支气管肺泡灌洗NGS检测技术在SCAP中的应用价值研究

2021-08-31赵慧锋李亚民苏金花

西藏医药 2021年4期

赵慧锋李亚民苏金花

浙江大学医学院附属第二医院嘉善分院重症医学科浙江嘉兴 314100

社区获得性肺炎（CAP）是常见的呼吸道疾病之一，人群普遍易感，发病率高，易因初期症状较轻而忽视，逐渐发展成重症肺炎，重症患者（SCAP）临床表现多以呼吸衰竭、休克症状为主要表现，常可累及多脏器或系统功能，最终危及生命。经国外多个研究表明[1-3]：重症医学科病房中SCAP 患者病死率达23～47%。及时的抗感染治疗，并快速、准确识别病原菌是成功救治社区获得性肺炎（特别是重型）、降低病死率的关键，但目前困境在于因为病原菌构成复杂，常规检测难以全面覆盖，且变异、耐药频发，造成常规微生物检测未检出病原菌，且经验性治疗效果不佳，导致病情迁延不愈甚至恶化死亡。在当前严峻形势下，病原菌检测技术不断进步发展，其中mNGS 作为新一代测序技术，直接从分子层面对检测样本中的核酸进行高通量测序，导入平台数据库，根据比对数据库中的序列信息来解读检测样本中的病原体种类及数量，在急危重症和复杂感染的诊疗中发挥显著作用[4]。本文回顾分析了我科运用mNGS 检测技术在SCAP 临床诊治中的应用，以对以后重症肺炎的诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2020 年1 月～2021 年2 月期间本院收治的重症社区获得性肺炎患者50 例，通过提取患者的体液标本,根据检测方法不同分为，分为对照组（26 例）和实验组（24 例），对照组行常规微生物检测，实验组行NGS 检测。对照组男14 例，女12 例，年龄范围35～95 岁，病程1～4 周。实验组男15 例，女9 例，年龄范围23～88 岁，病程1～4 周。两组在年龄、病程等具有可比性（P ＞0.05）。

1.2 诊断标准

根据中国急诊重症肺炎临床实践专家共识[5]，重症肺炎诊断标准，包括2 项主要标准和9 项次要标准符合下列1 项主要标准或≥3 项次要标准者即可诊断，主要标准:(1)气管插管需要机械通气；(2)感染性休克积极液体复苏后仍需要血管活性药物。次要标准:(1)呼吸频率≥30 次/min；(2)血氧分压(PaO2)/吸氧分数(FiO2)≤250；(3)多肺叶浸润；(4)意识障碍和(或)定向障碍；(5)血尿素氮≥20mg/dl；(6)白细胞减少症[白细胞<4×109/ L]；(7)血小板减少症[血小板 <100×109/L]；(8)体温降低(中心体温 <36℃)；(9)低血压需要液体复苏。

根据宏基因组分析和诊断技术在急危重症感染应用专家共识[6]，mNGS 主要适应证：①病情危重需要尽快明确病原体；②特殊病患者如免疫抑制宿主、合并基础疾病、反复住院的重症感染患者需要尽快明确病原体；③传统微生物检测技术反复阴性且治疗效果不佳；④疑似新发病原体、临床上提示可能有一定的传染性；⑤疑似特殊病原体感染；⑥长期发热和(／或)伴有其他临床症状、病因不明的感染。

1.3 方法

对照组行常规微生物检测：痰培养、痰涂片、呼吸道病毒病原抗体谱、肺炎支原体、真菌葡聚糖试验（G试验）等相关检查。

实验组入科24 小时内即行纤维支气管镜，留取肺泡灌洗液10ml 送检mNGS。由高年资中级以上职称医师严格按照《下呼吸道感染细菌培养操作指南》[7]进行操作，留取的支气管肺泡灌洗液由华大基因公司进行冷链转送并行高通量测序。

1.4 观察指标

观察实验组和对照组细菌检出率及检出致病菌检出灵敏度。

1.5 统计学处理：

在数据分析中运用统计软件SPSS 19.0进行数据处理，计数资料以百分率(%)表示，采用卡方检验比较两种检测结果的差异，P <0.05 提示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组细菌检出率见表

表两组细菌检出率

2.2 致病菌检出灵敏度

灵敏度：实验组为75.00%（18/23），对照组52.94%(9/17),两组差异有统计学意义（P <0.05）。（χ2=8.1940，P <0.05）。

3 讨论

3.1 NGS 检测技术的优势

近几年越来越多的研究表明mNGS 作为一种非靶向、广谱的病原学筛查技术，在重症感染领域，特别是在罕见、新发、免疫抑制、疑难导致的重症感染中发挥了关键性作用。NGS 检测技术有其优点，其敏感性高于传统培养、在结核／真菌／病毒和厌氧菌诊断方面优势更明显、抗菌药物使用对mNGS 的影响小于传统培养，根据检测结果可以调整抗菌药物的治疗方案［8］。国外研究表明［9］：mNGS 在对病毒和细菌诊断方面与常规检测技术相比，检出病原菌阳性率高出3倍以上，且具有更高的阴性预测值，尤其适用于免疫抑制及疑难感染宿主。在本次回顾性研究分析中，发现NGS 检测技术细菌检出率更高（95.83% ），且检出致病菌灵敏度（100%）比常规微生物检测技术灵敏度（75%）更高，经治疗患者好转比例更高，在临床中有应用价值。

3.2 目前存在的不足

当然目前NGS 检测技术仍有许多不足，比如检测技术水平很大程度上影响检测结果的准确性及有效性，不同平台具有不同检测流程和质量控制标准，对RNA病毒、真菌、结核菌等检出较低，无法同时得到病原菌药敏结果，检测费用较高，未纳入医保等，限制了NGS 检测技术在临床应用中的普及，暂时还无法替代常规检测技术，有待NGS 检测技术的进一步成熟。