血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962对非小细胞肺癌的联合诊断

韩慧芳，任丽坤

（邯郸市第二医院肿瘤科，邯郸 056500）

【关键字】hsa_circ_0109320；hsa_circ_0134501；hsa_circ_0005962；非小细胞肺癌；诊断

肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因，其中约80%为非小细胞肺癌［1］。尽管在诊断和治疗方面有所改善，但肺癌的5年生存率约为18%，这主要是因为大多数患者诊断为晚期［2］。因此，发现准确、灵敏的生物标志物对于肺腺癌的早期诊断具有重要意义。环状RNA（Circular RNA，circRNAs）具有环状共价闭合结构，是由真核生物数千个基因的前体mRNA反剪接而来，使环状RNA具有更高的外切酶消化能力［3］。目前，越来越多的研究表明，环状RNA与肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌等多种癌症密切相关［4-8］。Liu X X等人［9］通过基因表达Omnibus（Gene Expression Omnibus，GEO）数据集发现hsa_circ_0005962在非小细胞肺癌患者血清中表达较高。Liu YT等人［10］通过高通量RNASeq发现血清中hsa_circ_0109320和hsa_circ_0134501在非小细胞肺癌患者血清中的高表达与不良预后相关。基于此，本研究旨在回顾性探讨hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962对非小细胞肺癌联合诊断的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料纳入2016年1月～2018年12月我院收治的早期非小细胞肺癌120例为肿瘤组；其中，男78例，女42例；年龄25～76岁；平均年龄（56.21±23.19）岁；TNM分期Ⅰ期73例，Ⅱ期47例。纳入2016年1月～2018年12月我院收治的肺部良性疾病患者120例，为良性病组；其中，男69例，女51例；年龄31～77岁；平均年龄（58.10±22.39）岁；在120例良性疾病中，慢性阻塞性肺疾病有36例，肺炎有73例，肺结核有11例。早期非小细胞肺癌患者120例和肺部良性疾病患者120例均经我院病理科证实。排除标准：①严重心、肝、肾功能损害者；②长期使用皮质类固醇激素及免疫抑制剂者；③患有精神疾病者；④患有其他癌症者；⑤未经相关治疗者。同时，纳入2016年11月～2019年6月至我院体检的健康体检者120例为对照组；其中，男75例，女45例；年龄21～79岁；平均年龄（54.10±26.30）岁。各组一般资料比较差异均无统计学意义，可纳入此次分析。受试者均在抽取血液样本前签署知情同意书。

1.2 RNA抽取与实时荧光定量PCR采取早期非小细胞肺癌患者120例、肺部良性疾病患者120例和健康体检者120例的肘前静脉血6mL。使用金克隆（北京）生物技术有限公司的总RNA提取试剂盒（货号：EX1882-100T）进行患者血液的总RNA的提取。通过上海羽朵生物科技有限公司的逆转录RT试剂盒（货号：YDJ2547）进行逆转录。使用上海樊克生物科技有限公司的一步法RT-qPCR试剂盒（货号：RT-02111）进行实时荧光定量PCR试验。3个指标为同一批样本分批检测，去除极大值和极小值保留其余数据。

1.3 统计学分析SPSS 22.0软件进行统计分析，多组间比较采用one-way ANOVA检验，方差齐者采用t检验比较，方差不齐者采用Tamhane′T2法比较。应用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分析血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962检测非小细胞肺癌的临床诊断价值。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受试者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相对表达量比较早期非小细胞肺癌患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相对表达量均高于良性病患者和健康体检者（P<0.05）；良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相对表达量均高于健康体检者（P<0.05），见表1。

表1 3组受试者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相对表达量比较

2.2 早期非小细胞肺癌患者与良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲线、AUC、灵敏度、特异度和约登指数为了评估血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在早期非小细胞肺癌患者与良性病患者中的诊断价值，绘制120例早期非小细胞肺癌患者与120例良性病患者的ROC曲线（图2）。hsa_circ_0109320，的ROC曲线下面积为0.88±0.02（95%CI 0.8376～0.9257），以hsa_circ_0109320的阳性临界值1.675，其诊断灵敏度为83%，特异度为91%；hsa_circ_0134501的ROC曲线下面积为0.80±0.03（95%CI 0.749～0.8601），以hsa_circ_0134501的阳性临界值1.532，其诊断灵敏度为94%，特异度为63%；hsa_circ_0005962的ROC曲线下面积为0.82±0.03（95%CI 0.7726～0.8757），以hsa_circ_0005962的阳性临界值1.308，其诊断灵敏度为85%，特异度为79%。见图1和表2。

