梅毒非特异性抗体与特异性抗体血清学检测的临床应用评价

赵 英，徐红星

梅毒螺旋体也叫苍白密螺旋体（TP），梅毒是由TP感染引起的一种性传播疾病。梅毒可分为先天性梅毒和后天性梅毒，主要通过血液、性传播和垂直传播，可侵犯人体全身各组织、器官，宫内感染可导致流产、早产，危害性比较大，近年感染率也在不断增长[1]。梅毒的诊断需依据病史、临床表现及血清学检测，但由于患者陈述的病史可能缺乏真实性，故梅毒诊断主要依据血清学检测。目前梅毒能完全治愈，早期发现非常重要。梅毒感染机体后可产生特异性抗体和非特异性抗体，目前梅毒非特异性抗体常用甲苯胺红未加热血清试验（TRUST）、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）、性病研究实验室试验（VDRL）进行检测，特异性抗体用酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析法（CLIA）等方法筛查，阳性样本再用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）进行确证[2-4]。由于不同的血清学检测方法有不同的临床应用价值，故本研究对340份疑似梅毒血清进行分析，以TPPA为对照标准，对3种方法的符合率、灵敏度、特异性等进行比较，从而选择合理的梅毒血清学检测方法，为临床诊断和治疗提供科学、准确的实验依据。现将实验过程和实验结果报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

1.1.1 样本来源 选取苏州市立医院2018年8月—12月门诊或住院梅毒疑似患者340例，梅毒疑似患者大部分有非婚性行为，临床症状较为明显；其中男236例，女104例，年龄18～75岁。

1.1.2 仪器设备 TECAN全自动酶免分析仪（瑞士），洗板机（TECAN Columbus）， 酶标仪（TECAN SUNRISE），低温离心机（SORVALL ST40R），水平旋转仪（数显）。

1.1.3 试剂 TRUST诊断试剂（英科新创公司），梅毒螺旋体抗体诊断试剂（TP-ELISA）（厦门英科新创有限公司），TPPA诊断试剂（富士瑞必欧株式会社）。

1.2 方法

1.2.1 TRUST检测 血清样本严格按照试剂说明书操作，进行半定量检测。判读标准：仅见抗原颗粒集中于中央一点或均匀分散为阴性，见大小不等的絮状物为阳性。

1.2.2 TP-ELISA检测 血清样本严格按照试剂说明书进行检测，应用TECAN全自动酶免仪进行检测：加样、加酶标记物、孵育、洗板、比色得吸光度A值。同时每批检测中加入2个浓度水平质控品，监测当前批次的质控情况。结果判断方法：临界值CO=阴性对照A均值×2.8，样本A值S/CO≥1者为梅毒螺旋体抗体反应阳性，样本A值S/CO＜1者为梅毒螺旋体抗体反应阴性。

1.2.3 TPPA检测 严格按照试剂说明书操作，室温条件下在U型板先加入稀释液，再加入血清样本，依次稀释、加未致敏粒子、致敏粒子，加盖，混匀，静置2 h后观察结果。判断标准：阴性结果为加入致敏粒子孔粒子聚集，外周边缘均匀且平滑的圆形；阳性结果为加入致敏粒子孔粒子形成小环状，外周边缘不同程度杂乱地凝集在周围。

1.3 统计学方法

采用医学统计学软件SPSS16.8对数据进行统计分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TPPA 、TRUST和TP-ELISA检测结果

340例标本以TPPA为确诊试验共检测出阳性标本255例，阳性率75.0%。TRUST法检出阳性186例，阳性率54.7%，与TPPA法同时阳性177例，同时阴性76例，两种方法比较差异有统计学意义（P=0.000）。TP-ELISA法检出阳性284例，阳性率83.5%，与TPPA法同时阳性253例，同时阴性54例，两种方法比较差异有统计学意义（P=0.006）（表1）。

表1 TPPA、TRUST和TP-ELISA检测结果分析

2.2 TRUST和TP-ELISA检测对梅毒诊断指标的比较

以TPPA为标准，分别评价TRUST和TP-ELISA法对梅毒诊断的指标，如灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值及符合率。结果表明，TRUST灵敏度较低为69.4%，有较高的特异性与阳性预测值，分别为89.4%和95.2%；TP-ELISA的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值及符合率均较高，分别为99.2%、89.1%、96.4%、90.3%。

