癫痫患者血清miR-222、BAFF水平表达的临床意义及对预后的影响

刘震宇，姚淑芳

（河南省三门峡市中心医院神经内科，河南 三门峡 472000）

癫痫常规治疗方式包括药物治疗、手术治疗等,成人癫痫一般通过药物治疗可以得到有效控制,但是，部分患者在治疗后预后不佳，癫痫发作仍较为频繁[1]。若能早期预测癫痫患者的预后情况，对调整治疗方案，改善患者预后较为重要。癫痫的发生发展与机体的免疫功能有关，研究表明，炎症反应和免疫功能紊乱均会增加癫痫的发生风险，加重癫痫病情,且多种免疫相关因子在癫痫患者中表达异常[2]。白细胞介素（interleukin，IL）-10、B细胞活化因子(B-cell activating factor of TNF family,BAFF)是常见的炎症因子，其异常表达与免疫功能紊乱有关,研究证实，IL-10、BAFF与癫痫病情关系密切[3]。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)可能是癫痫发病的关键因素之一，在癫痫、中枢神经系统异常病变等疾病的发生发展中具有促进或抑制作用，且已有研究从miRNA靶基因和途径出发探索癫痫治疗方法[4]。miR-222可调节炎症因子，刺激炎症因子、黏附因子的分泌，加重免疫功能紊乱,增加疾病发生风险,而且可能和炎症因子相互作用促进癫痫的发生[5]。由此推测，miR-222、BAFF可能与癫痫患者的预后有关。基于此，本研究分析癫痫患者血清miR-222、BAFF水平表达的临床意义及对预后的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 前瞻选择2017年1月-2018年1月医院113例癫痫患者作为研究对象。本研究经我院医学伦理委员会审核通过,患者与家属均知情且自愿签署同意书。其中，男68例，女45例；年龄32～73岁,中位年龄49.00（45.00,53.00）岁；体重指数18.23～25.97kg/m2,中位体重指数22.03（21.63,22.41）kg/m2；病程1～12年,中位病程3.00（2.00，3.00）年；治疗前发作次数2～12次/月，治疗前发作次数中位数6.00（5.00，6.00）次/月。⑴纳入标准：①符合《临床诊疗指南：癫痫病分册》[6]癫痫诊断标准；②经脑电图检查确诊癫痫；③颅脑损伤引起的继发性癫痫。⑵排除标准：①基因检测验证为存在基因突变导致的癫痫发作；②肌阵痉挛性癫痫；③合并感染性疾病；④恶性肿瘤；⑤失访。

1.2 方法

1.2.1 血清指标检测方法⑴miRNA：入院时，采集5ml空腹静脉血，静置30min（常温下），离心机（郑州中谷机械设备，TGL-16）离心，-80℃下保存待测。使用上海康朗生物提供的Trizol RNA试剂盒，加入Trizol RNA，提取RNA，使用紫外分光光度计检测RNA总纯度是否达标（纯度良好区间范围为1.8～2.0）,达标后使用德国QIAGEN公司提供的PCR试剂盒,加入0.5μl逆转录酶，于37℃下水浴，将总RNA反转录为cDNA,使用实时PCR系统（Applied Bioststems，7500）扩增,采用2﹣△△Ct法计算血清miR-222、miR-21相对表达量。miR-222正向引物：5'-ACACTCCAGCTGGGAGCTACATCTGGCTACTG-3'；反向引物：5'-CTCAACTGGTCTCGTGCA-3'。miR-21正 向 引 物：5'-CTGCAGGGTCCGAGGT-3'；反 向 引 物：5'-GCCCCTAGCTTACACACTGATCT-3'。⑵炎症因子：入院时，采集5ml空腹时静脉血离心取上清,置于-20C冰箱保存待测，采用酶联免疫试剂盒，以酶联免疫吸附法检测血清IL-10、BAFF表达。

1.2.2 治疗方法 ⑴询问病史、脑电图检查等明确患者8周内癫痫发作的频次、类型和抗癫痫药物使用情况；⑵口服左乙拉西坦（UCB Pharma S.A.公司，生产批号：20160922、20170825，规格：0.25g），初始剂量为250mg/次,2次/d，在4周内逐渐增加至500mg/次,2次/d，共维持治疗12周，进入开放性治疗期，继续口服左乙拉西坦500mg/次,2次/d，继续观察12周。共治疗24周。

1.2.3 预后评估方法 治疗完成后1年,采用Engel分级[7]评估预后，Ⅰ级：仅有先兆发作或发作完全消失；Ⅱ级：发作次数≤3次/年；Ⅲ级：发作次数＞但较治疗前减少≥75%；Ⅳ级：发作次数较治疗前减少＜75%。Ⅰ级为预后良好，Ⅱ级-Ⅳ级为预后不良。

1.3 统计学方法 用SPSS 23.0软件处理数据，计数资料以%和n表示，组间比较采用χ2检验；全部计量资料均经Shapiro-Wilk正态性检验，偏态分布计量资料用中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验；血清指标与癫痫患者预后不良的关系采用Logistic回归分析检验；绘制受试者工作曲线（ROC），并计算曲线下面积（AUC）值，检验血清miR-222、BAFF水平预测癫痫患者预后不良的价值，AUC值＞0.9表示预测性能较高，0.71～0.90表示有一定预测性能，0.5～0.7表示预测性能较低，＜0.5表示无预测性能，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 预后结局 治疗完成后经1年随访统计显示，研究内113例癫痫患者中预后不良的患者有31例，占比为27.43%（31/113），其中Ⅱ级18例，Ⅲ级11例，Ⅳ级2例；预后良好的（Ⅰ级）的患者有82例，占比为72.57%（82/113）。

