透皮活血中药垫枕枕芯对下肢深静脉血栓形成犬模型的安全性和有效性

雍熙，康藤耀，陈开，王贤芝，张富钊，宁俊洁，任逢春，杨勤，尹洪顺，陈镜全，郑江华

(1.川北医学院附属医院血管外科，四川 南充 637000；2.广元市第一人民医院心胸血管外科，四川 广元 628000；3.北川羌族自治县人民医院，四川 绵阳 622650；4.成都中医药大学附属医院放射科，四川 成都 610000；5.川北医学院附属医院感染科；6.川北医学院临床医学系，四川 南充 637000)

下肢深静脉血栓形成(thrombosis of deep vein of lower extremities，DVT)已经成为最常见的心血管疾病之一，发病率仅次于缺血性心脏病和卒中。因为回流静脉的血栓形成，引起下肢静脉回流障碍、静脉高压、瓣膜破坏及血液倒流，可导致患肢肿胀疼痛，严重者甚至会诱发股青肿、股白肿，乃至肢体缺血坏死[1]。其中，下肢严重的肿胀疼痛使患肢的生理功能部分丧失，严重影响病人的工作及生活质量。然而，深静脉血栓形成经正规抗凝、溶栓治疗后，在3个月内的复发率仍高达14.5%[2]。现为降低DVT的远期复发率、促进患肢症状的快速缓解，结合活血类中医药的特点，制备下肢深静脉血栓形成透皮活血中药垫枕，并初步评价该中药枕芯对犬下肢深静脉血栓模型的安全性和有效性，为其临床应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验用中药透皮制剂

活血中药透皮制剂由桃红四物汤加减(活性成分主要为：红花、川芎、乳香、没药、元胡等)由成都中医药大学附属医院提供，具有补血活血化瘀行气的功效，是可治疗气滞血淤肝气不舒、血栓性疾病的经典方剂，临床应用较广泛。

1.2 试验动物

8月龄比格犬 16只，雄性，体重约11.3～13.9 kg，动物来源：川北医学院实验动物中心(SYXK(川)2018-076)，采用抽签法将实验犬随机分为实验组和对照组，每组各8只。

1.3 试验方法

构建试验犬的下肢深静脉血栓形成模型：参考相关文献[3-4]进行造模。任意选择一侧髂股静脉。超声引导下经颈外静脉及股静脉途径分别将直径10 mm与6 mm的球囊导管置于髂总静脉近心端及股静脉远心端，充盈球囊阻断血流，并经导管注入凝血酶100 U。1 h后行超声检查，4 h后抽瘪两端球囊退出导管，24 h后行静脉超声检查确认是否造模成功。结果显示，16只犬均造模成功。随后，修剪两组试验犬只腿上毛发，并分别将活血中药透皮制剂、透皮制剂(聚硅氧烷类压敏胶不含活血类中药成分)贴附于实验组、对照组试验犬的大腿及小腿表面。

1.4 检查内容

(1)分别于治疗后1、2、4、12、16周周日8∶00至9∶00行试验犬的后肢静脉抽血，比较两组试验动物的D-二聚体、凝血功能、血常规、肝功、肾功等；并于治疗后1、2、4、12、16周周日9∶00至11∶00完善彩超检查以了解血栓再通、复发情况。(2)在治疗后16周处死试验犬，取实验组、对照组血栓处血管及管腔内血栓、心脏、脑组织、肺脏、肝脏和肾脏制作石蜡标本送至川北医学院附属医院病理科行病理学检查。(3)血栓复发评判标准：以D-二聚体水平再次升高并经B超检查提示髂股静脉或其他深静脉管腔增宽、管腔内可见低回声充填为血栓复发标准。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 两组治疗前后血常规比较

治疗前后实验组红细胞(red blood cell，RBC)、白细胞(white blood cell，WBC)、血小板(platelet，PLT)水平等血常规指标与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组治疗前后血常规的比较

2.2 两组治疗前后凝血功能指标比较

治疗前、治疗后1周，实验组的D-二聚体水平高于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后2周，实验组的D-二聚体水平低于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后 4、12、16周，实验组的D-二聚体水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前及治疗后1、2、4、12、16周，实验组的活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)水平与对照组相近，差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前，实验组的凝血酶原时间(prothrombin time，PT)稍低于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后1、2、4、12、16周，实验组的PT稍高于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组治疗前后凝血功能的比较

