CK34βE12、CK5/6、P63、P504s在前列腺良恶性病变中的表达、统计分析及意义

颜赟坤，柳建军，陈浩栋，何光阳,李健维

（1.广东医科大学附属医院泌尿外科，广东 湛江 524000；2.雷州市人民医院泌尿外科，广东 湛江 524200）

前列腺癌是男性恶性肿瘤中发病率较高的肿瘤之一[1-3]。目前主要采用病理检查确诊前列腺癌，但部分恶性前列腺疾病之间的差异较小，单纯依赖HE染色切片易造成临床鉴别诊断困难。因此，探寻高特异性、高敏感性的分子对于早期诊断及治疗具有重要意义，目前对前列腺癌早期筛查主要依靠血清前列腺特异性抗原（PSA）、前列腺特异性膜抗原（PSMA）以及前列腺干细胞抗原（PSCA）等，但由于这些血清学指标存在一定的弊端，特异性和敏感性并不高[4-5]。采取细针穿刺活检进行病理诊断虽然对于诊断前列腺疾病至关重要，但由于活检组织较小，对良恶性前列腺疾病的诊断价值较低。本研究旨在探讨CK34βE12、CK5/6、P63及P504s这4项项指标在前列腺良恶性病变中的表达及临床意义，为临床上提高诊断精确性提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2013年1月至2018年3月本院收治的60例前列腺手术切除及穿刺活检的标本，随机分为前列腺恶性病变组（n=40）和前列腺良性病变组（n=20）。恶性前列腺病变组年龄52～88岁，平均（70.00±6.13）岁；良性前列腺病变组年龄59～87岁，平均（73.00±3.93）岁。两组患者临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。恶性前列腺病变组采用Gleason评分标准进一步分为低危组（2～6分，n=15）、中危组（7分，n=15）和高危组（8～10分，n=10）。良性前列腺病变组根据腺体萎缩情况分为腺体完全性萎缩组（n=15）和腺体部分性萎缩组（n=5）。所有患者均对本研究知情同意，并自愿签署知情同意书。本研究已通过医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法 所有入选对象均进行B 超检测前列腺体积，注意采集前列腺组织标本，保存待检；患者术前检测血清前列腺特异性抗原（PSA），采用HE 染色对前列腺癌组织进行常规的病理检查，并对前列腺癌标本进行Gleason评分，此外，采用免疫组织化学法检测组织标本的CK34βE12、CK5/6、P63 蛋白及P504s 的表达情况。本研究所用小鼠抗人CK34βE12单克隆抗体、小鼠抗人P504s单克隆抗体、小鼠抗人CK5/6单克隆抗体以及小鼠抗人P63单克隆抗体、免疫组化检测试剂盒均等均购自北京中衫金桥生物技术有限公司，采用已知产生阳性的抗体组织标本作为阳性对照，采用磷酸盐缓冲液（PBS）作为阴性对照。

1.2.1 阳性与阴性的染色判定标准 使用显微镜观察组织标本切片，阳性染色为出现棕黄色颗粒，并观察各抗体的表达部位，即P63在细胞核中表达并被着色，CK34βE12、CK5/6以及P504s在细胞质中表达并被染色，在细胞质和细胞核等特定位置中观察到棕黄色颗粒即为阳性染色。

1.2.2 阳性与阴性分级标准 CK34βE12：阴性（-）表示基底细胞未观察到染色的细胞；弱阳性（+）表示可以观察到少数基底细胞着色但着色不连续、间断分布；强阳性（++）表示基底细胞着色但着色不连续、间断分布；极强阳性（+++）表示基底细胞着色并连续且明显。将强阳性（++）和极强阳性（+++）为CK34βE12表达的阳性数值。

1.2.3 P63、CK5/6 及P504S 通过计算，显微镜下可清晰观察到的棕黄色颗粒表达的细胞数/细胞总数×100%作为阴性与阳性的分级标准：阴性（-）表示未观察到染色细胞；弱阳性（+）表示观察到的阳性细胞数＜10%；强阳性（++）表示观察到阳性细胞数＜50%且＞10%；极强阳性（+++）即表示观察到的阳性细胞数＞50%。将强阳性（++）和极强阳性（+++）为P63、CK5/6及P504S表达的阳性数值。

