雅培i1000SR全自动化学发光分析仪检测DHEA-S和SHBG的性能验证

林城通 石文 陈林 黄爱军 林海标

广东省中医院检验医学部，广州 510000

硫酸脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone sulfate，DHEA-S）是临床评价肾上腺功能的指标之一，是由肾上腺合成分泌的类固醇激素。高水平DHEA-S 可提示多囊卵巢综合征、肾上腺皮质良性肿瘤或者恶性肿瘤。DHEA-S 可部分新陈代谢为活性雄激素以及雌激素，DHEA-S 水平增高可导致女性出现闭经和男性化症状，和代表促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）、降钙素、雌激素和睾酮同时测定，以帮助诊断多囊卵巢综合征，排除其他引起不孕、闭经和多毛症的原因。同时也有助于评估肾上腺功能，和区分肾上腺对雄激素分泌过多状态由睾丸还是或卵巢引起的。性激素结合球蛋白（sex hormone-binding globulin，SHBG）是在结合状态下以无生物学活性形式转运入血液，由肝细胞合成的一种球蛋白。可结合雌二醇、睾酮和双氢睾酮，并调控女性机体中的性激素浓度，在多种妇产科疾病的发生发展中均有重要作用［1］。其可用于诊断多毛症、雄激素过多症，用于评价不孕妇女的排卵功能以及甲状腺功能。

本研究依据ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》要求，做好实验室各个环节的质量控制［2］，参考美国临床实验室标准协会（CLSI）颁布的EP 系列文件，从测量原装质控品和临床样本出发，使用雅培i1000SR于2020年3月对各质控品和临床样本进行DHEA-S、SHBG的非随机对照实验性研究，对DHEA-S 和SHBG 进行非随机对照实验性研究，建立性能验证方案［3-4］，对二者进行精密度、正确度以及线性范围性能验证和评价，为临床诊断和治疗评估提供相应的数据支持。

1 资料与方法

1.1 试剂仪器 美国原装的雅培DHEA-S 测定试剂盒，批号01620H000；美国原装的雅培SHBG测定试剂盒，批号00420I000。仪器为美国雅培i1000SR。

1.2 验证材料 美国雅培原装DHEA-S 校准品（批号02220F000）、SHBG校准品（批号04220I000），用于测量校准和试剂稳定性验证的。美国伯乐公司的免疫质控品：水平1、水平2（批号40362），用于精密度验证。来自2020年的国家卫生健康委员会临床检验中心内分泌室间质评质控品5 份（批号分别为20201、20202、20203、20204、20205），用于正确度验证。2020 年3 月分别收集的DHEA-S 和SHBG的高值和低值血清标本，用于线性范围验证。

1.3 方法 本次实验室人员应熟悉性能验证方案并且经过专业培训具备一定资质，能按操作说明书的要求对仪器进行运行、校准和保养等正常操作，同时可根据ISO15189要求把握好实验室各个环节的质控。

1.3.1 精密度验证 依据EP15-A3［5］来设计实验：在当天质控在控和仪器状态良好的前提下，使用2 个浓度水平的伯乐免疫类质控品，每天分析1 批，每批每个水平进行5次重复测定，连续测定5 d，共需水平1和水平2质控品，各25 份，每份200 μl。代入公式最终计算DHEA-S、SHBG的均值、标准差和变异系数。当精密度小于厂家声称的时，通过验证。

1.3.2 正确度验证 依据EP15-A3［2］来设计实验：取2020年国家卫生健康委员会临床检验中心内分泌项目室间质评5 份质控品（各5 份，每份200 μl）检测结果，至少测定2 个水平。实验前充分混匀分析物，用实验方法重复测定5 次，将检测结果与说明书标示值或靶值进行比对，参考CNAS-CL38 医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明，计算DHEA-S 和SHBG 与靶值的偏倚，以1/2总允许误差（TEa）作为评价标准。

1.3.3 线性范围验证 参考CLSI EP6-A 文件［5］，选用2020 年收集的高值血清样本H（浓度接近厂家说明书的高限值）和低值样本L（浓度接近厂家说明书的低限值）进行验证。样本基质应与临床实验样本相似，所选用的浓度水平应覆盖临床重要评价浓度，如分析测量的最低限、最高限、不同的医学决定水平等。将各2.5 ml 高值血清样本H 和低值样本L 按照L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H 关系各自配置混合成5个浓度，每个浓度各1.0 ml，分别测定3次。然后将雅培i1000SR所测量均值和靶值进行线性回归分析，得出实测值与理论值的线性关系公式Y=aX+b，并计算相关系数（R2），将得到的线性范围与厂家声称的进行比较，要求得到的相关系数R2≥0.95。

1.4 统计学方法 根据EP 系列文件要求，采用Excel对数据进行处理和分析。采用SPSS19.0软件来进行统计分析，最终要求以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 精密度结果 分别对DHEA-S 和SHBG 5 个批次每个水平分别进行5 次重复测定。可得到DHEA-S水 平1 均值为152.82 μg/dL，得 到DHEA-S 水平2均值为595.72 μg/dL。由表1 可知，DHEA-S 浓度水平1 验证的批内、总变异系数分别为1.20%、3.68%，DHEA-S 浓度水平2验证的批内CV、总CV分别为1.48%，1.70%均小于厂家声称的6.25%的批内CV 和8.33%的总CV，最后可得结论，精密度验证通过。由表1 可知，SHBG 水平1 均值为39.73 nmol/L，SHBG 水平2 均值为254.02 nmol/L。SHBG浓度水平1 验证的批内CV、总CV 分别为4.00%，4.94%，SHBG水平2验证的批内CV、总CV 分别为0.80%，2.03%，均小于厂家声称的6.25%的批内CV和8.33%的总CV，最后可得结论，精密度验证通过［6］。