2.3 两组治疗前后肝肾功能比较

治疗前及治疗后1、2、4、12、16周，实验组肌酐(creatinine，Cr)、谷氨酸-丙酮酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)表达水平与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 两组治疗前后肝肾功能的比较

2.4 两组血栓复发率比较

治疗前及治疗后1、2、4、12、16周，实验组无血栓复发，对照组2例复发，组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5 两组动物心、肺、肾、肝和脑组织标本病理活检

治疗前后实验组与对照组实验心、肺、肾、肝和脑组织标本病理活检均未见明显异常。见图1。

2.6 实验前后两组动物的血栓处、血管及管腔内容物组织标本的血栓彩色多普勒血流显像(CDFI)和苏木精-伊红染色(HE染色)

部分实验组动物治疗后血管得以再通。见图2及图3。

3 讨论

DVT的治疗方式以抗凝治疗为基础，辅以溶栓、活血消肿等对症支持治疗。目前，静脉血栓栓塞症的研究大都聚焦于发病机制[5]、 临床筛查[6-7]、抗凝治疗药物的研发[8-9]，现存手术治疗包括经皮机械吸栓、导管接触性溶栓等[10]，而对于该疾病的物理治疗研究鲜有报道。但是，DVT的物理抬高治疗与患者的康复速度、急性症状持续时间密切相关。当缺乏物理治疗时，DVT的急性症状可长时间持续存在，缓解速率极为缓慢，血栓往往难以完全清除，进而易导致血液回流障碍，引起血栓复发，提高了远期血栓后遗症发生的可能性。血栓性疾病的物理及预防复发治疗，是现阶段国家卫生健康加速康复治疗的重要手段，具有投入小、回报大等优势。刘秋月等[11]研究证实，使用新型可调式抬高器可快速降低患者的血管肿胀程度，减轻疼痛感，增加术后舒适度，并减少并发症的发生。而蓝培桂等[12]指出，桃红四物汤类活血化瘀类中药可促进血栓的吸收，缩短DVT的病程。活血类中草药桃红四物汤作为枕芯，可利用药物的透皮作用，缓慢持续作用于残存血栓的患肢，降低患者血栓的复发率、改善预后[13-15]，减少远期后遗症。

本研究证实，治疗前后实验组的血常规、肝肾功能与对照组比较， 差异均未见统计学意义(P>0.05)，表明中药枕芯未影响机体的血细胞功能、肝肾功能、电解质平衡，安全性较高。

D-二聚体是临床上常用的血栓形成相关检测指标，广泛用于VTE和DIC风险评估、恶性肿瘤、心脑血管疾病等方面，具有敏感性强、检测成本低等优势[16]。本研究发现，可能是由于透皮制剂释放、吸收均缓慢，治疗后1、2周实验组的D-二聚体、APTT、FIB、PT水平与对照组相比，差异均未见统计学意义，而治疗后4、12、16周实验组的D-二聚体水平低于对照组(P>0.05)，证实了该药方的起效时间刚好位于血栓复发率增高的时期(治疗后3～4个月)，通过药物的缓慢吸收可治疗血栓或预防血栓复发；而治疗后4、12、16周，两组血指标差异无统计学意义(P>0.05)，验证了活血类中药透皮制剂药性缓慢而又稳定释放的特点。另外，治疗后实验组的血栓再通率高于对照组。实验组的血栓复发率低于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)，这可能是由于样本量小且试验时间短，对于降低血栓远期复发率的确切性还需进一步研究验证。综上所述，透皮活血中药垫枕枕芯用于下肢深静脉血栓形成动物犬模型后，对血液常规、生化和重要脏器结构功能无明显影响，安全性较高，但可轻度降低血D-二聚体水平，降低血栓的远期复发率，具有一定的临床应用价值。但碍于中草药成分复杂、试验样本量小且动物试验时间较短、试验指标较单一，本研究尚未验证活血类中草药桃红四物汤与华法林等传统抗凝药联合用药的安全性、有效性，及其长期使用对凝血功能的影响，后续仍需开展较大样本量的研究以进一步验证相关结论。