大黄水煎液对家兔离体空肠平滑肌收缩功能的影响

张娟娟 王 锦 姜现瑞

（河西学院医学院，甘肃 张掖 734000）

大黄为蓼科植物唐古特大黄、掌叶大黄或药用大黄的根茎。主产于我国青海、甘肃、四川等地；一般秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥可得。其功效有泻下攻积，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经，利湿退黄。用于实热积滞便秘，目赤咽肿，痈肿疔疮，肠痈腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，跌打损伤，湿热痢疾，黄疸尿赤，淋证，水肿；外治烧烫伤[1]。据报道[2-3]，大黄的活性成分主要是蒽酮类、多糖类等，可通过抗病毒作用、消炎作用、清除体内氧自由基的作用等，对机体的消化、免疫、心血管及泌尿系统产生一定的影响，乃至对慢性肾功能衰竭也有一定的治疗作用。也有动物实验[3-4]证明大黄可通过促进大肠蠕动、离子分泌和减少水分吸收的机制发挥泻下的功效。本研究利用大黄“泻下攻积”的特点，取实验用家兔的离体空肠平滑肌，采用平滑肌灌流的方法，观察在不同浓度条件下大黄水煎液对平滑肌收缩作用的影响，同时，对比大黄水煎液与乙酰胆碱对平滑肌收缩作用的影响及大黄水煎液对阿托品抑制平滑肌收缩后的影响，具体分析大黄水煎液作用于平滑肌的可能机制。

1 设备、药品与方法

1.1 设备 BL-420生物信号采集系统（成都泰盟），SV-8离体组织器官恒温灌流装置（成都泰盟），FT-100传感器（成都泰盟），HW-500恒温水浴槽（成都泰盟），一般手术操作器械套装。

1.2 药品 乙酰胆碱（上海笛柏生物科技有限公司、上海笛柏化学品技术有限公司，生产批号：P/NK900017），阿托品（天津遂成药业股份有限公司，批号：1702231），0.9%生理盐水（天津益仁达，批号：20160620），10%氯化钾（双双化工，批号：20150402），10%硫酸镁（天津凯信，批号：20170603），5%磷酸二氢钠（天津致远，批号：20161225），碳酸氢钠（天津凯信，批号：20161208），氯化钙（天津致远，批号：20170413），葡萄糖（天津致远，批号：20170310）。

1.3 台氏液配置 1 L台氏液：NaCl 8 g、NaHCO31 g、10%KCl 2 mL、CaCL21.8 mL、10% MgSO42.6 mL、5% NaH2PO41.3 mL、葡萄糖1 g。

1.4 大黄水煎液配置 大黄50 g（购自张掖市惠仁堂连锁药店），加水过药面200 mL，浸泡30 min，煎煮至100 mL，即得0.5 g/mL的大黄水煎液[5]。

1.5 实验动物 本研究起自2019年12月，计划于2021年12月结束。新西兰大白兔10只，于2020年9月购自张掖市誉诚医药生物科技有限公司，雌雄不限，体质量1.5～2.0 kg。实验前12 h禁食，饮水不限。

1.6 离体平滑肌标本制备 用木槌击打家兔头部致昏迷后，沿腹中线迅速开腹，取空肠肠段（1.5～2.0 cm）数段，置预先准备好的4 ℃台氏液中备用[6-7]。

1.7 离体空肠平滑肌收缩曲线的描记 将肠段随机分成两组，即对照组和实验组。把预先准备好的37 ℃的台氏液注入灌流浴槽中，固定肠管一端于张力换能器上，另一端用通气钩钩住，然后放入含10 mL台氏液的恒温水浴槽中。将张力换能器与BL-420生物信号采集系统的通道相连。点击机能实验项目选项，选中“消化道平滑肌的生理特性”模块。设置相应的调控参数：时间是3 s，描记速度是2.50 s/div，滤波F是50 Hz，增益G是1 mV，最后开始运行并描记。