HE切片和免疫组化切片制作完成后应由3名本院病理医师综合做出决策，意见不一致时可继续邀请1名病理医师进一步进行评定，＞50%意见为最终参考意见。

1.3 观察指标 比较恶性前列腺病变组与良性前列腺病变组CK34βE12、CK5/6、P63以及P504s表达；分析恶性前列腺病变组分级与P504s 表达强度的关系；良性前列腺组与CK34βE12、CK5/6和P63表达强度的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，计数资料用例数（n）表示，比较采用Z检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 恶性前列腺病变组与良性前列腺病变组CK34βE12、CK5/6、P63以及P504s表达比较 CK34βE12在恶性前列腺病变组中呈低表达，而在良性前列腺病变组中呈高表达；CK5/6在恶性前列腺病变组中呈低表达，而在良性前列腺病变组中呈高表达；P63在恶性前列腺病变组中呈低表达，而在良性前列腺病变组中呈高表达；P504s在恶性前列腺病变组中呈高表达，而在良性前列腺病变组中呈低表达；两组CK34βE12、CK5/6、P63 以及P504s 表达情况比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 恶性前列腺病变组与良性前列腺病变组CK34βE12、CK5/6、P63以及P504s表达情况比较Table 1 Comparison of CK34βE12,CK5/6,P63 and p504S expression between the malignant prostate disease group and benign prostate disease group

2.2 恶性前列腺病变组分级与P504s 表达强度的关系 低危组、中危组、高危组P504s 表达强度比较差异有统计学意义（P＜0.05）；低危组表达强度明显低于高危组和中危组（P＜0.05），但中危组和高危组P504s表达强度比较差异无统计学意义，见表2。

表2 恶性前列腺病变组分级与P504s表达强度的关系Table 2 Relationship between the grade of malignant prostate disease group and the expression intensity of P504s

2.3 良性前列腺组与CK34βE12、CK5/6 和P63 表达强度的关系 腺体部分性萎缩组和腺体完全性萎缩组CK34βE12、CK5/6以及P63表达强度比较差异无统计学意义。腺体部分性萎缩组中部分样本不表达CK34βE12 和CK5/6；腺体完全性萎缩组中，部分样本不表达CK5/6，见表3。

表3 良性前列腺组与CK34βE12、CK5/6和P63表达强度的关系Table 3 Relationship between benign prostate disease group and expression intensity of CK34βE12,CK5/6 and P63

3 讨论

目前，临床上对于前列腺的诊断，一般采取前列腺特异性抗原即PSA抗原浓度和前列腺体积结合患者的临床症状及体格检查综合评定，但准确性并不高，而提高诊断前列腺的准确率可有效并及时改善患者的生存状况及预后，因此，分子标志物已成为肿瘤研究的热点[6]。CK34βE12、P63、CK5/6 以及P504S 分子标志物在正常和异常组织中存在表达差异，因此，检测上述4 种蛋白对于前列腺癌的预防和治疗均具有重要临床意义。

CK34βE12与CK5/6同属于角蛋白，可在腺体上表达，因此，临床上多联合CK5/6 用于基底细胞的临床诊断，但单独检测CK34βE12特异性及敏感性不高。由于P504s在细胞质中产生，本质是一种蛋白质，可在线粒体中被检测到，其主要功能是维持脂肪酸的平衡，参与脂肪酸的氧化过程。有研究[7]指出，P504s参与前列腺癌的发生发展，如参与脂肪酸氧化过程，这与前列腺发展为前列腺癌密切相关。本研究结果表明，CK5/6 在恶性前列腺病变组中呈低表达，而在良性前列腺病变组中现高表达。患者P504s 表达与前列腺癌的发生呈正相关，但P504s在临床中诊断价值较低，因此，需联合其他指标综合诊断评定。Gleason 分级中低危组P504s 表达强度明显低于高危组和中危组（P＜0.05），表明P504影响前列腺癌的进展。细胞角蛋白CK5/6 是免疫组化染色检测中较常用的一种基底细胞标志性抗体[6]。这种角蛋白的特点是在癌组织中低表达甚至不表达，而在正常组织器官中呈高表达，CK5/6 在恶性前列腺病变组中呈低表达，而在良性前列腺病变组中呈高表达。P63在抑癌基因中研究广泛，通常可在前列腺基底细胞核中被检测到，且P63 特异性较高，因此，在组织器官中稳定表达，因此，研究P63对鉴别良恶性前列腺疾病中具有重要价值。本研究中P63 在恶性前列腺病变组中呈低表达，而在良性前列腺病变组中呈高表达。腺体部分性萎缩组中，部分样本不表达CK34βE12和CK5/6；腺体完全性萎缩组中，部分样本不表达CK5/6，增加了鉴别良恶性前列腺疾病难度[7-8]。目前，研究报道多建议采用多指标综合进行前列腺癌的鉴别和诊断，P504s在前列腺癌组织中呈明显高表达，而CK34βE12、P63、CK5/6 表达明显较低，表明联合检测具有较高的临床应用价值[9-12]。

综上所述，经联合检测 CK34βE12、CK5/6、P63 以及P504s的表达水平进一步鉴别前列腺良恶性疾病，并进行早期诊断和治疗，保证预后效果。