中药逍遥丸对小鼠糖皮质激素抑郁模型动情周期的影响研究

鞠博名 王泽鑫 刘钦臣 李佳 鲍晨 窦薇

摘要：目的：研究探讨临床常见药中药逍遥丸对昆明小鼠氢化可的松药物抑郁模型的动情周期效果与影响。方法：选用雌性昆明小鼠共计40只，分为4组（正常组、对照组、中药组、西药组）。除正常组灌胃0.1ml生理盐水外其余各组给予氢化可的松灌胃，每组每只小鼠每日一次，一次0.1ml，持续灌胃21天后，中药组与西药组分别采用逍遥丸与氟西汀进行治疗（通过制作特定剂量的混悬液分别灌胃）每日一次，一次0.1ml。正常组与对照组同上方式灌胃0.1ml生理盐水，持续14d，进行治疗的第一天开始每日同一时间取各组每只小鼠进行阴道脱落细胞学涂片检查，同样持续14d后进行涂片的观察。结果：各组动情期开始的时间不同，有显著差异（P<0.01），正常、中药、西药组早于对照组，具有统计学意义（P<0.05），但正常、中药、西药组无统计学意义（P>0.05）。各组动情间期持续时间不同，且具有极显著差异（P<0.001）。正常、中药、西药组时间明显短于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。正常组明显短于中药组，差异具有统计学意义（P<0.05）。中药组与西药组动情间期长短无明显差异。镜下卵巢切片观察对照组小鼠卵巢闭锁卵泡数量相比于其余三組增多，且在相对来说较成熟的卵泡中其形态异常的卵母细胞也增多。而中药组与西药组镜下观察趋近于正常组。结论：中药逍遥丸与西药氟西汀均可以延长氢化可的松抑郁模型小鼠的动情期并缩短其动情间期使其趋近于正常组小鼠，且中剂量疗效就已与氟西汀相当。而卵巢镜下切片观察也显示中药组与西药组的卵巢形态趋近于正常组并区别于对照组。

关键词：小鼠;动情周期;抑郁;中药;逍遥丸;卵巢;阴道脱落细胞;涂片

抑郁症是以一种持续且显著的情感低落，且伴有思维与行动的迟滞与各种躯体化有关症状，及心境不快与身体器官部分之功能紊乱。临床上表现复杂，且发病机制尚不明确[1]。激素是影响抑郁症的一大原因，其中也包括了性激素，性激素在维持正常的性生理中起到了关键的作用，且也是导致情绪产生变化的重要因素。逍遥散源自《太平惠民合剂局方》，由当8味中药组成，具有具有疏肝解郁，健脾和营，养血调经之功效。应用广，疗效好，安全性高[2]。

一.实验材料与方法

1.1材料

选用昆明雌性小鼠为实验研究动物对象，开始试验时小鼠重18g～21g，由齐齐哈尔医学院动物实验中心提供。

1.2实验使用药物

逍遥丸 ：由河南省济源市济世药业有限公司生产（浓缩丸），批号 ：1901092，氢化可的松（注射液）：由国药集团容生制药有限公司生产，氟西汀：由（Patheon France（法国）生产商生产，礼来苏州制药有限公司，编号：8802A。

1.3实验方法

1.3.1小鼠抑郁模型的建立

采用糖皮质激素——氢化可的松灌胃方式建立小鼠抑郁症模型。

1.3.2小鼠的分组及实验步骤

分为正常组，对照组，中药组和西药组共四组，每组15只小鼠，适应性喂养3d后，除正常组外，余组小鼠建立抑郁模型，三组模型组对小鼠灌胃每只每日0.1ml氢化可的松，正常组对小鼠灌胃每只每日0.1ml生理盐水，持续21d后，停止造模，后中药组给予逍遥丸灌胃，将100丸逍遥丸溶于125ml蒸馏水中制成混悬液，剂量为0.3g/ml（每8丸相当于饮片3g，将200，100，50丸逍遥丸分别溶于125ml蒸馏水可分别制成剂量为0.6g/ml，0.3g/ml，0.15g/ml，本实验采用中剂量即0.3g/ml），每只小鼠灌胃0.1ml，西药组给予氟西汀灌胃，每只小鼠灌胃0.1ml（10mg/kg），正常组与对照组每组每只小鼠灌胃0.1ml生理盐水，给药治疗14d，首日给药时开始采用阴道脱落细胞法制作涂片，每日一次，每日固定时间采集，持续14d，后将涂片固定放置在显微镜下观察确定小鼠动情期，末次取完动情周期后取每组每只小鼠卵巢进行HE切片染色观察。

1.3.3动情周期判断指标

涂片以角化细胞为主则可认为小鼠进入了动情期[3]。

1.3.4数据分析

统计学分析，定量资料采用均数±标准差表示，采用单因素方差分析，使用SPSS25.0，规定P<0.05具有统计学意义。

二.结果

2.1小鼠阴道脱落细胞涂片观察动情周期结果

a，b代表差异性，不同字母表示具有差异性

结果分析：不同组别的动情期时间不同，具有显著差异（P<0.01），正常组、中药组、西药组时间高于对照组，具有统计学意义（P<0.05），但是正常组、中药组、西药组无统计意义（P>0.05）.不同组别的动情期间期不同，具有极显著差异（P<0.001）.正常组、中药组、西药组时间低于对照组，具有统计学意义（P<0.05）。正常组低于中药组，具有统计学差异（P<0.05）.中药组与西药组之间无统计学意义。不同组别的动情期（%）不同，具有极显著差异（P<0.001）。正常组、中药组、西药组时间高于对照组，具有统计学意义（P<0.05）。正常组高于于中药组、西药组，具有统计学差异（P<0.05）。中药组与西药组之间无统计学意义。不同组别的动情间期（%）不同，具有极显著差异（P<0.001），正常组、中药组、西药组时间短于对照组，具有统计学意义（P<0.05）。正常组低于于中药组、西药组，具有统计学差异（P<0.05）。中药组与西药组之间无统计学意义。不同组别的动情周期（d）不同，具有显著差异（P<0.001），正常组、中药组、西药组时间低于对照组，具有统计学意义（P<0.05），但是正常组、中药组、西药组的动情周期（d）无统计意义（P>0.05）。