2.3 TP-ELISA阳性标本S/CO值与TPPA阳性结果的符合率分析

TP-ELISA法S/CO值＞20的标本，TPPA法均阳性，符合率为100%。而S/CO值1～10的标本，与TPPA法阳性符合率为62.8%；进一步缩小S/CO值分析区间，发现两者符合率由79.3%降至34.8%，说明随着S/CO值的下降，TP-ELISA与TPPA阳性符合率随之降低，且当S/CO值＜2的样本两者符合率极低（表2）。

表2 TP-ELISA法阳性S/CO值与TPPA阳性结果的符合率分析

3 讨论

梅毒的病原体是一种梅毒螺旋体苍白密螺旋体苍白亚种，属螺旋体目、螺旋体科、密螺旋体属。其形态呈螺旋状，长6～20 μm，宽0.15～0.25 μm，有8～20个螺旋。因其表面含有多糖类抗原，可刺激机体产生两种不同类型的抗体，即梅毒螺旋体非特异性抗体和梅毒螺旋体特异性抗体。非特异性抗体主要为抗心磷脂抗体（反应素），感染后在血液中的检出时间大约6周。实验室检测目前常用RPR、TRUST、VDRL等方法，操作简单，成本低廉，比较适合人群筛查和基层检测人员使用。阳性反应提示梅毒处于活动期，也可用于治疗的疗效观察，愈后判断，再感染监测等[5-7]；但此类实验室检测方法特异性不高，常有假阳性反应，因此在分析结果时应注意结合病史和临床症状，并用梅毒特异性试验加以鉴别。特异性梅毒螺旋体抗体用于证实TP感染，包括IgM和IgG抗体，IgM抗体持续时间短[8]，IgG抗体终身存在于人体内，故可终身被检测出。临床检测技术包括TPPA、TP-ELISA、胶体金层析法（CGD）、免疫印迹法（WB）、聚合酶链反应（PCR）等[9,10]。

本研究中通过比较常用的3种不同的实验室检测方法来评价梅毒检测的准确性。梅毒非特异性抗体TRUST检测与TPPA确诊试验的比较中，340例标本，疑似患者多数有非婚性行为、多性伴侣等，临床表现部分存在有硬下疳，淋巴结增大等二期梅毒临床症状[11]，检测中排除前带反应等因素，其中TPPA检测阳性率为75.0%，而TRUST的阳性率为54.7%，两种方法符合率为74.4%，两者比较有显著性差异。进一步分析显示TRUST灵敏度与阴性预测值较低（69.4%、49.3%），有较高的特异性与阳性预测值（89.4%和95.2%）。文献报道，TRUST试验容易受一些疾病干扰，特别是对于一些免疫性疾病如类风湿关节炎、红斑狼疮、老年人、孕妇等假阳性较多[12,13]。但本实验结果表明，TRUST法的低阴性预测值说明该方法具较高的假阴性，分析其原因，可能由于标本采集范围多集中于梅毒一，二期患者，所以也呈现出TRUST检测的高特异性。

而梅毒特异性抗体TP-ELISA检测法与TPPA确证试验间的符合率较好（90.3%），灵敏度、阳性预测值、阴性预测值及符合率均较高，分别为99.2%、89.1%、96.4%、90.3%，但特异性偏低（63.5%）。文献报道，TP-ELISA法的灵敏度与特异性均高于本研究结果[14,15]。分析其原因，本实验室所使用的全自动酶免仪加样针为钢针，高值阳性样本的携带污染比例较高，造成了一定的干扰。

目前卫生部推荐梅毒螺旋体抗体的逆向检测策略[16]，即TP-ELISA作为初筛，TPPA作为确证。本实验中进一步对TP-ELISA法阳性标本S/CO值结果与TPPA阳性结果的符合率进行分析，发现TPELISA法S/CO值＞20的标本，两种方法符合率为100%；随着S/CO值的下降，TP-ELISA与TPPA法阳性符合率随之降低，且当S/CO值＜2的样本两者符合率极低（34.8%）。故可能会漏检早期阳性患者。建议在S/CO值1 ～2的阳性样本如TPPA检测阴性，则应用WB或PCR确证，并定期追踪，同时应结合临床进行诊断。有文献报道TP-ELISA法S/CO值＜3时，39.58%的阳性标本会漏检[17]。

目前因方法学性能局限的存在，任一种梅毒血清学试验均无法达到梅毒诊断所需的全部性能要求。梅毒非特异性抗体TRUST检测法与特异性抗体TPELISA检测法和TPPA检测法各有优缺点，需联合检测才能提高检测结果的准确性[18,19]。对TP-ELISA法S/CO在1～2而TPPA法阴性的标本，应引起足够重视，以免误检、漏检梅毒患者。