甲状腺功能减退症患者外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与心血管病变的关系

刘平贤，张浩，李伟汉，陆佳团

（南阳市中心医院乳腺甲状腺外科，河南 南阳 473009）

甲状腺功能减退是指因甲状腺激素合成、分泌减少以及生理效应不足致使机体代谢降低的疾病[1,2]，临床根据促甲状激素（TSH）将其分为临床甲减和亚临床甲减。相关报道显示女性发病率高于男性，且年龄越大发病率越高[3]。锌指蛋白A20也称肿瘤坏死因子α诱导蛋白3，是指具有特征性锌指结构的一类蛋白，有关研究显示锌指蛋白A20可参与炎症反应并对细胞凋亡具有抑制作用，在免疫调节中具有重要作用[4,5,6]。甲状腺激素对心血管功能具有调节作用，可影响心肌细胞、传导系统以及周围血管疾病发展，随着心血管疾病发病率不断上升，探究心血管疾病与甲状腺功能之间相关性成为临床研究热点。本研究旨在探讨甲状腺功能减退症患者外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与心血管病变的关系，以期为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年1月-2020年1月本院收治的35例甲状腺功能减退患者为研究组，纳入标准:⑴符合甲状腺功能减退诊断标准[7,8];⑵TSH＞5.4mIU/L，FT3、FT4均有不同程度降低表现；⑶临床资料完整；⑷依从性较高者；⑸自愿参与并签署研究知情同意书。排除标准：⑴合并精神系统疾病者；⑵合并原发性高血压、糖尿病、高脂血症、动脉粥样硬化者；⑶心、肝、肾等重要器官功能代谢障碍者；⑷有血液系统、免疫系统疾病者；⑸合并恶性肿瘤者；⑹妊娠期或哺乳期者；⑺近一个月内服用甲状腺、糖皮质激素类药物者；⑻拒绝参加此次研究者。研究组男21例，女14例；年龄25～60岁，平均年龄38.18±3.45岁；体重50～70kg，平均体重60.38±4.71kg，体质指数22.54±0.76kg/m2；同期28例健康体检者为对照组，其中男20例，女8例；年龄26～62岁，平均年龄38.65±3.29岁；体重50～70kg，平均体重61.15±3.94kg，体质指数22.28±0.91kg/m2。两组一般资料比较无显著差异（P＞0.05），可比较。本研究经院伦理委员会审核并一致通过。

1.2 方法 抽取晨起空腹患者静脉血8ml，3ml静脉血离心后留取血清置于-20℃冰箱待检，采用电化学发光法（选用罗氏Cobas8000c701全自动生化仪）对促甲状腺激素（TSH）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）进行检测；剩余5ml肝素抗凝留取血浆采用密度梯度离心法将外周血单个核细胞分离出置于37℃二氧化碳温箱培养4h，然后将上清液去除获得贴壁单核细胞加入培养液进行培养，提取上清液后利用4%多聚甲醛固定30min，采用免疫组织化学法检测单核细胞锌指A20蛋白水平：⑴0.01MPBS洗涤2次，时间每次3min，再加入打孔液在室温下静置10min；⑵0.01MPBS洗涤2次，时间每次3min，再加3%过氧化氢于室温下处理15min；⑶0.01MPBS洗涤2次，时间每次3min，再加血清封阻于室温下15min；⑷加1:50兔抗人A20多克隆抗体，以0.01MPBS代替阴性对照，并于4℃下过夜；⑸0.01MPBS洗涤3次，时间每次3min，加入生物素标记山羊抗小鼠IgG，37℃下孵育20min；⑹0.01MPBS洗涤3次，时间每次3min，滴加辣根过氧化物酶标记链酶卵白素工作液，室温孵育15min；⑺0.01MPBS洗涤2次，时间每次3min；⑻DAB显色，苏木素染核，脱水、透明、封固镜检。采用酶偶联比色法检测总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。采用酶联免疫吸附法（仪器及试剂由北京福瑞生物工程公司提供）检测高敏-C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平。

1.3 观察指标 ⑴甲状腺功能：TSH、FT3、FT4水平；⑵血脂、炎性因子水平：TC、TG、HDL-C、LDLC、hs-CRP、TNF-α、IL-6水平；⑶外周血单核细胞锌指蛋白A20水平；⑷心血管病变：冠心病、高血压、心绞痛、心力衰竭等发生情况；⑸外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与心血管病变相关性。

