长链非编码RNA高表达与小细胞肺癌预后不良相关性的Meta分析

胥 英，韩彩娟，范 弘，孟泽蓉，王小军，刘 华

(1.宁夏医科大学 临床医学院, 宁夏 银川 750000；2.甘肃中医药大学 临床医学院, 甘肃 兰州 730000；3.甘肃省人民医院 呼吸与危重症医学科, 甘肃 兰州 730000)

小细胞肺癌(SCLC)属于高度侵袭性的低分化神经内分泌肿瘤其中一种类型，其死亡人数约占到晚期肺癌死亡总人数的15%[1]。SCLC在临床中起病较为复杂隐匿，其特征在于快速生长，早期转移和获得性治疗耐药性。目前SCLC患者的治疗采用以铂类为基础的化疗方案甚至于免疫治疗和靶向治疗，仅略微改善患者的生存率，即使一线治疗的初始缓解率为60%～80%，但预后较差，总生存期为10～12个月[2]。因此，迫切需要积极寻找与病情发展及其预后判断密切相关的重要标记物，以提高对于SCLC预后可靠及准确判断。长链非编码RNA(1ong non-coding RNA, LncRNA)是超过200个核苷酸的转录本，最近越来越多的证据揭示，多种特定的LncRNA在肺癌的早期发生、发展、转移和预后判断中起着重要作用[3-4]。因此，LncRNA可能是癌症患者的潜在且新颖的预后诊断标志物。但LncRNA异常表达与SCLC预后价值存在较大争议[5-6]。本研究首次对SCLC患者LncRNA表达情况与SCLC患者临床病理学特征及预后价值的相关性数据进行系统的评价，并希望有助于更好地理解LncRNA与SCLC的作用机制及LncRNA未来作为SCLC患者的新预后靶标的潜力。

1 资料与方法

1.1纳入与排除标准

1.1.1纳入标准 ①有关LncRNA高表达与SCLC预后关系的病例-对照研究；②研究对象必须为经过病理确诊为SCLC的患者；③准确列出以下结局指标临床特征，包括性别、年龄、吸烟情况、肿瘤临床分期、淋巴结转移、远处转移、化疗敏感度、患者的生存状态；④结局指标为总生存期(overall survival, OS)或无进展生存期(progression-free survival, PFS)，直接提供或者间接从生存曲线提取HR及其95%CI。

1.1.2排除标准 ①重复发表；②基础实验、个案报道、综述、会议摘要；③无法获取全文信息；④未报告SCLC结局指标或不能从文中直接提取生存数据的文章。

1.2检索方法 利用计算机在线检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网、万方数据库、维普中文期刊全文数据库和中国生物医学文献数据库等数据库中发表于2020年5月前的学术论文中公开发表的有关LncRNA 高表达与SCLC预后关系的文章，中文检索词包括：长链非编码 RNA、小细胞肺癌、预后等；英文检索词包括：LncRNA、 long noncoding RNA、long nc RNA、long non-coding RNA、long non coding RNA、long untranslated RNA、long Intergenic non-protein coding RNA、lincRNA、long Intergenic Non-protein coding RNA、small cell lung cancer、small cell lung carcinoma、SCLC、prognosis、outcome、survival、recurrence等。同时为保证检索结果的完整性，我们检索了纳入文献中的参考文献，以PubMed为例，检索策略见图1。

图1 PubMed检索策略

1.3文献筛选与资料提取 2名研究人员严格按照制定的纳入、排除标准独立阅读全文后筛选所纳入文献和记录所提取的数据，过程中如遇意见分歧，则共同讨论或通过第三方协议解决能否允许纳入研究分析。提取数据如下：各研究的准确详细资料，包括题目、第一作者和发表年份等；纳入研究基线资料，包括国家所属区域、研究对象例数、特定LncRNA 、LncRNA 表达水平及截点值、标本检测方法；结局指标：OS、PFS、肿瘤临床分期、淋巴结及远处转移情况、化疗敏感度、患者疾病状态等，直接提取文中生存数据或运用 Engauge Digitizer 4.1软件从生存曲线上获得所需各时间段的生存数据[7-8]，通过计算获得OS或PFS的HR及其对应的95%CI。

1.4质量评价 2名研究人员分别对纳入研究的方法学质量评价，采用纽卡斯尔-渥太华文献质量评分量表(NOS)计算得出，分别评估了9项标准，每个标准为1分，总计算得分范围为0～9分，评分≥6分的文献可被认为高质量文献[9]。各项纳入文献质量评分范围波动在6～7分，均值评分为6.62分。

1.5统计学方法 采用Stata12.0软件进行Meta定量合成分析。对于LncRNA表达与预后分析的OS和PFS合并HR及其95%CI，分析临床病理特征采用OR值及对应的95%CI。各研究异质性研究采用Q检验和I2检验评价。若存在异质性较小(I2<50%,P>0.05)时，采用固定效应模型(fixed-effects model)进行Meta分析；反之，各研究异质性较大时 (I2>50%,P<0.05)则采用随机效应模型(random- effects model)进行Meta分析。当异质性较大时采用亚组分析寻找异质性来源，通过敏感性分析评价合并结果的稳定性。当纳入文献数量≥10篇则制定漏斗图评价发表偏倚。

