乙肝肝硬化患者D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73的变化与HBV-DNA的关系

曹 蕾，桂建雄

（武汉市第八医院 检验科，武汉 430010）

乙肝病毒（HBV）是世界上最小的病毒之一，具有易传染、难治愈的特点［1］。人们一旦感染上了HBV，有可能只是终身携带不引发疾病，还有可能会患上乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌等疾病，据报道［2］，每年全世界大约有100万人因感染HBV而死亡。乙肝肝硬化是由慢性乙肝肝炎发展而来，由于乙肝肝炎患者长期发炎，使得肝脏受损、肝细胞坏死，从而刺激肝脏内纤维组织过度增生，就形成了乙肝肝硬化［3］。HBV-DNA即乙肝病毒载量，是衡量HBV感染的指标，具有直接性、特异性和灵敏性，当HBV-DNA呈阳性，说明HBV可以复制和传染［4］。有研究［5］表明，HBV能引起血小板生成减少，造成骨髓抑制，那么肝病患者体内的血小板参数MPV和PDW的水平可能会发生异常变化，此外D-D、AFP-L3、GP-73也是衡量肝病严重程度的重要指标，可能与HBV-DNA有着密切的相关性。所以本研究选取180例患者，通过检测各项指标和HBV-DNA，来探讨乙肝肝硬化患者体内的指标与HBV-DNA的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取我院2017年1月～2017年12月确诊的90例乙肝肝硬化患者（肝硬化组）、90例乙肝病毒感染但是未发生肝硬化的患者作为乙肝组。

肝硬化组，年龄35～69岁，平均为57.4±12.4岁，男52例、女38例，肝功能Child-pugh分级：A级20例、B级57例、C级13例。乙肝组，年龄32～69岁，平均为55.8±11.0岁，男48例、女42例，肝功能Child-pugh分级：A级29例、B级53例、C级8例。两组患者的年龄、性别、Child-pugh分级比较，差异不具有统计学意义（P>0.05）。

纳入标准：（1）慢性乙肝感染及乙肝后肝硬化患者的诊断标准参考《慢性乙型肝炎诊断指南2015年版》中的标准；（2）肝硬化患者经超声、肝脏CT检查明确诊断；（3）本研究获得医学伦理委员会的批准、研究对象的知情同意。

排除标准：（1）合并甲状腺功能疾病；（2）近2个月具有免疫治疗病史、糖皮质激素类药物治疗史；（3）伴有全身感染性疾病；（4）类风湿、结缔组织疾病；（5）恶性肿瘤。

1.2 D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73的检测方法两组患者清晨空腹，采集全血3mL，置于灭菌的试管中，离心5min，静置，吸取上清液；取血清50uL，利用ELISA检测D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73的水平。

1.3 HBV-DNA检测方法再取肝硬化组全血样本2 mL，置于灭菌的试管中，离心5min，静置，吸取上清液；取血清50uL，加入等体积的细胞裂解液，提取模板DNA，然后利用PCR进行测定。 根据患者的HBV-DNA检测结果将肝硬化组患者分为低载量组（HBV-DNA<104copies/mL）；中载量组（HBV-DNA范围104copies/mL<但是<106copies/mL）；高载量组（HBV-DNA>106copies/mL）。

1.4 统计学方法计量数据表述采用mean±SD表示，组间比较采用-t检验；计数资料采用χ2检验；相关性分析采用Pearson线性相关分析法；P值<0.05说明差异有统计学意义，统计软件采用SPSS 16.0版本。

2 结果

2.1 两组患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比较肝硬化组患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73测定值显著的高于乙肝组，差异均具有统计学意义（P<0.05）（表1）。

表1 两组患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比较

2.2 不同病毒载量患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比较高载量组肝硬化患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73测定值显著的高于中载量组和低载量组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；中载量组肝硬化患者的D-D、PDW、AFP-L3、GP-73测定值显著的高于低载量组，差异均具有统计学意义（P<0.05）（表2）。

表2 不同病毒载量患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比较

2.3 病毒载量与D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平的相关性乙肝肝硬化患者的D-D、AFP-L3、GP-73与HBV-DNA呈显著的正相关关系（P<0.05），乙肝肝硬化患者的HBV-DNA水平与MPV、PDW无相关关系（P>0.05）（表3）。