1.4 统计学处理SPSS20.0统计学软件分析和处理，计数资料采取率（%）表示，行χ2检验，计量资料采取()表示,行t检验,相关性分析采用Spearman相关性分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 两组甲状腺功能比较 研究组TSH水平高于对照组（P＜0.05），研究组FT3、FT4水平低于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 两组甲状腺功能比较（）

表1 两组甲状腺功能比较（）

组别 n研究组对照组35 28 t P TSH（mIU/L）FT3（pmol/L）10.89±3.26 1.73±0.50 28.894 0.000 4.13±1.22 4.54±0.58 3.188 0.002 FT4（pmol/L）13.84±4.10 15.29±3.01 3.024 0.003

2.2 两组炎性因子水平、外周血单核细胞锌指蛋白A20水平比较 研究组TC、TG、HDL-C、LDL-C、hs-CRP、TNF-α、IL-6水平高于对照组（P＜0.05）,研究组外周血单核细胞锌指蛋白A20水平低于对照组（P＜0.05），见表2。

表2 两组血脂水平、炎性因子水平、外周血单核细胞锌指蛋白A20水平比较

2.3 两组心血管病变发生情况比较 研究组冠心病、高血压、心绞痛、心力衰竭发生率均高于对照组（P＜0.05），见表3。

表3 两组心血管病变发生情况比较

2.4 甲状腺功能减退症患者外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与心血管病变相关性 外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与hs-CRP、TNF-α、IL-6呈正相关，见表4。

表4 甲状腺功能减退症患者外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与心血管病变相关性

3 讨论

随着环境变化、生活节奏加快，甲状腺功能减退发病率逐年上升并有年轻化趋势[9]。TSH由垂体前叶分泌，主要作用为促进甲状腺激素合成、分泌,甲状腺激素升高或降低其TSH会出现相反变化，二者之间形成负反馈调节机制。FT3、FT4是T3、T4的生理活性形式，与T3、T4比较灵敏度更高，可真实反馈甲状腺代谢状态。本研究结果显示研究组TSH水平高于对照组，FT3、FT4水平低于对照组，与指南甲状腺功能减退指标变化一致。

本研究中研究组TC、TG、HDL-C、LDL-C水平高于对照组，且研究组心血管病变发生率高于对照组，提示甲状腺功能减退患者其心血管病变可能性更高。分析原因可能是甲状腺功能减退患者其甲状腺激素合成、分泌减少，同时脂肪降解也减少，脂肪从胆汁排泄速度下降，从而导致血脂水平异常。另外患者发生甲状腺功能减退时可造成高凝状态，对纤维蛋白分解造成损害从而导致血小板、血管内皮功能紊乱引发心血管疾病。甲状腺激素升高可增加心排出量、心肌耗氧量，引发心动过速，还对LDL-C氧化产生的自由基代谢具有促进作用啊，致使内皮功能发生紊乱引发心绞痛。本研究还显示甲状腺功能减退症患者外周血单核细胞锌指蛋白A20水平与hs-CRP、TNF-α、IL-6呈正相关，提示锌指蛋白A20与炎性因子水平密切相关。在hs-CRP、TNF-α、IL-6等炎症因子刺激下激活NF-κB信号通路A20水平迅速上升，高水平状态下A20对NF-κB信号通路进行负性调控从而对依赖NF-κB的炎症因子进行干预达到抗炎、抗凋亡双重保护作用[10-12]。Longo[13]等、卢珊[14]等的研究中指出锌指蛋白A20过表达时可下调IκBα从而对CD40配体所诱导的NF-κB激活进行阻断使炎症因子细胞间黏附分子-1、血管细胞黏附分子1、E选择素的表达下调达到保护血管内膜，降低血管损伤目的；还可对氧化低密度脂蛋白诱导的细胞毒性、细胞凋亡进行阻断从而抑制炎症反应改善动脉粥样硬化，综上原因当锌指蛋白A20水平明显下降时可能增加心血管病变发生率。

综上所述，甲状腺功能减退症患者炎症反应明显且心血管病变率高，锌指蛋白A20与hs-CRP、TNF-α、IL-6存在相关性，提示锌指蛋白A20可作为心血管事件发生的预测指标。