p16INK4a免疫组化染色、DNA倍体在宫颈癌筛查中的应用价值

刘运麟

贵州省黔南州人民医院病理科 贵州都匀 558000

宫颈癌是目前常见的妇科恶性肿瘤之一，其发病率、死亡率位居女性恶性肿瘤中前两位，近年来宫颈癌发病趋于年轻化。我国也为宫颈癌高发区，据相关数据统计显示，我国每年姓曾发病数占全世界新发病例数的28.8%左右，死于宫颈癌者高达2 万多人，需要引起临床重视[1]。对于宫颈癌的诊断在临床中仍以宫颈细胞学检查为主，以往的传统细胞学检查到液基细胞薄层技术虽大大的提高了宫颈癌前病变以及宫颈癌检出率，但对检查结果的判断依赖于临床医生经验，也导致各研究结果报道数据差距大的原因之一。p16INK4a 蛋白检测在各级上皮内瘤病变中应用广泛，可有效提宫颈癌活检的组织筛查准确性。同时，利用DNA 倍体分析系统扫描，可分析细胞核内DNA 含量改变情况，所得诊断结果较为客观。基于此，本文旨在分析p16INK4a 免疫组化染色、DNA 倍体分析在宫颈癌筛查中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年4 月～2021 年3 月在本院行宫颈癌筛查者214 例为研究对象，年龄25～65 岁，平均年龄（38.51±5.47）岁，BIM（22.64±2.55）kg/m2。纳入标准：（1）入选人员均知晓并同意本次研究；（2）均进行p16INK4a免疫组化染色、DNA倍体分析；排除标准：（1）为妊娠期或月经期女性者；（2）近期有宫颈手术或子宫切除者；（3）存在有盆腔放射史者。

1.2 方法

1.2.1 p16 免疫组化染色

使用检查专用的宫颈刷收集患者宫颈及颈管脱落细胞，使用放有保存液的标本瓶中，做成薄层细胞图片，进行p16INK4a 免疫组化染色。使用深圳森盈生物科技公司全自动免疫染色系统及抗体，已知阳性切片为阳性对照。所得结果由两名经验丰富的病理医生进行判读，见表1。

表1 p16 免疫组化染色结果评估

1.2.2 DNA 倍体分析

收集宫颈及颈管脱落细胞，使用放有保存液的标本瓶中，随后做成薄层细胞图片，利用Feulgen 染色染色，作为DNA 倍体分析用厦门麦克奥迪的试剂及医疗扫描诊断系统对经处理好的标本进行扫描，在细胞片上需要收集上皮细胞核8000 个左右，测量积分光密度值，并以同标本中100 个正常的二倍体细胞作为分光密度值参考值（异变系数低于5%），所测得细胞的分光密度值与参照细胞的平均分光密度值比较得到的比值为DNA 指数。通过检测所得指数辨别正常与异常病变的细胞。DNA 指数在1.25～2.5 为增生或疑似病变细胞；DNA 指数超过2.5 为病变细胞。系统将自动收集和保存每个扫描视野并形成图片，每个视野的图片、含有数个或数十个上皮细胞，每张图片上只标注最大的细胞DNA 指数，并按这些DNA 指数的大小将图片从大NJJ，根据顺序排列，由具有经验的细胞病理医生通过这些图片进行常规细胞学诊断，诊断标准同样按TBS 分类标准[2]。组织学病理诊断包括：正常/炎症；CIN（宫颈上皮肉瘤变）根据由轻到低为CIN I、CN II、CIN III、原位癌；浸润癌。

1.3 观察指标

收集宫颈癌筛查者临床诊断结果，以此为基准分析p16 免疫组化染色、DNA 倍体分析在宫颈癌筛查中的，分析p16INK4a 免疫组化染色、DNA 倍体分析在宫颈癌筛查中的应用价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS18.0 软件进行统计分析，计数资料以n（%）表示，采用χ2检验，计量资料以（）表示，两两比较使用t 检验，均以P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌筛查者临床诊断结果

214 例宫颈癌筛查者经临床检查、病理学检查，诊断结果为：正常141 例；阳性73 例（34.11%），分别为：CIN I 45 例，CNII 15 例，CIN III 7 例，原位癌3 例，浸润癌3 例。

2.2 p16 免疫组化染色检查情况 见表2

表2 p16INK4a 免疫组化染色检查情况（n，%）

2.3 DNA 倍体分析检查情况 见表3

表3 DNA 倍体分析检查情况（n，%）

2.4 不同检查对宫颈病变诊断灵敏度、特异度、准确度 见表4

表4 不同检查对宫颈病变诊断灵敏度、特异度、准确度[n(%)]

3 讨论

宫颈癌是发生在子宫颈、宫颈管处的恶性肿瘤，早期进行诊断治疗是提高宫颈癌患者生存率重要手段。在发达国家中对宫颈癌癌前病变检出率可达50%，在癌前筛查开展后死亡率明显降低。而发展中国家，癌前检出率仅为5%，高达95%的女性筛查不充分或从未接触过癌前筛查，在国内有70%左右的女性并未接受过癌前筛查[3]。且早在2006 年世界卫生组织就提议健康卡教育需成为宫颈癌全面防止的重要内容。

P16 蛋白属于基因编码产物，存在于细胞核或细胞质内。在国内外文献研究中均发现许多肿瘤患者中存在p16 基因缺失。在赵雪[4]等人研究也发现，p16、ki67 等因子与宫颈癌前病变以及宫颈癌的进发生、发展存在密切的联系，可为患者临床分级、预后情况评估提供参考资料。在本研究中p16 免疫组化染色检出阳性率为38.31%与病理检查结果相似，且发现随着患者宫颈病变程度与p16INK4a 呈正比。

DNA 倍体分析技术可客观、准确的对细胞形态进行分析，比传统宫颈癌筛查手段更具有优势，可明确诊断指标，所得结果更为客观，在临床中可与常规的细胞学检查结合，提高筛查准确性[4]。在本研究中DNA 倍体分析检查中阳性86 例（40.18%），阴性128 例（59.81%），与病理检查结果比较并无差异（χ2=1.691，P=0.193），与李贝[5]文献研究结果相仿。有文献研究指出，将细胞DNA 倍体技术与其他筛查手段联合使用可提高临床诊断准确性以及筛查敏感性。

在本研究中发现p16INK4a 免疫组化染色以及DNA 倍体分析技术在宫颈癌筛查中均有较高的使用价值，p16INK4a 免疫组化染色对宫颈病变诊断灵敏度、特异度、准确度分别为84.93%、83.56%、87.67%；DNA 倍体分析分别为80.82%、78.08%、84.93%；但两者联合诊断其灵敏度、特异度、准确度95.86%、98.63%、100.00%，明显高于两者单独诊断（P<0.05），提示在临床中为进一步提高筛查精准性，可使用两者结合诊断。

综上所述，p16INK4a 免疫组化染色、DNA 倍体分析在宫颈癌筛查中均有较高的应用价值，两者联合对于不确定性诊断具有一定分流作用，有利于提高诊断准确性，在宫颈癌早期筛查中应用前景较广。