2.2 两组患者基线资料比较 预后不良组miR-222、miR-21、IL-10、BAFF水 平 均 高 于 预 后 良 好组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组其他基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组患者基线资料比较

2.3 血清指标与癫痫患者预后不良关系的Logistic回归分析 将2.2中比较结果显示差异有统计学意义的变量纳入作为自变量（均为连续变量）,将癫痫患者预后情况作为因变量（1=预后不良，0=预后良好）,经Logistic回归分析检验结果显示,miR-222、BAFF与癫痫患者预后不良有关，二者过表达可能是癫痫患者预后不良的风险因子（OR＞1，P＜0.05）。见表2。

表2 血清指标与癫痫患者预后不良关系的Logistic回归分析

2.4 血清miR-222、BAFF单独及联合预测癫痫患者预后不良的价值 将癫痫患者预后情况作为状态变量（1=预后不良，0=预后良好），将入院时血清miR-222、BAFF水平作为检验变量，绘制ROC曲线图,见图1,结果显示,入院时血清miR-222、BAFF水平单独及联合预测癫痫患者预后不良的AUC分别为0.731、0.783、0.801,均有一定预测价值,且当二者的cut-off值分别取1.208、7.837ng/ml时，可获得最佳预测价值。见表3。

图1 血清miR-222、BAFF单独及联合预测癫痫患者预后不良的ROC曲线图

表3 血清miR-222、BAFF单独及联合预测癫痫患者预后不良的价值

3 讨论

目前,普遍认为癫痫的发病与中枢神经系统感染、脑部结构病变等因素有关，但具体发病机制尚不清楚，而且，目前癫痫治疗现状不佳[8]。因此，寻找新的生物标志物来预测癫痫患者的预后,对癫痫的治疗和病情评估较为重要。

研究表明，癫痫患者治疗现状不甚理想[9]。本研究结果显示，治疗完成后经1年随访统计显示，研究内113例癫痫患者中预后不良的患者有31例，占比为27.43%，其中Ⅱ级18例，Ⅲ级11例，Ⅳ级2例。说明，仍有较多癫痫患者在药物治疗后无法得到有效控制，预后情况不佳。研究表明，癫痫患者IL-10水平异常升高，IL-10水平升高与癫痫的发生有关[10]。miR-21被发现与自身免疫性疾病的发病机制相关,在调节自身免疫反应中起重要作用[11]。本次研究结果显示，预后不良组miR-21、IL-10水平均高于预后良好组，说明miR-21、IL-10可能与癫痫患者预后不良有关。但后经Logistic回归分析检验，miR-21、IL-10与癫痫患者预后不良无关,这可能是由于其他因素产生的影响造成，因此，无法将其作为癫痫患者预后不良的预测指标。

癫痫的发作与加重均与机体异常表达的凋亡分子和过度释放的炎症因子联系紧密[12]。BAFF属于肿瘤坏死因子超家族，分泌于单核细胞、树突状细胞等，与免疫系统功能有关，在自身免疫的发展中起着关键作用[13]。研究表明，BAFF可参与免疫调节,而癫痫的发生发展与免疫功能障碍有关[14]。miRNA参与了癫痫的发生发展，miRNA能调控下游基因的翻译和转录，改变相关蛋白含量，激活细胞内信号，从而导致疾病的发生[15]。miR-222能节炎性因子，促进凋亡分子活化，增加炎症因子水平[16]。本研究通过对比不同预后情况患者入院时血清BAFF、miR-222水平后经Logistic回归分析检验结果显示，miR-222、BAFF与癫痫患者预后不良有关,各指标过表达可能是癫痫患者预后不良的风险因子。分析原因可能为：BAFF水平升高增加癫痫患者预后不良的风险可能是由于BAFF对人体免疫的作用，BAFF可调节T细胞主导的免疫反应，刺激B细胞中重组蛋白的生成,从而调控T细胞存活，造成免疫功能紊乱，从而引起或加重神经系统紊乱，从而影响癫痫患者预后结局[17,18]。研究表明，BAFF对人体的免疫调节作用可以促进抑制性细胞因子分泌，如IL-35，起到一定的负向免疫调节作用,减轻机体炎症反应程度，改善癫痫患者病情，提高预后[19]。此外，动物实验证实，BAFF参与癫痫的发生发展[20]。作为调节因子，miR-222可受促炎因子的诱导而增加分泌，并刺激炎症因子、黏附因子表达，加重炎症反应[21]。miR-222对机体神经元细胞具有伤害性，会破坏神经元鞘膜，诱发或增加异常放电，从而影响癫痫的治疗，对癫痫患者的预后产生负面影响[22]。

最后，本研究绘制ROC曲线图，结果显示，入院时血清miR-222、BAFF水平单独及联合预测癫痫患者预后不良的AUC分别为0.731、0.783、0.801，均有一定评估价值。未来临床若监测到上述指标异常，应调整癫痫治疗方案，增加营养神经类药物、免疫调节类药物治疗等，以改善预后结局。但值得注意的是，miR-222、BAFF可能相互影响，共同促进癫痫病情进展，影响癫痫的治疗和预后，但本文未分析两者间的联系，后续应增加研究继续探索。

综上所述，癫痫患者血清miR-222、BAFF水平表达与预后不良有关，可用于癫痫患者预后结局的预测。