表2 早期非小细胞肺癌患者与良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的AUC、灵敏度、特异度和约登指数

图1 早期非小细胞肺癌患者与良性病患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲线

2.3 早期非小细胞肺癌患者与健康体检者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲线、AUC、灵敏度、特异度和约登指数为了评估血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在早期非小细胞肺癌患者与健康体检者中的诊断价值，绘制120例早期非小细胞肺癌患者与120例健康体检者的ROC曲线（图2）。hsa_circ_0109320，的ROC曲线下面积为0.92±0.02（95%CI 0.8919～0.9667），以hsa_circ_0109320的阳性临界值1.028，其诊断灵敏度为93%，特异度为93%；hsa_circ_0134501的ROC曲线下面积为0.86±0.03（95%CI 0.8087～0.912），以hsa_circ_0134501的阳性临界值1.054，其诊断灵敏度为87%，特异度为88%；hsa_circ_0005962的ROC曲线下面积为0.87±0.03（95%CI 0.8129～0.9186），以hsa_circ_0005962的阳性临界值1.082，其诊断灵敏度为88%，特异度为83%。见图2和表3。

表3 早期非小细胞肺癌患者与健康体检者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的AUC、灵敏度、特异度和约登指数

图2 早期非小细胞肺癌患者与健康体检者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的ROC曲线

2.4 血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962联合诊断早期非小细胞肺癌患有早期非小细胞肺癌的为真阳性，未患有早期非小细胞肺癌的为真阴性。以以hsa_circ_0109320的阳性临界值1.675、hsa_circ_0134501的阳性临界值1.532、hsa_circ_0005962的阳性临界值1.308为诊断标准，三者均满足为联合诊断阳性，反之则为联合诊断阴性。血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962联合对早期非小细胞肺癌的诊断的灵敏度为91.67%（110/120），特异度为87.91%（211/240），准确度为89.17%（321/360），见表4。

表4 血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962联合诊断早期非小细胞肺癌

3 讨论

肺癌是常见的，全世界癌症相关死亡的主要原因之一［11］。在2012年，有超过180万新病例，几乎160万人的死亡于肺癌。尽管其诊断和治疗每年都有进展，但是肺癌的预后仍然是不乐观的，其5年总体生存率只有18%［12］。此外，由于肿瘤的异质性，单个活检的基因检测并不能很好地描述肿瘤的整体遗传变化。因此，为了实现对非小细胞肺癌广泛的诊断，一个灵敏、方便、多基因的基于血液的诊断系统将具有很高的价值。在本研究中，发现血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962联合对非小细胞肺癌诊断的灵敏度为91.67%，特异度为87.91%，准确度为89.17%。

circRNA是最近发现的一类非编码RNA分子，它是由多个外显子的反向剪接形成的［13］。CircRNAs在真核细胞丰富，表现出组织，时间，和疾病特异性。在本研究中，发现早期非小细胞肺癌患者血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相对表达量均高于良性病患者和健康体检者。有研究指出［14］宫颈癌患者血浆中存在大量CircRNAs，这些CircRNAs在术前和术后均有差异表达，其中部分CircRNAs被认为是预后标志物。提示血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962可能与癌症进展有关。血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在肿瘤组与良性组的灵敏度分别为83%、94%、85%，特异度分别为91%、63%、79%。血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962在肿瘤组与对照组的灵敏度分别为93%、87%、88%，特异度分别为93%、88%、83%。显示了其较好的诊断效能。因此，本研究提供了一个极好的机会来发现CircRNAs的生物标志物，可进一步将其用于非小细胞肺癌的诊断和相关药物的开发。

一些CircRNAs海绵影响microRNA的释放的抑制作用的microRNA在他们的目标基因，让目标基因的表达，在多个生物过程发挥着至关重要的监管作用，甚至一些疾病［15-17］。CircRNAs发挥重要作用在许多疾病，如肿瘤通过调节基因转录和蛋白质翻译。不像线性RNA，CircRNAs共价闭合连续循环没有5 ' 3 '极性或腺苷反面，使他们不太容易被核酸外切酶降解和稳定比线性RNA。［18-19］近年来，CircRNAs因其丰富、稳定、保守和特异性等特点成为新的生物标志物。此外，CircRNAs不仅可以在癌组织中稳定存在，还可以在外泌体和血液中稳定存在。在分析肿瘤组织中的生物标志物时，液体活检比传统活检更方便、侵入性更小。因此，血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962可能适合作为潜在的癌症诊断生物标志物。

综上所述，血清中hsa_circ_0109320，hsa_circ_0134501，hsa_circ_0005962的相对表达量检测可作为非小细胞肺癌的潜在标志。