2 结 果

2.1文献筛选流程及结果 我们检索7个电子数据库共初检出576篇文献，经仔细筛选后，最终纳入13项临床研究[10-22]。筛选流程及结果见图2。

图2 文献筛选流程及结果 *所检索的数据库及检出文献数具体如下：PubMed(n=309)、Embase(n=63)、Cochrane Library(n=0)、中国知网(n=52)、万方数据库(n=80)、维普中文期刊全文数据库(n=9)和中国生物医学文献数据库(n=59)

2.2纳入文献的基本情况及质量评价 纳入研究的基本特征及质量评价详见表1。

表1 纳入文献基本特征及质量评价

2.3Meta分析结果

2.3.1临床特征 13项研究[10-22]共包括1 302例患者。纳入研究中，与 LncRNA 低表达组相比，LncRNA高表达SCLC患者较早发现为广泛期[OR=6.10，95%CI(4.69，7.93)，P<0.01]、更易出现淋巴结转移[OR=4.91，95%CI(3.17, 7.61)，P<0.01]、更易出现远处转移[OR=5.22，95%CI(3.31, 8.24)，P<0.01]、对化疗反应较差[OR=5.17, 95%CI(3.44, 7.77)，P<0.01]、生存状态较差[OR=5.96, 95%CI(4.22, 8.40)，P<0.01]。两组其余病理特征差异无统计学意义。见表2。

表2 LncRNA 高表达水平与SCLC患者临床特征相关性分析

2.3.2OS 纳入13项研究[10-22]间存在异质性(P<0.1，I2=43.2%)，采用随机效应模型。与LncRNA低表达组相比，LncRNA高表达SCLC患者的OS更短，是SCLC预后不良的影响因素，差异有统计学意义[HR=3.33，95%CI(2.65，4.19)，P<0.01]。见图3。

图3 SCLC患者LncRNA 高表达与低表达OS比较的森林图

2.3.3PFS 共纳入6项研究[10-15]。各研究之间存在异质性(P<0.1，I2=69.4%)，采用随机效应模型，结果显示：与LncRNA低表达组相比，LncRNA高表达的SCLC患者的PFS较差[HR=4.88，95%CI(3.00, 7.94)，P<0.01]。见图4。

图4 SCLC患者LncRNA高表达与低表达PFS比较的Meta分析

2.3.4亚组分析 根据样本量大小(≥100和<100)、生存资料分析方法(单因素和多因素)以及结局指标提取方法(文中直接提取和生存曲线提取)对OS和PFS两个结局指标进行亚组分析，结果显示两组在OS和PFS两个方面的差异仍有统计学意义。见表3。

表3 LncRNA 表达水平与SCLC预后Meta分析的亚组分析结果

2.4敏感性分析与发表偏倚 采用敏感性分析检测各项研究对合并HR的影响，结果显示合并后HR的结果稳定性良好，见图5。对OS绘制漏斗图评价纳入文献的发表偏倚情况，结果显示漏斗图不对称，表明可能存在潜在的发表偏倚，见图6。

图5 SCLC患者LncRNA高表达与低表达OS比较的敏感性分析

图6 SCLC患者LncRNA高表达与低表达OS比较的漏斗图

3 讨 论

近年来，LncRNA作为“新兴明星分子”参与调控肿瘤的发生、发展，尤其与SCLC分期、转移以及预后密切相关。马宣等[23]报道，在SCLC组织中， CCAT2的表达显著高于其在癌旁组织及正常组织中，证实CCAT2与SCLC患者不良预后密切相关，可作为SCLC前期确诊新颖的生物标志物。Niu等[16]研究发现，TUG1表达在SCLC组织和细胞中水平显著高于对照组，TUG1基因在体外显著促进细胞凋亡和细胞周期阻滞，进而抑制细胞迁移和侵袭。王刚等[24]对SCLC患者血清MEG3与OS进行了相关性分析，结果表明患者生存期越长，MEG3表达水平越低。此外，Sun等[22]研究发现，HOTTIP可以通过 上调miR-216a促进SCLC患者bcl-2表达从而诱导化疗药物抵抗，表明HOTTIP有可能成为SCLC临床治疗的一个新的诊断和预后生物标志物。这些研究均表明我们有待于探索lncRNA在判断SCLC预后、治疗中的潜在价值。

本研究结果显示：SCLC患者临床分期、化疗敏感度及生存状态与LncRNA表达水平呈正相关。此外，区别于LncRNA低表达组，LncRNA高表达组OS、PFS明显缩短，因此，LncRNA的高表达可能是SCLC患者不良生存率和不良的临床病理特征的影响因素。且亚组分析结果显示样本量、生存资料分析方法及结局指标提取方法差异对最终结果无影响，敏感性分析结果稳定性好。

本研究严格遵循纳入、排除标准，但仍存在局限性：①所纳入研究对象均来自中国，结论外推受限。②部分纳入研究未能直接提供HR，需手动提取Kaplan-Meier曲线中生存数据，过程中可能存在一定偏倚。③纳入研究中lncRNA的表达水平缺乏统一的截点值，这可能会影响本研究结果。④未能评估联合治疗策略对其他有意义的终点(如生活质量等)的影响，其中化疗治疗方案、靶向药物和疾病分期不同可能存在较大异质性。

综上所述，LncRNA高表达可以预测SCLC患者的不良生存率和不良的临床病理特征，可能是潜在的预后标志物。此外，上述所得结论尚需更多大样本、大规模的高质量临床研究得以验证。