血浆miR-374a-5p、IL-10水平与急性心肌梗死患者PCI术后冠状动脉无复流的相关性分析

王燕英，陈海荣，张伟，李名兰

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是一种较为严重心血管类疾病，起病急、病死率高，严重威胁患者生命健康[1-3]。目前临床上治疗AMI最有效的方法为经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention，PCI)，大大降低了患者的病死率，但PCI术后部分患者心肌得不到有效灌注，即出现冠状动脉无复流现象，显著增加了不良心血管事件的发生率，对患者预后造成严重影响[4-5]。因此，寻找影响AMI患者PCI术后冠状动脉无复流现象发生的相关因素，对预防无复流现象发生，改善患者预后具有重要价值。微小RNA-374a-5p(miR-374a-5p)是一种内源性小分子单链RNA，有研究显示，miR-374a-5p与心血管疾病的发生密切相关[6]。白介素-10(interleukin-10，IL-10)是机体内重要的一种细胞因子，研究显示，IL-10在维持人体内环境稳定、免疫调节等方面发挥重要作用[7]。然而，有关miR-374a-5p、IL-10对AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的影响尚不完全清楚。鉴于此，现分析AMI患者血浆miR-374a-5p、IL-10表达及其与PCI术后冠状动脉无复流的相关性，以期为临床治疗AMI提供参考，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年11月—2021年2月中南大学湘雅医学院附属海口医院全科医学科和心血管内科首次确诊并行PCI的AMI患者300例为研究对象，根据PCI术后患者心肌梗死溶栓治疗临床试验(TIMI)血流分级[8]分为无复流组(TIMI<2级)46例和复流组(TIMI≥2级)254例。2组患者基线临床资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。本研究经医院伦理委员会批准通过(伦审字2018-093号)，患者及家属自愿加入本项研究，并签署知情同意书。

表1 PCI术后无复流组及复流组患者临床资料比较例(%)]

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准：①符合中华医学会心血管病学分会制定的有关AMI的相关诊断标准[9]；②在本院行PCI治疗者；③临床资料完整者。(2)排除标准：①患有肝肾等功能不全者；②有心力衰竭、风湿性心脏病史者；③患有恶性肿瘤者；④有PCI手术禁忌证者。

1.3 观测指标与方法 PCI术后清晨抽取患者空腹静脉血5 ml， 抗凝离心后收集血浆，并置于-70℃冰箱中保存备用。

1.3.1 血浆miR-374a-5p表达检测：取出待测血浆，用总RNA提取试剂盒(无锡百泰克生物技术有限公司，批号RP2401)并严格按照说明书顺序提取总RNA，然后经逆转录得到cDNA(逆转录试剂盒购自北京诺尔赛克科技有限公司，批号K1629)。以上述逆转录合成的cDNA为模板，进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测(qRT-PCR仪购自美国应用生物系统公司，型号StepOne TM)。PCR反应条件为：94℃、3 min，94℃、25 s，60℃、30 s，72℃、20 s，共35个循环。miR-374a-5p及内参U6的引物序列见表2，均由北京宝日医生物技术有限公司合成。采用2-△△CT法计算血浆miR-374a-5p相对表达水平。

表2 血浆miR-374a-5p引物序列

1.3.2 血浆IL-10表达检测：采用酶联免疫吸附法检测血浆IL-10表达水平，试剂盒购自上海博湖生物科技有限公司，批号BH-H6445，操作步骤按照试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 血浆miR-374a-5p、IL-10表达比较 无复流组血浆miR-374a-5p表达高于复流组，血浆IL-10表达低于复流组(P<0.05)，见表3。

表3 PCI术后无复流组及复流组患者血浆miR-374a-5p、IL-10表达比较

2.2 血浆miR-374a-5p、IL-10表达的相关性 无复流组患者血浆miR-374a-5p与IL-10表达呈负相关(r=-0.453，P=0.000)。

2.3 血浆miR-374a-5p、IL-10对AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的诊断价值 血浆miR-374a-5p、IL-10诊断AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的曲线下面积(AUC)为0.847、0.790，截断值分别为1.15、2.85 pg/ml，此时对应敏感度分别为0.826、0.692，特异度分别为0.803、0.788。血浆miR-374a-5p、IL-10联合检测诊断AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的AUC为0.900，此时对应敏感度和特异度分别为0.914、0.767，见表4和图1。