表1 雅培i1000SR全自动化学发光分析仪检测DHEA-S、SHBG的精密度结果

2.2 正确度结果 由表2 可知DHEA-S的5 份质控品测量均值分别为：7.42、2.76、13、21.79 和2.7，对应靶值为7.98、2.96、13.65、20.81 和2.77，计算其验证偏差可得结果分别为-7.0%、-6.8%、-4.8%、4.7%和-2.5%，结果均小于卫生部临床检验中心2020年室间质评所采用的TEa的1/2，即小于要求范围12.5%，认为新检测系统DHEA-S的偏倚属临床可接受水平，可用于临床［7］。由表2 可知SHBG的5 份质控品测量均值分别为：33.6、10.5、34.7、55.2和9.5，对应靶值为35.20、10.90、35.20、56.6 和9.70，计算其验证偏差可得结果分别为-4.5%、-3.7%、-1.4%、-2.5%和-2.1%，结果均小于卫生部临床检验中心2020年室间质评所采用的TEa的1/2，即小于要求范围12.5%，认为新检测系统SHBG的偏倚属临床可接受水平，可用于临床［7］。

表2 雅培i1000SR全自动化学发光分析仪检测DHEA-S、SHBG的正确度结果

2.3 线性范围结果 从表3 可见，DHEA-S 最终验证的线性范围是5.10～1 301.07 μg/dL。将DHEA-S 5个浓度L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H的测量均值结果5.10、334.33、650.40、981.03、1 301.07 μg/dL 与靶值4.00、378.00、752.00、1126.00、1 450.00 μg/dL 进行线性回归分析，得出实测值与理论值的线性关系，由图1 可见稀释度区间统计结果为Y=0.889 1X-5.327 7，R2=0.999 3，结果大于0.995。测定的DHEA-S 线性范围在厂家声明范围之内，验证结论：通过，各稀释倍数的标本实测浓度与理论浓度的相对偏移均符合厂家声明。从表3 可知验证的SHBG 线性范围是1.90～221.13 nmol/L，将SHBG 5 个浓度L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H的测量均值结果1.90、54.60、107.53、153.67、221.13 nmol/L与靶值2.00、56.50、111.00、165.50、1 220.00 nmol/L 进行线性回归分析。得出实测值与理论值的线性关系，由图2 可见稀释度区间统计结果为Y=0.986 3X-1.712 6，R2=0.996 6，结果大于0.995，测定的SHBG线性范围通过，各稀释倍数的样本实测与理论浓度的相对偏移均符合厂家声明［8］。

图1 DHEA-S测定均值与靶值直线回归图

图2 SHBG测量均值与靶值直线回归图

表3 雅培i1000SR全自动化学发光分析仪检测DHEA-S、SHBG的线性范围结果(%)

3 讨 论

高水平的DHEA-S 可提示发生多囊卵巢综合征、恶性肿瘤、肾上腺增生或肿瘤。低水平DHEA-S 可能由肾上腺功能紊乱或垂体机能减退-可导致调节肾上腺激素合成与分泌的垂体激素水平降低的疾病状态引起。当女性出现多毛症、闭经或男性出现青春期性早熟，以及考虑雄激素分泌过多（或不足）还有需要评估肾上腺功能时可进行DHEA-S和其他激素检测［9］。而SHBG的高低与疾病的发生发展存在一定的关系。SHBG 升高常见于肝硬化、甲状腺功能亢进、口服避孕药或抗癫痫药物等情况，SHBG 降低可见于多囊卵巢综合征、多毛症、肢端肥大症或甲状腺功能减退等。通过对SHBG 进行检验，可为多种疾病尤其是妇产科疾病的诊断及确定治疗方案提供参考依据，进而可以有效降低相关疾病的发病率［10］。

采用微粒子化学发光原理定量检测DHEA-S 和SHBG的雅培i1000SR全自动化学发光分析仪与传统方法相比，有着操作简便、灵敏度高、检测速度快、无放射污染等优点。而良好的仪器性能和检测方法才能保证结果的准确，虽然厂家说明书给出了雅培i2000SR相关性能指标，但是其性能参数是在国外的最适条件下完成的，与本科室水质、电压稳定性、环境温湿度、操作人员素质等外部条件均存在差异，所以本研究在使用前依据ISO15189要求和CLSI标准文件，对其进行DHEA-S、SHBG的性能验证。精密度和正确度可用于验证重复测定值之间的一致程度和大批检验结果的均值与其真值的一致程度［11］。良好的精密度和正确度是保证分析系统检验结果准确性的前提，也是进行其他方法学评价和验证试验的前提［12］。

本研究结果显示，DHEA-S 批内变异系数为1.20%、1.48%，总变异系数为3.68%、1.70%，均小于均小于二者的室间质评相应标准；SHBG 批内变异系数为4.00%、0.80%，总变异系数为4.94%、2.03%，均小于二者的室间质评相应标准；DHEA-S 和SHBG 验证结果说明精密度高，重复性较好，验证通过。DHEA-S 和SHBG的检测偏倚均小于TEa的1/2，验证结果说明二者指标正确度高，其检测结果可靠［13］。

综上所述，雅培i1000SR 全自动化学发光分析仪检测DHEA-S 和SHBG 具有精密度高、正确度高、线性相关性较好等特点，结果均符合实验室的质量目标以及ISO15189的要求。

利益冲突作者已申明文章无相关利益冲突。