晶芯呼吸道病原菌核酸检测在临床中的应用价值探究

陶文学，陈来秀，李正国，席彩霞，曾多，刘雪梅，李博，魏婷

（甘肃省武威肿瘤医院呼吸内科，甘肃 武威 733000）

呼吸道病原菌主要包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克累伯菌等，目前，其导致的感染已成为全世界主要致死性因素之一。世界卫生组织统计数据显示，呼吸道病原菌感染（5.9%）在世界十大病死原因中位列第三，仅次于冠心病与脑卒中，增加家庭和社会的负担[1-3]。呼吸道病原菌感染表现症状基本相似，单纯依据症状难于有效准确诊断。目前，临床鉴定病原菌的方法主要依靠细菌培养法，但获得结果需3～5 d，易错过控制感染的最佳时期[4-5]。晶芯呼吸道病原菌酸检测可一步完成对靶基因的扩增和检测。基于此，本研究选取2019年4月至2020年1月本院收治的84例疑似下呼吸道感染患者作为研究对象，探讨晶芯呼吸道病原菌核酸检测在临床中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年4月至2020年1月本院收治的84 例疑似下呼吸道感染的患者。纳入标准：研究经本院伦理委员会批准；患者均对本研知情并自愿签署知情同意书。排除标准：咳出、吐出的痰液不合格者；依从性差者。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 巧克力琼浆平板、血琼脂平板、革兰染液（青岛海博生物科技有限公司）、晶芯呼吸道病原菌核酸检测试剂盒（上海纪宁实业有限公司）、全自动细菌鉴定仪（苏州安创仪器有限公司，型号：Phoenix100）、恒温扩增微流控芯片核酸分析仪（成都博奥晶芯生物科技有限公司，型号：Dhelix 1610）。

1.2.2 检测方式 使用鱼跃吸痰器（北京众思康科技发展有限公司），由专业护士指导患者配合吸取呼吸道深部痰液，采集后送至检验科微生物室。晶芯呼吸道病原菌核酸检测：利用荧光染料掺入法进行实时荧光检测，在具有链置换功能的聚合酶（在65 ℃恒温条件下可发生反应）作用下，扩增靶核酸会呈S形曲线扩增，进而对靶基因进行检测与扩增。常规痰培养检：将痰液标本接种于巧克力琼浆平板或血琼脂平板，于37 ℃环境下孵育24 h，选出优胜菌群，革兰染色镜下形态鉴定，上机鉴定。

1.3 观察指标 比较两种检测方式的样本检出阳性率，并分析两种检测方式对8 种传统可培养细菌的检出一致性。根据阳性判断值结合Tp值判读结果，Tp值为晶芯呼吸道病原菌核酸检测完成后软件将输出S 形扩增曲线快速增长的首个拐点时刻减去原点时刻。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料以“”表示，比较采用t检验，计数资料用[n（%）]表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方法结果比较 两种检查方法阳性率比较差异无统计学意义，以痰培养鉴定为金标准，晶芯呼吸道病原菌核酸检测的灵敏度为96.01%（65/67），特异性为76.47%（13/17），见表1。

表1 两种检测方法结果比较Table 1 Comparison of results of the two detection methods

2.2 两种检测方法检测结果一致性分析 8 种传统可培养细菌在84例样本检测中有64（76.19%）例2种检测方法结果一致，分别为肺球链球菌20例（23.81%），金黄色葡萄球菌19例（22.62%），大肠埃希菌8 例（9.52%），肺炎克雷伯菌7 例（8.33%），铜绿假单胞菌5 例（5.95%），鲍曼不动杆菌2 例（2.38%），嗜麦芽窄食单胞菌0 例（0.00%），流感嗜血杆菌3例（3.57%）。

3 讨论

据统计，全球33%的病死是由感染性疾病引发，其中呼吸道感染居各种感染性疾病首位，是威胁人类生命安全的重要疾病之一[6-7]。呼吸道感染的主要病原体为细菌，其种类繁多，若仅采取经验性抗菌治疗，极易造成耐药菌群增加，而需及时确定感染细菌种类，并予针对性治疗，因此，确定病原体对呼吸道感染临床治疗具有重要意义[8--13]。

常规痰培养检查是临床确诊病原体常见操作，但传统培养检测周期较长，操作繁琐，在培养中可能被污染，导致结果准确性较低[14]。晶芯呼吸道病原菌核酸检测技术是一种新的痰标本病原体种类检测技术，操作简单、检测成本低、敏感度高，在63 ℃恒温装置中，将试剂与待测标本DNA 共同放置1 h左右便可判断扩增情况，从痰液标本处理到报告结果全过程仅需2 h，显著缩短了检验周期[15-16]。本研究结果表明，晶芯呼吸道病原菌核酸检测阳性率略高于痰培养鉴定，但差异无统计学意义，表明两者检测结果差异不显著，但传统的痰培养则需将痰标本在保温箱中孵育＞24 h，因此，在相同检出率的前提下应选择更简单、快捷的晶芯呼吸道病原菌核酸检测[17]。同时，以痰培养鉴定为金标准，晶芯呼吸道病原菌核酸检测的灵敏度为96.01%，特异性为76.47%，表明晶芯呼吸道病原菌核酸检测具有较高的灵敏度与特异性。本研究结果显示，两种检测方法一致性较高，其中肺球链球菌与金黄色葡萄球菌的阳性率最高，均＞22%，Yousaf S等[18]研究显示，恒温扩增芯片法检出病原体56株，培养法检出仅11例，即恒温扩增芯片法的灵敏度显著更高，可有效反映呼吸道感染的真实情况，可能原因是痰培养技术中痰标本的保存与扩增过程受各种条件的限制，从而导致未检测到真正的病原体[19-20]。

综上所述，晶芯呼吸道病原菌核酸检测方法较常规痰培养检测法，操作简单，可快速一次性检出全部下呼吸道病源菌，且具有较高的特异性、敏感度与检出率。