抗鸽巴氏杆菌的中药有效成分筛选

令狐远凤 杨琦 张宝太 廖正波 段世宇 张家莉

（贵州大学动物科学学院 550025）

1 材料与方法

1.1 试验材料

鸽巴氏杆菌，菊芋、苦参碱、银杏叶黄酮粗提物、芦荟大黄素、硫酸黄连素、盐酸小檗碱、艾叶提取物、白头翁提取物、黄芩苷，培养基等。

2 方法

2.1 中药有效成分的抑菌试验

提前制备好药敏纸片，用微量移液器吸取鸽巴氏杆菌菌液37℃24h 的培养物50ul，用涂布器将培养物在加有血清的营养琼脂培养基上均匀分布，放置1h，贴好药敏纸片，每个平板贴放4 种不同药敏片，平板中间放置乙醇浸泡的药敏片作为对照。最后将平板放在恒温培养箱中37℃培养18h，取出后用直尺测量抑菌圈的直径。抑菌圈直径≥20mm 为极敏，15～20mm为高敏，10～14mm 为中敏，≤10mm 为低敏。

采用试管两倍稀释法测定9 种中药液对鸽巴氏杆菌的体外最小抑菌浓度。取8 支灭菌试管，分别加液体血清培养基2ml，第1 管加2ml 硫酸黄连素中药液，吹吸3 次，让试管内液体均匀混合后再吸取2ml 加至第2 管，同样步骤，直至第7 管，第7 管吸取2ml 弃去，使之依次倍比稀释，然后在1～8 号试管用微量移液器取活菌数较高范围内计算好浓度好的鸽巴氏杆菌菌液50ul，第8 管不加中药液，作为空白对照。将8 支试管置于37℃温箱培养24h。取出试管仔细观察细菌的生长情况，与8号不加中药液的空白对照组的浊度相比较，判断细菌是否在试管中生长，最低浓度的是以肉眼是否能观察到细菌生长来被判定，没有细菌生长则为中药的最小抑菌浓度（MIC）。

3 结果

由表1 可知，硫酸黄连素、盐酸小檗碱、艾叶提取物、苦参碱、黄芩苷对鸽巴氏杆菌有一定的抑菌作用，芦荟大黄素、菊芋、白头翁提取物、银杏叶黄酮粗提物对鸽巴氏杆菌没有抑菌效果。几种有抑菌效果的中药液从高到低依次为硫酸黄连素＞盐酸小檗碱＞艾叶提取物＞黄芩苷＞苦参碱。

表1 9 种中药液对鸽巴氏杆菌的抑菌作用（单位：mm）

由表2 可知，硫酸黄连素的1 号和2 号试管内无细菌生长，3～8 号试管涂布的平板有菌落长出，该中药的最小抑菌浓度为26.25mg/ml，最小杀菌浓度为52.5mg/ml。盐酸小檗碱的1～5 号试管内均无细菌生长，只有5 号试管涂布的平板有菌落长出，其最小抑菌浓度为0.16mg/ml。艾叶提取物1～5 号试管内均无细菌生长，只有5 号试管涂布的平板有菌落长出，该中药的最小抑菌浓度为0.47mg/ml。黄芩苷1～4 号试管内均无细菌生长，只有4 号试管涂布的平板有菌落长出，该中药的最小抑菌浓度为0.25mg/ml。苦参碱1～4 号试管均无细菌生长，有4号试管涂布的平板有菌落长出，该中药的最小抑菌浓度为6.25mg/ml。白头翁提取物、芦荟大黄素、菊芋和银杏叶黄酮粗提物涂布的平板均有菌落长出，对鸽巴氏杆菌没有抑菌效果。

4 讨论

目前，治疗巴氏杆菌的方法主要采用抗生素和疫苗接种，但使用高浓度抗菌药物预防、治疗细菌性疾病时往往会导致养殖场产生严重的耐药性和抗菌药物残留，给人类健康和养殖业带来危害[1-2]。而且疫苗接种有效期时长较短[3]，随着对大量抗菌药物的应用不合理，特别是抗菌生长促进剂被作为抗菌药物添加到饲料中，使巴氏杆菌表现为耐药率高、呈多重耐药、耐药范围广等特点[4]，其结果不仅给治疗和控制该病带来困难，还使抗生素在动物体内的残留更加严重，对动物食品安全造成危害[1,5,6]。本试验筛选了5 种效果较好的抗巴氏杆菌中药有效成分，其中盐酸小檗碱和黄芩苷抑菌效果最好，为临床防治鸽巴氏杆菌病提供了新的治疗方法。