表4 血浆miR-374a-5p、IL-10表达水平对AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的诊断价值

图1 血浆miR-374a-5p、IL-10表达水平对AMI患者

2.4 AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的影响因素分析 以AMI患者PCI术后冠状动脉无复流是否发生为因变量(0=否，1=是)，血浆miR-374a-5p、IL-10表达水平为自变量，采用Logistic回归分析，结果显示：血浆IL-10高表达水平是AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的保护因素(P<0.05)；血浆miR-374a-5p高表达水平是AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的独立危险因素(P<0.05)，见表5。

表5 AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的相关影响因素分析

3 讨 论

近年来随着医学水平的不断提高，PCI术成为临床治疗AMI患者较常用且最为有效的治疗手段，可提高AMI患者的生存率[10-12]。但研究发现，部分患者术后冠状动脉血流灌注较少或无血流再灌注，导致患者预后不良[13-14]。因此，探究影响AMI患者PCI术后冠状动脉无复流现象发生的相关因素，对提高AMI患者的临床治疗效果、降低PCI术后不良心血管事件的发生率具有重要意义。

miR-374a-5p是由22个核苷酸组成的一种非编码RNA，其基因定位于人X染色体上[15-16]。其在肥胖、肿瘤、血栓形成、急性心肌梗死等疾病的发生发展中发挥重要作用。纪润璧等[17]研究发现，miR-374-5p可通过调控人胃组织来源间质干细胞，来促进影响胃癌增殖和迁移的重要分子，进而在胃癌中发挥作用。王晓燕等[6]研究发现，miR-374在急性心肌梗死患者心肌组织中呈高表达，且可通过抑制IL-10的表达诱导患者心肌纤维化。本研究结果显示，无复流组血浆miR-374a-5p表达水平较复流组高，与上述研究相似，提示血浆miR-374a-5p可能与AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生密切相关。

IL-10是一种主要由Th2细胞产生的细胞抑制因子，在抑制Th1细胞应答、调控机体内炎性反应等方面发挥重要作用[18-19]。研究显示，机体内多种物质可通过调控IL-10参与心血管等疾病的发生发展过程[20-21]。徐梦云等[22]研究发现，对AMI患者PCI术后进行康复训练，患者IL-10水平升高。本研究结果显示，无复流组血浆IL-10表达水平较复流组低，与上述研究结果类似，提示血浆IL-10可能参与AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的发生。刘婧等[23]研究发现，深静脉血栓患者血清中IL-10表达水平降低，而单个核细胞中miR-374a-5p表达水平升高，miR-374a-5p可能通过抑制IL-10表达进而参与深静脉血栓的形成。本研究发现，冠状动脉无复流患者血浆中miR-374a-5p、IL-10表达呈负相关，提示血浆miR-374a-5p可能通过调控IL-10表达，二者共同参与冠状动脉无复流的发生及发展。本研究ROC曲线分析表明，血浆miR-374a-5p、IL-10均可作为诊断AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的临床指标，但单独应用价值有限。因此本研究将二者联合应用，诊断冠状动脉无复流的AUC为0.900，提示二者联合可能有利于更好的评估AMI患者PCI术后冠状动脉无复流现象。此外，Logistic回归分析结果显示，血浆miR-374a-5p、IL-10表达水平是影响AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生的相关因素，提示检测AMI患者血浆miR-374a-5p、IL-10表达水平可为预测PCI术后冠状动脉无复流现象发生提供一定的临床依据。

综上所述，AMI患者PCI术后冠状动脉无复流发生者血浆中miR-374a-5p表达水平升高，IL-10表达水平降低，血浆miR-374a-5p、IL-10水平对AMI患者PCI术后冠状动脉无复流现象发生具有一定的临床诊断价值，提示二者可作为AMI患者PCI术后冠状动脉无复流现象发生的潜在生物学指标，但二者对冠状动脉无复流发生的具体作用机制还有待深入研究。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

王燕英：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写；陈海荣：提出研究思路，分析试验数据，论文审核；张伟：实施研究过程，资料搜集整理，论文修改；李名兰：进行统计学分析