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人脑胶质瘤lncRNA PIK3CD-AS2表达及临床意义

2021-10-13郑江林汪珉杰姜晓兵

临床神经外科杂志 2021年9期
关键词:生存期胶质瘤脑组织

郑江林 王 旋 汪珉杰 姜晓兵

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,具有难治疗、易复发、生存期短的特点[1~3],特别是胶质母细胞瘤,中位生存期仅8 个月左右[4]。近年来,胶质瘤潜在的分子生物学标志物成为研究的重点。长链非编码RNA(long-coding RNA,lncRNA)是一类长度大于200 个核苷酸的非蛋白编码转录子,通过染色质修饰、转录修饰和转录后修饰等参与基因的表达调控,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、代谢、耐药等紧密相关[5,6]。本文探讨lncRNA PIK3CD-AS2在人脑胶质瘤中的表达情况及临床意义。

1 资料与方法

1.1 公共数据库检索 检索TCGA 数据库(https://portal.gdc.cancer.gov/)下载胶质瘤组织RNA测序数据及对应的临床数据。纳入标准为:①总生存期≥30 d;②WHO 分级明确;③IDH 突变、1p19q共缺失和MGMT 启动子甲基化数据完整。最终纳入符合标准的胶质瘤共531 例。检索GTEx 数据库(https://gtexportal.org/)下载1 152例正常脑组织的RNA测序数据作为对照。所有RNA 测序数据经过统一的标准化处理。

1.2 临床病例 收集2010 年9 月至2015 年6 月手术切除的原发性胶质瘤标本127例,其中男84例,女43例;年龄19~76 岁,平均(45.14±11.50)岁;WHO 分级Ⅱ级45例,Ⅲ级55例,Ⅳ级27例。所有病人均为首次手术且术前未行放化疗,术后均随访至2020 年6月或直至死亡。另收集2018 年1 月至2019 年10 月颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织标本38 例作为对照,其中男22 例,女16 例;年龄24~69 岁,平均(44.24±11.53)岁。本研究由华中科技大学同济医学院研究伦理委员会批准。

1.3 临床病例的lncRNA PIK3CD-AS2 的提取及检测 采用Trizol 提取总RNA,测定RNA 纯度和浓度,应用逆转录试剂盒(Takara RR036A)逆转录成cDNA,qRT-PCR 采用TB Green Premix Ex TaqⅡ(Takara RR820A),检测lncRNA PIK3CD-AS2 表达水平。引物序列:PIK3CD-AS2 正义链5'-GGGATCATAAATGCTTGCTGTT-3',反义链5'-CGTATTAGTTACTGGTTGCTGTT-3';内参GAPDH 正义链5'-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3',反义链 5'-TGGGTGGAATCATATTGGAACA-3'。采用2-△△Ct法进行相对定量分析,每个组织样品实验重复3次。

1.4 统计学分析 应用SPSS 25.0软件分析;定量资料以表示,采用t检验;定性资料采用χ2检验和Fisher 确切概率法检验;Kaplan-Meier 法绘制生存曲线,采用Log-rank 检验;多因素Cox 风险回归模型分析预后影响因素;P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 公共数据库分析结果 与正常脑组织(GTEx;n=1 152)相比,胶质瘤组织(TCGA;n=531)lncRNA PIK3CD-AS2 表达水平显著升高(P<0.001;图1)。胶质瘤WHO 分级越高,PIK3CD-AS2 表达水平明显增高(P<0.001;图1)。

图1 检索TCGA和GTEx数据库分析胶质瘤组织与正常脑组织lncRNA PIK3CD-AS2的表达情况

以PIK3CD-AS2表达水平中位数为界,将TCGA中531 例胶质瘤分为高表达组(265 例)和低表达组(266例)。多因素Cox风险回归模型分析显示,年龄增大、WHO 高级别以及PIK3CD-AS2 高表达是胶质瘤预后不良的独立危险因素(P<0.001,图3),而IDH突变和1p19q共缺失是胶质瘤预后较好的独立保护因素(P<0.05,图2)。生存曲线分析显示,高表达组总生存期较低表达组显著缩短(P<0.001;图3)。

图2 检索TCGA数据库应用多因素Cox比例回归风险模型分析胶质瘤预后影响因素

图3 检索TCGA 数据库应用生存曲线分析PIK3CD-AS2 表达水平与胶质瘤病人总生存期的关系

2.2 临床病例分析结果 与正常脑组织相比,胶质瘤组织lncRNA PIK3CD-AS2 表达水平显著升高(P<0.0001)。随胶质瘤WHO分级升高,PIK3CD-AS2表达水平也明显增加(图4)。以PIK3CD-AS2 表达水平中位数为界,将127例胶质瘤分为高表达组(63例和)低表达组(64 例)。多因素Cox 风险回归模型分析显示例,WHO 高级别以及PIK3CD-AS2 高表达是胶质瘤预后不良的独立危险因素(P<0.001;表1)。生存曲线分析显示,高表达组总生存期较低表达组显著缩短(P<0.001;图5)。

表1 临床收集的127例胶质瘤生存预后影响因素的Cox比例回归风险模型分析

图4 临床检测125例胶质瘤lncRNA PIK3CD-AS2表达水平

图5 生存曲线分析临床收集的127 例脑胶质瘤lncRNA PIK3CD-AS2表达水平与病人总生存期的关系

3 讨论

胶质瘤为中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,难以完全切除,术后易复发,预后极差,因此,寻找胶质瘤潜在的分子生物学标志物具有重要意义。Wu 等[7]发现lncRNA DUXAP10 通过HuR/Sox12 信号轴维持胶质瘤细胞的干细胞特性。Cai 等[8]发现lncRNA LINC0098能够通过CBX3介导的c-Met/Akt/mTOR 信号轴抑制胶质瘤细胞增殖。这表明,lncRNA参与胶质瘤的发生与发展过程。

lncRNA PIK3CD-AS2位于染色体1p36.22,大小为953 bp。Zheng 等[9]研究发现PIK3CD-AS2 在肺腺癌中高表达,并且通过PIK3CD-AS2/YBX1/p53信号轴促进肺腺癌细胞增殖。本文首先检索公共数据库进行生信分析,结果发现与正常脑组织比,胶质瘤组织lncRNA PIK3CD-AS2显著高表达,并且随胶质瘤WHO分级的升高,PIK3CD-AS2的表达也明显增加。这提示PIK3CD-AS2与胶质瘤的发生和恶性进展存在一定的关系。同时,本文还发现PIK3CD-AS2 高表达病人总生存期显著低于低表达病人。为验证数据库检索结果的可靠性,我们收集127 例临床胶质瘤病例进行分析,结果与公共数据库检索结果相符,进一步证实了PIK3CD-AS2作为胶质瘤分子生物学标志物的价值。

总之,lncRNA PIK3CD-AS2 在胶质瘤中高表达,可作为胶质瘤病人预后生物学标志物。

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