通饲料配方为：55%碳水化合物，22%蛋白质，5%脂肪，5%纤维素，7%灰分。高胆固醇饲料配方为：在71.3%普通饲料的基础上，加入10%牛油、10%蛋黄粉、3%胆固醇、5%白糖、0.5%胆酸盐和0.2%丙硫氧嘧啶〔6〕。喂养4 w后，大鼠眼眶取血，测定血清三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平，以验证高脂血症动物模型造模成功。采用随机数字表法将50只高脂血症大鼠分为高脂模型组、药物对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组，每组10只大鼠。

1.3实验试剂与药品 辛伐他汀片(杭州默沙东制药有限公司生产，国药准字J2913068) ；TG试剂盒(批号：20180731)、TC试剂盒(批号：20180731)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒(批号：20180816)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(批号：20180817)，以上试剂盒均购买自南京建成生物工程研究所。白细胞介素(IL)-1β试剂盒、IL-6试剂盒、肿瘤坏死因子(TNF)-α试剂盒、单核细胞趋化因子(MCP)-1试剂盒，以上试剂盒均购买自南京森贝伽生物科技有限公司。

泽明降脂方由陈皮、清半夏、黄芩、绞股蓝等12味药物组成。将上述中药加入蒸馏水浸泡30 min，煮沸后以文火慢煎共60 min，过滤得煎液；剩余药渣再次加蒸馏水煎煮2次，煮沸后以文火慢煎共60 min，过滤得煎液；将3次煎液混合，放入60℃恒温水浴浓缩至1.2 g/ml，0℃冰箱冷藏备用。

1.4给药方法 造模成功后，药物对照组给予辛伐他汀0.01 g/kg，中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组分别给予剂量为3 g/ml、6 g/ml、12 g/ml(给药剂量参照文献〔7〕)，空白对照组以相同剂量的生理盐水代替，每日给药1次，连续给药8 w。给药期间，模型组、药物对照组、中药各剂量组继续以高胆固醇饲料喂养。

1.5标本采集 末次给药后禁食12 h以上，麻醉后采用普通无抗凝管从腹主动脉采血，室温静置2 h，离心(3 000 r/min，离心半径12 cm，15 min)，收集上清液，-20℃冷冻保存备检。

1.6血脂水平检测 按照试剂盒说明书测定大鼠血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。

1.7血清炎症趋化因子检测 按照试剂盒说明书测定大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1水平。

1.8统计学方法 采用SPSS22.0软件进行单因素方差分析或t检验。

2 结 果

2.1各组血脂水平变化情况 与高脂模型组比较，中药各剂量组TG、TC、LDL-C水平下降，均呈现显著性差异(P<0.05，P<0.01)，HDL-C水平上升，呈现显著性差异(P<0.05，P<0.01)。各项指标的差异随着用药剂量的增加而加大。见表1。

2.2各组血清炎症趋化因子水平变化情况 与高脂模型组比较，中药各剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1水平下降，均呈现显著性差异(P<0.05，P<0.01)。各项指标的差异随着用药剂量的增加而加大。见表1。

表1 各组血脂水平及血清炎症趋化因子水平比较

3 讨 论

高脂血症在中医学中虽然无此病名，但是《黄帝内经》中有关“膏”、“脂”等的论述和“眩晕”、“中风”等病症皆与此相关〔8,9〕。中医学认为，高脂血症主要由于饮食不节，偏嗜肥甘厚味，加以生活安逸，久坐少动，年老肾亏等原因，致脾失健运，水饮停聚为湿为痰，变生膏脂而成，其病位主要在肝、脾、肾三脏，属本虚标实之症〔10,11〕，本研究通过中医的辩证分析，得出以利水消肿，理气健脾，活血祛瘀，消食化痰为法的内服方剂——泽明降脂方，治疗痰瘀互结所致的高脂血症。

TG、TC、LDL-C、HDL-C是观测血脂水平的常用观测指标，能够真实反映出机体的血脂状况〔12,13〕。AS是高脂血症机体后期常见的病理反应，是一个复杂、慢性，进行性的一种疾病，也是诱发CAD的重要危险因素。有研究显示表明，慢性炎症反应在AS的发生发展中具有重要作用〔14,15〕。因此观测高脂血症机体中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1等细胞因子水平，对于全面评估降脂药物的临床疗效、探讨作用机制，具有积极意义。白细胞介素IL-1β，IL-6T、TNF-α主要由单核或者巨噬细胞产生，单核细胞趋化蛋白MCP-1则主要趋化单核细胞，这些细胞因子可由多种细胞产生，广泛作用于造血、神经及内分泌系统。具有多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性等作用特点。细胞因子与其受体集合后启动复杂的细胞内分子间的相互作用，最终引起细胞基因转录的变化。研究表明陈皮中的一种多甲氧基黄酮，可抑制脂肪组织中的TNF-α及IL-6等炎症因子的表达及氧化应激水平〔16〕；黄芩苷可使炎症因子水平降低，一氧化氮(NO)水平升高，提示可能通过抑制核因子κB炎症通路等途径对抗AS形成〔17〕；半夏中的大黄酚具有对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞的抑制作用〔18〕；在本研究中泽明降脂方的炎症因子水平降低可能与陈皮、黄芩、半夏有关。

本研究表明泽明降脂方对血脂具有良好的调节作用，能够减轻氧化应激反应，对高脂血症诱发的冠状动脉性心脏病具有良好的预防作用。泽明降脂方调节高脂血症机体的脂肪代谢与改善血清炎症趋化因子的能力与用药剂量的增加具有明显的正相关性，但最佳的用药剂量仍需进一步研究探索。