山羊痘病毒属病毒检测技术分析

邵坤

摘要：近年来，我国畜牧业高速发展，逐渐呈现出规模化的养殖方式，在提高了养殖效率的同时，也增加了病毒传播的概率，山羊痘病毒属病毒在畜牧业中是一种比较常见的病毒，包括山羊痘病毒、绵羊痘病毒等，会严重影响牲畜的正常发育，造成巨大的经济损失，本文对山羊痘病毒属病毒的检测技术做出了讨论。

关键词：山羊痘病毒属病毒;病毒检测

山羊痘病毒属病毒传播速度快，传播范围广，死亡率高，是动物痘病毒中最危险的一种，最早于13世纪英国被发现，被美国疫情控制中心划归为危险病毒，在中国、瑞典等地也有人感染羊痘病毒的情况，羊痘病毒属病毒的防治关乎着公共卫生安全，因此对山羊痘病毒属病毒检测技术进行深入分析具有重要意义。

1  山羊痘病毒属病毒简述及特点

山羊痘病毒属病毒属于痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科病毒，主要包括山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节疹病毒等，对牛、羊等养殖业危害严重，甚至有感染人的现象，被世界卫生组织列为A类病毒，具有非常强大的传播性和危害性，13世纪在英国被首次发现，感染山羊痘病毒属病毒的牲畜发病率达到了70%左右，其中死亡率在20%到80%之间，羔羊的死亡率甚至可以达到100%，世界各国均有相关案例出现，目前在非洲、中东等地较为流行。感染了山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节疹病毒等的动物，会出现身体发热，皮肤、粘膜、器官表面出现丘疹或结节的现象，严重时会发生皮肤水肿、身体消瘦、毛色暗淡枯黄、淋巴结肿大、乳量下降，甚至是死亡等情况，这种病毒一旦爆发将会给地区的养殖业带来巨大危害，严重损害养殖主的经济利益，甚至危害生命安全。我国将山羊痘、绵羊痘等疾病列为了一级动物疾病，对其高度关注，因此对山羊痘病毒属病毒的检测技术进行深入分析与研究意义重大。

2  山羊痘病毒属病毒检测技术

2.1  病原学检测

病原学检测是一种常见的山羊痘病毒属病毒检测方法，是一种将病毒分离出来的检查技术，需要采集染病动物皮肤和粘膜上的痘疹、痘斑，当染病动物进入发热期需要采集其血液、淋巴结细胞和肺部病变组织。分离出的山羊痘病毒一般要以原代或次代的羔羊睾丸细胞进行培养，除此之外，羔羊肾细胞和牛犊睾丸细胞也具有同样的敏感性。在病羊皮肤丘疹、脓疱组织的分离观察中，可以发现病毒在植入羔羊睾丸细胞后第二天，大部分细胞开始变圆、变细，细胞浆内有可疑颗粒出现，并产生空泡，感染的单层细胞会在五天内死亡。当取内蒙古病羊的皮肤痘疹和水疱当做试验样本时，分别接种于BHK-21传代细胞和SPF鸡胚细胞中时，发现了明显的区别，BHK-21传代细胞出现了明显的病变，并于24h后开始收缩、聚集，48h后出现空泡现象，72h内全部死亡[1]。接种同种病毒的SPF鸡胚细胞在120h后仍然存活，将其解刨后发现鸡胚胚体出血，囊毛增厚，接种部位有明显的痘斑。以不同地区的病羊病毒作为实验样本，可以发现不同的现象，或者接种于经过不同处理方式的原代绵羊睾丸细胞，也能得到一定的规律，这种监测方法较为缓慢，但是准确性很高，能观察病毒的变化规律和生长方式，多用于病原研究工作中。

2.2  染色电镜观察

对山羊痘病毒属病毒也可以使用染色电镜观察方法进行检测，采集山羊痘疫区的病羊病料，通过鸡胚细胞和BHG-21传代细胞培养，然后将培养所得的胚胎切片，用硝酸铅和醋酸铅進行染色，使用专门的病毒电镜进行观察。经由电镜观察可知，山羊痘病毒属病毒在早期的时候呈现卵圆形，大小在250nm到350nm之间，薄膜存在不完整的现象，薄膜内电子密度较高的物质占比较大，电子密度中等的物质则分布在电子密度较高物质的边缘。山羊痘病毒属病毒在中期的形状、大小与早期类似，但是电子密度高的物质减少，病毒粒子直径较小。成熟期的山羊痘病毒属病毒中的病毒粒子致密，电子密度分布极不均匀，中央有哑铃形的核酸芯髓。

2.3  血清学检测

血清学检测是通过血清对山羊痘病毒属病毒进行检测，针对具体病毒种类的不同，有很多种检测方法，包括病毒中和试验、免疫琼脂扩散试验，酶联免疫吸附试验、荧光抗体试验等。病毒中和试验是检测特异性较强的羊痘病毒的血清检测方法，被感染动物只能产生低水平或中水平的抗体。免疫琼脂扩散试验是将病毒在BHK-21传代细胞中培养，然后重复冻融三次，与山羊痘标准血清做琼脂扩散试验，会发现染病细胞将出现白色沉淀线。荧光抗体试验使用异硫氰酸荧光标记山羊痘病抗体，并以山羊痘荧光抗体检验病羊的皮肤痘疹切片，会出现黄绿色荧光，此荧光能被山羊痘标准阳性血清特异性抑制，可以较为准确的检测出山羊痘病毒属病毒。血凝试验也利用山羊痘病毒抗原有较强的特异性和敏感性，不会与其他病毒的抗原发生交叉反应的特点，进行检测，是一种灵活、快速的检测方法。

3  结语

山羊痘病毒属病毒传播速度快，适应力强，致死率高，是最危险的几种痘类病毒之一，一旦爆发将会给地区畜牧业造成严重的危害，因此对山羊痘病毒属病毒的检测方法进行研究具有重要意义，其中病原学检测、染色电镜观察、血清学检测都是较为常见的检查方法，应该不断加以深入研究和完善。

参考文献

[1] 徐滢，张琪，付明哲，等.山羊痘病毒LAMP检测方法的建立[J].动物医学进展，2020，41（3）：12-16.