在离体平滑肌进行自主收缩的情况下，先观察10 min。然后将0.5 g/mL的大黄水煎液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL和0.4 mL分别逐次加入相应的水浴槽中（预先抽出与所加大黄水煎液等量的台氏液），使含10 mL台氏液的恒温水浴槽中的药物浓度分别为0.05 g/10 mL、0.1 g/10 mL、0.15 g/10 mL、0.2 g/10 mL。并重复实验10次，记录离体平滑肌的收缩变化曲线。把标本用台氏液反复冲洗3次后，滴加浓度为10-4mol/L阿托品0.2 mL，2 min后滴加0.02 g/mL大黄水煎液0.2 mL，记录离体平滑肌的收缩变化曲线并冲洗干净。注意在不同剂量及不同药物处理标本出现反应后，要用台氏液反复冲洗平滑肌标本3次，待离体平滑肌运动恢复稳定后再进行下一个操作处理[8-9]。

1.8 数据记录 在进行不同操作处理时，先描记每个操作后1 min内的全部曲线，其收缩波的平均张力即收缩力（g），其收缩波的个数即收缩频率（次/分）。于给药前及给药后2 min，分别描记收缩幅度和收缩频率[9]。

1.9 数据处理 利用SPSS Statistics20.0软件对实验数据进行统计学分析，全部数据表示为（），并采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常离体平滑肌收缩曲线 在恒温水浴的条件下，正常对照组平滑肌的活动幅度、频率及张力随着时间的延长比较稳定，其波形规律而稳定，表现为具有自动节律性、伸展性及紧张性的收缩等特性。见图1。

图1 正常家兔离体空肠平滑肌收缩曲线

2.2 不同浓度的大黄水煎液对家兔离体平滑肌收缩作用的影响 浓度为0.005 g/mL、0.01 g/mL大黄水煎液组与正常对照组比较，其收缩幅度有明显的差异（P＜0.05），浓度为0.015 g/mL、0.02g/mL大黄水煎液时家兔离体空肠平滑肌收缩幅度与正常对照组相比无明显差异（P＞0.05），浓度为0.005 g/mL、0.01 g/mL、0.015 g/mL大黄水煎液组与正常对照组比较收缩频率有明显的差异（P＜0.001、P＜0.001和P＜0.01）。浓度为0.02 g/mL大黄水煎液时家兔离体空肠平滑肌收缩频率与正常对照组比较无明显差异（P＞0.05），浓度为0.01 g/mL大黄水煎液组和浓度为0.005 g/mL大黄水煎液组比较收缩频率有明显的差异（P＜0.01）。通过不同浓度大黄水煎液组互相对比，其中浓度为0.01 g/mL大黄水煎液促进家兔离体空肠平滑肌收缩功能的效果最明显。见表1、表2和图2。

表1 不同浓度大黄对空肠平滑肌收缩振幅的影响（，n=20）

表1 不同浓度大黄对空肠平滑肌收缩振幅的影响（，n=20）

注：与正常对照组对比，aP＜0.05；与0.005 g/mL对照组。

表2 不同浓度大黄对空肠平滑肌收缩频率的影响（，n=20）

表2 不同浓度大黄对空肠平滑肌收缩频率的影响（，n=20）

注：与正常对照组对比，aP＜0.01，bP＜0.001；与0.005 g/mL对照组对比，cP＜0.05，dP＜0.01。

图2 不同浓度大黄水煎液对离体空肠平滑肌收缩功能影响曲线（A：0.005 g/mL大黄水煎液对离体空肠平滑肌收缩功能影响曲线；B：0.01 g/mL大黄水煎液对离体空肠平滑肌收缩功能影响曲线；C：0.015 g/mL大黄水煎液对离体空肠平滑肌收缩功能影响曲线；D：0.02 g/mL大黄水煎液对离体空肠平滑肌收缩功能影响曲线）

2.3 大黄水煎液对离体家兔空肠平滑肌阿托品抑制作用的影响 0.2 mL阿托品（10-4mol/L）使空肠平滑肌收缩功能抑制，紧张度减弱，表现为收缩曲线频率减慢，收缩幅度减弱。2 min后滴加0.01 g/mL大黄水煎液0.2 mL，收缩频率增加，幅度增强。大黄水煎液可以改善阿托品对家兔离体空肠平滑肌的抑制作用，使空肠平滑肌兴奋。见图3。

