白鲜皮抑制酪氨酸酶作用研究及其美白面膜制备*

杨 宇，宋孟霜，陈 婕，王姝萱，刘 畅，李欣然，陈晓霞

(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)

随着人民生活水平的提高，越来越多的女性朋友关注皮肤保养。面膜作为女性朋友必备的基础护肤品市场应用前景广阔，尤其是美白面膜。纯中药面膜因其药效显著、作用温和、副作用小等优点，赢得了广大女性消费者的青睐[1]。然而市场上中药美白面膜种类并不多，有待开发。白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜的干燥根皮, 味苦, 性寒,具有清热解毒、祛风止痒等功效[2]。其药理作用包括抗菌、抗炎、抗过敏、止血、杀虫、抗肿瘤以及神经保护[3]。其主要化学成分有黄酮类、柠檬苦素类、生物碱类等[4]。《本草纲目》记载白鲜皮具有润肤白面功效，《备急千金药方》记载白鲜皮可治黑面不净。酪氨酸酶能催化左旋多巴生成酪氨酸，进一步催化酪氨酸生成黑色素的作用[5]，现代研究中也发现高浓度白鲜皮石油醚提取物具有抑制酪氨酸酶作用[6]，表明白鲜皮具有美白功效。本实验对不同浓度的白鲜皮水提物及醇提物抑制酪氨酸酶作用进行研究，并且制备了美白功效好，无不良反应的纯中药美白面膜。

1 实 验

1.1 材料和设备

白鲜皮(产地辽宁)购自毫州市中药材市场，经辽宁中医药大学鉴定教研室王添敏教授鉴定为芸香科白鲜属多年生草本植物白鲜的根皮。酪氨酸酶，Sigma 公司；L-酪氨酸，Sigma 公司；磷酸二氢钾；氢氧化钠；磷酸；磷酸氢二钠；浓盐酸；赛比克；卡波姆；冰片；维生素 E ；二甲基硅油均为市售分析纯，购与大连辰玉试剂公司。

T500 型电子天平，常熟市双杰测试仪器厂； SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵,巩义市予华仪器责任有限公司；DZKW-S-4 电热恒温水浴锅,苏州江东精密仪器有限公司； RE52旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂； U3010紫外-可见分光光度计，日本日立公司。

1.2 实验方法

1.2.1 白鲜皮提取物的制备

取白鲜皮10.00 g，精密称定，置250 mL的锥形瓶中，精密加水或75%乙醇100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸回流提取1 h，共提取三次。合并三次提取液后进行真空抽滤,减压浓缩干燥得白鲜皮水提物及醇提物，水提物以PBS溶解分别配置成含生药浓度为1，2，4，8，16 mg/mL溶液；醇提物以适量的DMSO溶解后，以PBS溶解分别配置成含生药浓度为1，2，4，8，16 mg/mL溶液。

1.2.2 酪氨酸酶的抑制活性测定[7]

分别配制 pH=6.8 的 PBS(磷酸盐缓冲液)、1.0 mg/mL 的 L-酪氨酸溶液和70 μg/mL的酪氨酸酶溶液。按照以下配比加样。

测试样1：2.0 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液+0.5 mL L-酪氨酸溶液；测试样 2：2.5 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液；

测试样 3：0.5 mL 样品溶液+1.5 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液+0.5 mL L-酪氨酸溶液；

测试样 4：0.5 mL 样品溶液+2.0 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液。

将各测试样混匀，将每个样品的 1～4 种测试样混匀，置 37 ℃水浴中 30 min，立即取出在 475 nm 处测吸光度(A1～A4)。按下式计算酪氨酸酶抑制率：

1.2.3 美白面膜制备

取赛比克和卡波姆各1 g溶于 100 mL蒸馏水中，制成 A液，另取 50 mL蒸馏水，加入 0.5 g 冰片、少量维生素 E、15 g 二甲基硅油和120 mg 白鲜皮醇提物，搅拌溶解成 B，将 A 和 B 同时加入烧杯中，并水浴加热 20 min，温度保持在 37 ℃，混匀制得面膜。

1.2.4 面膜的性能测定

1.2.4.1 pH测定

取5.0 g 面膜试样放入烧杯中，加入 50 mL新煮沸防冷的去离子水，边加热边搅拌至 37 ℃，冷却到室温后，用酸度计进行测定。

1.2.4.2 高、低温实验

将面膜试样两份置于密闭容器中，将一份置于-20 ℃的冰箱中，另一份入 37 ℃的恒温保温箱中， 24 h 后取出恢复到室温后观察外形。

1.2.4.3 黏度的测定

取足量的面膜试样于烧杯中，在 25 ℃的恒温状态下，选择合适的转子与转速测定黏度。

1.2.4.4 离心力测定

将面膜试样置入试管中，至于离心机中，在3000 r/min，离心10 min，观察其是否分层。

1.2.4.5 感官性能评价

随机选择20名自愿者，男女各10名，先在手背上涂抹面膜制品，大约3到8 cm2，待20 min后揭下观察皮肤现象，待确定无刺激性反应后将面膜均匀涂抹在脸部三角区，待20 min后揭下观察皮肤现象并对面膜制品进行评价。

2 结果与讨论

2.1 白鲜皮提取物对络氨酸酶活性抑制作用

以 L-酪氨酸为底物, 研究不同浓度白鲜皮水提物及醇提物对酪氨酸酶活性抑制作用, 结果如图 1 所示。结果表明白鲜皮水提物及醇提物去对L-酪氨酸的酶促氧化进程均表现出抑制作用, 且呈现浓度依赖性抑制。其中各浓度醇提物较水提物对酪氨酸酶的抑制作用更为显著,在实验浓度范围内, 16 mg/mL白鲜皮醇提物对酪氨酸酶的抑制率高达 76%，因此有望开发成美白产品。

图1 白鲜皮提取物对酪氨酸酶活性抑制作用

2.2 美白面膜性能评价结果

本实验制备的美白面膜性能评价指标见表2，可见制备的面膜外观显透明色，呈弱酸性，清凉无刺激感，粘稠度适中，易于贴敷。常温下面膜的pH 值稳定符合《中华人民共和国轻工行业标准》规定。

表1 理化检测指标、感官及稳定性实验结果

2.3 感官性能评价结果

20 名自愿者使用面膜进行后无不适感，并对面膜进行了评分，如表3。

表2 面膜成品的感官性能评价表

3 结 论

酪氨酸酶是皮肤黑色素生物合成的关键酶[8],不仅决定黑色素合成的速率,还是黑色素细胞分化成熟的特征性标志[9]，临床上可以通过抑制酪氨酸酶活性来美白皮肤、治疗雀班、褐斑、黑斑病等黑色素过度沉淀的疾病。由实验结果可知，同浓度的白鲜皮醇提取物较水提物对酪氨酸酶抑制率高，且两种提取物的抑制作用均存在计量依赖性，浓度越高，抑制作用越强。醇提物在浓度为16 mg/mL时，其抑制率可高达76%。查阅文献，白鲜皮主要活性成分黄柏酮、梣酮和白鲜碱均在醇提物中，由此白鲜皮抑制酪氨酸酶的主要成分可能是其主要活性成分，有待进一步研究。以白鲜皮醇提物为美白活性成分，制备了pH值符合《中华人民共和国轻工行业标准》规定，外观

显透明色，清凉无刺激感，粘稠度适中，易于贴敷，受到受试者好评的美白面膜，渴望开发成产品，创造更大的经济空间。