表3 病毒载量与D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平的相关性

3 讨论

HBV是一种DNA病毒，它是迄今为止感染人类最小的DNA病毒，也是最难攻克的病毒之一，它复制存在着逆转录过程，且具有很强的隐蔽性，拥有顽强的抵抗力、明显的嗜肝性，但本身对肝脏没有致病性，只有人体内的免疫细胞参与，它才会导致人发生肝损伤［6-7］。乙肝肝硬化是一种慢性的肝脏疾病，是由乙型肝炎过渡而来的，病理表现：肝细胞大范围的坏死、残余肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔生成，致使肝小叶组织破坏和假小叶生成，肝脏逐步变形、变硬而转化为肝硬化。随着肝脏功能代谢失调，会累及体内多个系统，导致肝性脑病、继发感染和癌变等并发症，严重危害患者的生病健康，因此通过检测体内的一些指标来判断患者肝脏损伤程度是十分必要的［8-9］。

AFP-L3和GP-73是以往判断乙肝肝硬化主要指标，而本文又多检测了D-D 、MPV和PDW这三个指标，具有一定的创新性。其中D-D是在机体发生凝血时，纤维蛋白被凝血酶作用后转变为交联纤维蛋白，并被纤溶系统降解的特异性碎片，当其升高时代表体内存在着凝血及纤溶活性增强的重要分子标志物，虽然它在凝血过程中发挥巨大作用，但是有研究［10］表明其也是判断乙肝肝硬化的指标。研究结果表明肝硬化组患者的D-D测定值显著的高于乙肝组，且D-D测定值在肝硬化组与HBV-DNA呈正相关，原因可能是肝硬化时肝脏细胞及组织大量遭到破坏，纤溶酶抑制物合成显著减少，纤维蛋白降解增加，导致D-D异常升高［11］。此外，肝脏是体内新陈代谢的重要器官，是多种凝血、抗凝及纤溶因子合成的场所，在维持机体正常凝血平衡方面发挥着重要的作用，而肝硬化患者的肝功能不断下降，以出血为主的并发症发生率显著提高［12］。通过实验数据我们可以看出肝硬化组患者的MPV和PDW明显高于乙肝组，但是MPV和PDW和HBV-DNA没有相关性，可能是因为肝硬化患者存在明显肝功能损伤，内毒素清除能力显著降低，大量无法清除的内毒素可引起血小板破坏增多，因此数量明显下降，而且肝脏是合成血小板生成素的重要场所，肝硬化患者的血小板生成素合成明显受到抑制，因此导致血小板生成减少，上述的实验结果为探究乙肝肝硬化的打开了新思路。AFP-L3是小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白（AFP）易质体，为肝癌细胞所特有［13］；GP-73是一种跨膜糖蛋白，主要存在于高尔基体顺面，可以维持肝脏、肾脏等器官生长发育，GP-73在健康肝脏组织中几乎不表达，但是在肝脏组织发生肝炎、肝硬化以及肝癌病变时表达量明显增加［14］。实验结果表明，肝硬化组的AFP-L3和GP-73明显高于乙肝组，并且AFP-L3和GP-73和HBV-DNA具有明显的相关性，说明了肝硬化组的患者的肝脏的发育状态较差，而HBV-DNA是反映HBV在体内复制及存在的重要指标，肝硬化患者体内组织中HBV大量复制，进而引发机体一系列反应导致肝细胞中的高尔基体、内质网等重要细胞器发生损伤，从而使AFP L3和GP-73水平异常升高，所以AFP L3和GP-73可能是反映机体HBVDNA复制情况的重要指标，即HBV-DNA表达量增加，AFP-L3和GP-73也随着增加［15］。

综上所述，肝硬化组患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73测定值显著的高于乙肝组，而且乙肝肝硬化患者的D-D、AFP-L3、GP-73与HBV-DNA呈显著的正相关关系，说明 D-D、AFP-L3、GP-73可以在一定程度上反映肝硬化患者肝脏的恶化程度，但是该实验的样本量太少，还需要进一步进行研究。