子痫前期高危孕妇妊娠中期miR-101表达预测发病价值

万红霞 周 宇

四川省成都市双流区第一人民医院/四川大学华西空港医院(610200)

子痫前期(PE)是妊娠高血压疾病中比较严重的一类，除典型高血压症状外还伴蛋白尿，若不积极干预随妊娠孕周增加高血压及肾脏损伤逐步加重，后续可影响其他脏器功能并直接威胁母儿生命安全[1-2]。目前对PE临床高危因素的讨论较多，认为合并孕前高血压、肥胖、PE家族史等孕妇发生PE的风险较高[3-4]，但在临床研究中发现PE高危孕妇发病情况仍存在较大差异，推测除上述临床因素外还存在某些重要影响因素。微小RNA(miRNAs)与PE的出现密切相关。不少研究[5]指出miRNAs可能成为PE的新型诊断及靶向干预分子。毛雪宝[6]研究指出敲低miR-101表达可促进胎盘滋养细胞的凋亡，可能是控制PE发生发展的关键分子之一。目前关于miR-101在高危孕妇PE发病预测研究极少，本文以此为切入点展开讨论，旨在为PE的预测及早期干预寻找指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年1月-2020年1月本院产前检查有PE危险因素的孕妇198例。纳入标准：①初次产检时孕周<24周；②单胎；③合并≥1项子痫前期高危因素，如既往PE病史，子痫前期家族史，孕前或首次产检体质指数(BMI)≥35kg/m2，首次产检时舒张压≥80mmHg，孕前慢性高血压、糖尿病、肾脏疾病等病史，抗磷脂抗体阳性，年龄>40岁，距前次妊娠间隔时间≥10年；④采集血液样本为妊娠中期(孕14～19+6周)；⑤入组时尚未确诊子痫前期；⑥在本院规律接受产前检查，孕妇本人签署知情同意书。排除标准：①合并妊娠期糖尿病、妊娠期心脏病等其他妊娠合并症；②合并严重认知异常、精神疾患等无法配合产检；③多胎妊娠；④合并胎膜早破、前置胎盘等危险妊娠情况。参照PE诊断标准[7]，根据入组孕妇是否发展为PE分为PE组和非PE组。本研究经医院伦理委员会审核批准。

1.2 外周血miR-101检测

留取孕妇孕中期产前检查时空腹外周静脉血标本提取总RNA，将RNA反转录为cDNA，反应条件：37℃ 60min、95℃ 5min，cDNA溶液保存于-20℃。取10μl cDNA溶液加入100μl ddH2O。将U6作为miRNA定量内参。U6上游引物5’-GAATCGAACGCTGATGCCA-3’，下游引物5’-ATCGAGCCGTAGAGGCTA-3’；miR-101上游引物5’-CGATGAAGCTGAGCGTAGA-3’，下游引物5’-TGCGAAGCTGAAGCGTGAG-3’。荧光定量PCR反应条件：94℃预变性1min→90℃变性5s→60℃复性30s→72℃延伸60s，共计40个循环。2﹣△△Ct法计算miR-101的相对表达倍数。

1.3 临床资料收集

收集所有孕妇临床资料，包括年龄、分娩情况、采血周数、首次产检血压(收缩压、舒张压)、首次产前检查时BMI、孕前基础疾病(慢性高血压、2型糖尿病、肾脏病变)、子痫前期/子痫病史、自然流产史。

1.4 统计学方法

数据计算使用软件SPSS 18.0。计数资料比较采用χ2检验；计量资料比较采用独立样本t检验。miR-101对子痫前期发病的预测价值使用受试者工作特征(ROC)曲线，发病危险因素分析采用logistics回归模型。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1外周血miR-101表达

PE组37例，孕中期外周血miR-101(0.65±0.19)高于非PE孕妇孕中期外周血miR-101(0.56±0.13)(P<0.05)。

2.2 孕中期外周血miR-101预测高危孕妇PE发生价值

ROC曲线显示，孕中期外周血miR-101表达水平预测高危孕妇发生PE的最佳截断值为0.605，AUC为0.841(95%CI 0.768～0.914)，灵敏度70.2%、特异度75.7%。

2.3 高危孕妇发生PE的单因素分析

PE组与非PE组孕妇的年龄、采血周数、孕期2型糖尿病及肾脏病变、子痫前期/子痫病史、自然流产史等无差异(P>0.05)；分娩史、首次产前检查血压及BMI、孕前慢性高血压、孕中期miR-101水平等存在差异(P<0.05)。见表1。

表1 高危孕妇发生PE单因素分析

2.4 高危孕妇发生子痫前期多因素分析

将高危孕妇发生PE情况作为因变量(0=非子痫前期，1=子痫前期)，将单因素分析中具有差异的指标(分娩情况、首次产检血压、首次产检BMI、孕前慢性高血压、孕中期miR-101水平)纳入logistics回归模型。分析发现，初产妇、首次产检收缩压及舒张压较高、首次产检BMI较高，合并孕前慢性高血压、孕中期外周血miR-101水平>0.605分别是高危孕妇发生PE的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 高危孕妇发生PE多因素分析

3 讨论

miR-101已被发现在多种恶性肿瘤中呈异常表达，如在膀胱癌[8]、乳腺癌[9]中均发现其存在异常低表达，靶向上调其表达后可抑制肿瘤细胞的增殖侵袭等。而miR-101在PE患者胎盘组织中存在高表达，邹艳芬等[10]指出miR-101可能通过调控内质网蛋白44调节子痫前期内质网应激诱导的滋养细胞凋亡；毛雪宝等[6]认为miR-101可能通过负性调控基质金属蛋白酶-1参与子痫前期的发生发展过程。鉴于miR-101异常表达对子痫前期发生发展的影响，推测其可能在子痫前期发病早期预测方面也存在一定价值，但相关研究目前开展极少。

PE临床高危因素对孕妇后续发病的预测价值仍存在较多争议。本文PE孕妇孕中期外周血miR-101表达水平高于非PE孕妇，与既往基础研究结论基本吻合，推测该时期外周血miR-101表达水平对PE的发生有预警价值。进一步经ROC曲线分析发现，孕中期外周血miR-101表达水平预测高危孕妇发生PE的灵敏度、特异度(70.2%、75.7%)较理想，提示血miR-101水平有一定预测价值，可能为临床工作者疾病风险分层、治疗方案制定等提供更多信息。

为进一步明确孕中期外周血miR-101表达水平对PE发病的影响，将包括该指标在内的其他临床资料纳入logistics回归模型。发现孕中期外周血miR-101水平>0.605、初产妇、首次产检收缩压及舒张压较高、首次产检BMI较高，合并孕前慢性高血压分别是高危孕妇发生PE的独立危险因素。该结论说明孕中期外周血miR-101异常高表达可能促进了高危孕妇PE发病。林静等[11]研究指出高龄初产妇发生胎膜早破、子痫前期/子痫、妊娠期糖尿病等不良妊娠结局的风险高于高龄经产妇。首次产前检查血压及BMI较高，合并孕前慢性高血压已在既往较多研究中被认为是子痫前期发生的高危因素[12-14]。

综上所述，PE高危孕妇孕中期外周血miR-101表达水平异常增高是PE发病的独立危险因素，有早期PE发病预警价值。提示对临床PE发生风险评估、治疗方案制定等有一定指导意义。