图3 0.01 g/mL大黄水煎液对阿托品抑制后的家兔离体空肠平滑肌的作用曲线

3 讨论

3.1 不同浓度大黄水煎液对家兔离体空肠平滑肌的促进作用 在生理状态下，肠道通过持续不断的蠕动，推动食糜逐渐向远端移动，进而消化和吸收其中的营养物质，这是肠道蠕动最基本也是最重要的作用。小肠的运动方式包括蠕动、紧张性收缩和分节运动等，都是小肠平滑肌活动具体而独特的外部表现。要判断小肠兴奋性的大小，可以通过描记肠道平滑肌收缩张力的大小及收缩频率的快慢来判断[10]。失去外来神经支配的离体空肠平滑肌，在其环行肌黏膜下依然存在具有活性的壁内神经丛。其与肠肌丝Cajal间质细胞可以启动和传导小肠慢波活动。而且，Cajal间质细胞很容易受所处环境的离子水平、激素水平及神经递质等作用的影响而产生自发活动，因此，只要存在适宜的条件，空肠平滑肌就能够保持其收缩特性及其壁内神经丛的作用[11-12]。

大黄具有“泻下攻积”的功效，是中医临床常用的泻下药，国外常将其作为轻泻剂。现在，国内医学界对大黄的认识已经非常明确，已发现的植物化学成分结构已超过160个，主要集中在蒽醌类、蒽醌衍生物类、蒽酮类、有机酸及糖类等[13]。其中具有泻下的主要成分是番泻苷A和大黄酸苷。于向鹏等[14]发现，大黄对家兔离体小肠平滑肌收缩活动有促进作用，本文实验通过恒温灌流的方法，发现不同浓度的大黄水煎液均能有效促进家兔离体空肠平滑肌的收缩作用，使平滑肌收缩频率加快，幅度增大。不同浓度大黄水煎液组之间相互对比，其中以浓度为0.01 g/mL大黄水煎液促进家兔离体空肠平滑肌收缩功能的效果最明显；0.005 g/mL、0.015 g/mL组也有不同程度的促进。但0.02 g/mL大黄水煎液组的促进作用明显减弱。究其原因，可能是大黄的有效成分之一大黄素增加空肠组织中组胺的含量，并促进Cl-的分泌，使得肠道内的水分增加，起到一定的通肠润便的作用[3]。或者可能是大黄蒽酮和大黄酸蒽酮苷在小肠吸收，作用于肠黏膜神经丛，从而使小肠运动增强[10]。也可能是大黄水煎液抑制了Na+-K+-ATP酶的活性，通过刺激肠壁使其反射性推进空肠蠕动幅度的增强[4]。

3.2 大黄水煎液能阻断阿托品对平滑肌的抑制作用 节后胆碱能神经支配的效应细胞上有一种M型受体，阿托品可阻断其作用，使小肠平滑肌的收缩幅度减弱，收缩频率减小。吕金胜等[15]发现阿托品可以拮抗大黄增加肠道平滑肌的收缩频率。本实验结果显示，加入大黄水煎液后，阻断了阿托品对家兔离体空肠平滑肌收缩功能的抑制。证明大黄可以改善阿托品对家兔离体空肠平滑肌收缩功能的抑制作用，这与吕金胜等的研究结果一致，其作用机制还有待于进一步的研究。

4 结论

①实验结果表明：不同浓度条件下的大黄水煎液均能促进家兔离体空肠平滑肌的收缩频率和收缩幅度，而且随着浓度的增加其促进作用先增强后减弱；其中浓度为0.01 g/mL大黄水煎液促进家兔离体空肠段平滑肌的效果最明显。②实验结果表明：大黄水煎液可以改善阿托品对家兔离体空肠平滑肌的抑制作用，其作用机制还有待于进一步的研究。