2.2小鼠阴道脱落细胞光学显微镜下观察

镜下观察后可以看出动情期小鼠以无核的角化上皮细胞为主，而非动情期则以有核上皮细胞和炎细胞浸润为主。

3.3小鼠卵巢组织HE染色光学显微镜观察

镜下观察发现对照组小鼠卵巢闭锁卵泡数量相比于其余三组增多，且在相对来说较成熟的卵泡中其形态异常的卵母细胞也增多。而中药组与西药组镜下观察趋近于正常组。

三.分析

逍遥丸是为古书籍《伤寒论》中之“四逆散”演变而成。首见于宋代《太平惠民和剂局方》逍遥散。由柴胡、当归、白芍、白术、茯苓、甘草、薄荷、生姜 8 味中药组成[4]，是历代中医们喜用的疏肝解郁，养血调经之经典方剂，逍遥丸被广泛应用于妇科疾病、肝脏疾病、应激性损伤内分泌疾病皮肤疾病和神经疾病，而近些年对神经疾病有进一步进展，大量研究表明逍遥丸可治疗部分抑郁症状，尤其是经期抑郁，产后抑郁以及老年抑郁[5]。

目前被广泛认可的假说有去甲肾上腺素（ NE） 及其受体学说、5-羟色胺（5-HT） 及其受体学说、多巴胺（DA）及其受体学说、乙酰胆碱（Ach） 能学说，循环系统疾病与抑郁、神经元和神经胶质细胞變化、抗抑郁药物与神经元再生，遗传相关因素、社会心理因素，还有与本文有关的内分泌相关学说如，下丘脑-垂体-肾上腺素轴（ HPA） 兴奋亢进学说、下丘脑-垂体-甲状腺轴（ HPT） 功能减退学说、下丘脑-垂体-性腺轴（HPG）的改变（以上均为神经内分泌研究）[6]，以及较重要的性激素，其中雌激素与孕激素以及其他生殖腺激素均可以影响神经中枢系统，如雌激素通过抑制单胺氧化酶而促进抑郁发作，因此可以解释女性更年期时抑郁症的发病率较高，孕激素能通过促进部分受体功能而加强对于神经元抑制，产后抑郁症可能也是由于患者分娩后孕激素快速消退从而导致产后焦虑和易激惹症状[7]。

其余大量的实验研究也表示，抑郁症与性激素的水平息息相关尤其是与雌激素水平含量的下降，因此调查显示抑郁症的女性患者更为男性患者的2倍之多。因此临床上女性容易发生产后抑郁与绝经期抑郁。而男性抑郁患者为睾酮的水平下降临床上容易发生老年抑郁[8]。

且逍遥丸中还含有部分化学成分，其中柴胡皂苷a能调节炎症因子及其相关通路从而提高精神营养因子含量来改善5-HT、DA、和HPA轴的功能从而产生抗抑郁与焦虑作用、芍药苷为一种双向抗炎免疫调节药物，对于抑郁与焦虑症状也具有一定的改善作用[9]。

通过观察实验结果可以发现，各组的动情期具有显著差异（p<0.01），各组动情间期，动情期（%），动情间期（%）具有极显著差异，正常组，中药组，西药组动情期、动情期（%）、动情间期（%）均高于对照组，动情间期、动情周期均低于对照组，且中药组和西药组分别与正常组对比，偶具有差异，中药组与西药组对比，极偶具有差异。

即动物模型复制成功，中药逍遥丸与西药氟西汀都可以改善小鼠动情周期，且使其接近于正常组，且中药逍遥丸和西药氟西汀对小鼠动情周期改善效果相当，但与正常组还略有差距。

中医上肾与HPA轴具有很大的关联性，糖皮质激素会破坏人体阴阳平衡从而导致肾阳虚[10]，而上述过外源性注入了糖皮质激素也会导致模型动物HPA轴紊乱，这种HPA轴紊乱后表现的现象与中医上肾阳虚的症状十分相似，

而逍遥丸又是疏肝解郁的代表之作，可以改变体内5-HT、NE、DA等激素水平含量，改善体内HPA、HPT、HPG轴，而其中HPG轴即下丘脑-垂体-性腺轴可能对动情周期的影响较大。

动情周期与性激素有极大关联，而抑郁可以导致HPG轴紊乱，从而导致性激素的紊乱，最后即为动情周期的改变，逍遥丸可以改善激素水平，进而改善HPG轴，对抑郁症进行治疗的同时即可改善动情周期。

综上所述，抑郁症与激素息息相关，而激素又可以改变小鼠的动情周期，逍遥丸可以提高激素含量以及改变体内5-HT、NE、DA等激素水平含量从而影响小鼠的动情周期。

参考文献

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[9]刘琳，邹俊波，张小飞，王媚，郭东艳，周晓，王林，张雪，史亚军.基于网络药理学探讨逍遥丸治疗抑郁和焦虑的作用机制[J/OL].海南医学院学报：1-14[2021-06-05].https：//doi.org/ 10.13210 /j.cnki.jhmu.2020 0827.004.

[10]吴斌.糖皮质激素副作用的中医药研究进展[J].时珍国医国药，2010，21（03）：719-721.