调节性T细胞在急性肾损伤中作用机制探讨

王李洁，毛凌燕，高 琼，高 烽（通讯作者）

（1武警上海市总队医院检验科 上海 201103）

（2武警上海市总队医院内一科 上海 201103）

（3武警上海市总队医院特一科 上海 201103）

急性肾损伤（AKI）是各类急重症患者常见并发症之一[1]，常常导致患者病情的加重，进入终末期肾衰竭，终身需要维持性透析治疗，甚至导致患者死亡，严重增加了患者及社会的经济负担，造成了不必要的医疗资源的消耗。调节性T细胞（Treg细胞）是维持免疫内环境稳定的关键细胞，在自身免疫性肾脏疾病和肾脏移植排斥反应中具有重要的作用，并可参与急性肾损伤后的免疫调节，起到减轻肾损伤的作用[2]。研究表明T细胞在诱发、推进和修复AKI阶段中都起到了不同的作用，而Treg细胞对于急性肾损伤则具有较好的保护性作用[3]。但在AKI患者中，Th1型CD4+T细胞存在表达增多的现象，而CD4+CD25+循环Treg细胞为何不能发挥调节作用，从而导致肾损伤的发生与加重，目前尚无较好的结论。最新研究发现，TIGIT可表达在激活的Treg细胞表面，并且强烈抑制病理性的Th1和Th17免疫反应[4]，但是其在急性肾损伤发病过程中具有何种作用，尚无明确的报道。为进一步明确TIGIT与调节性T细胞在急性肾损伤发病过程中的作用，本研究就急性肾损伤患者与健康人群血液中TIGIT与调节性T细胞的表达情况进行比较。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年6月—2019年6月在武警上海市总队医院住院期间发生急性肾损伤的患者20例，其中男性13例，女性7例，平均年龄（53.4±7.2）岁，同时选取20名年龄和性别匹配的健康体检人群作为对照组。纳入患者急性肾损伤诊断符合KDIGO标准。排除标准：年龄18岁以下、孕妇、既往透析或肾移植史、自身免疫性疾病、慢性病毒感染，尿路梗阻引起的AKI。本次经本院伦理委员会批准（伦理审批号：201701）。

1.2 方法

所有住院患者中，一旦出现急性肾损伤均在12 h内收集患者的血液，离心分离外周血单核细胞，冷冻在10% MODS和90%胎牛血清中，-150 ℃储存，并以健康体检人群作为实验对照组，在同样的条件下收集血液，提取外周血单核细胞，并储存。标本收集完毕后，两组血清样本分别进行PBMC（单个核细胞）处理、T细胞亚群的分离、以及检测Foxp3与TIGIT的表达情况。

1.3 统计学方法

2.结果

2.1 两组CD25+CD4+T细胞占CD4+T细胞比例比较

急性肾损伤患者外周循环血的CD25+CD4+T细胞占CD4+T细胞的比例高于健康对照组，表明患者体内Treg细胞的比例上升，见图1。

图1 两组体内CD25+CD4+T细胞占CD4+T细胞比例比较

2.2 两组总CD4+CD25+T细胞中Foxp3比较

在总CD4+CD25+T细胞中，AKI患者Foxp3表达低于对照组，见图2。

图2 两组总CD4+CD25+T细胞中Foxp3比较

2.3 两组Treg表面TIGIT表达比较

急性肾损伤患者外周循环血中Treg细胞表面TIGIT的表达低于健康对照组的Treg细胞，见图3。

图3 两组Treg表面TIGIT表达比较

3.讨论

急性肾损伤是目前肾内科研究的热点之一，对于急性肾损伤临床上暂无有效、可靠的治疗方法，大多情况下仅能予以对症支持治疗，因此针对急性肾损伤的预防与预测，一直是广大医护人员关注的重点。近几年国内外研究表明，调节性T细胞在急性肾损伤中具有重要的作用，抑制促炎反应可以降低AKI的严重程度和患者死亡率，并改善肾脏的恢复[5]，动物模型也进一步证明Treg细胞活性高与预后较好之间存在一定的因果关系[6]。因此，在本研究中，我们比较了AKI患者与健康对照组的Treg细胞和Treg亚群的活性。我们首先检测了AKI患者和健康对照组中Treg细胞的表达。结果表明CD4+CD25+T细胞在AKI患者中显著上调，这证明调节性T细胞在急性肾损伤中具有一定的作用。进一步的研究表明，在健康人群和AKI患者的总CD4+CD25+T细胞中，AKI患者Foxp3表达明显低于对照组。众所周知，Foxp3的表达证实了Treg细胞的分化，并且是Treg细胞功能的关键，而Foxp3表达的减少，则表明AKI患者中Treg细胞功能的减弱。TIGIT是近年来新发现的表达在免疫细胞表面的蛋白结构，具有免疫调节作用[7]。TIGIT由一个胞外IgV结构域，Ⅰ型跨膜区域组成，而细胞质TIGIT是复合配体/受体网络的一部分。TIGIT与CD155（PVR）以高亲和力结合，与CD112的结合作用较弱。在效应T细胞中，TIGIT可以直接抑制T细胞活化和增殖。体外实验发现，TIGIT刺激抑制人CD4+T细胞中的IFN-g产生。TIGIT的这种对T细胞抑制作用也在体内实验得到证实，研究表明TIGIT+CD4+T细胞特异性丧失的小鼠分泌促炎细胞因子IFN-g和IL-17水平大大增加。另外，T细胞表面TIGIT的选择性丧失导致CD8+T细胞分泌IFN-g的增加。因此，TIGIT通过抑制效应细胞活化，减少效应细胞功能和细胞因子产生，而在细胞内起到抑制剂的作用。最新研究发现，TIGIT亦可表达在激活的Treg细胞表面，并且强烈抑制病理性的Th1和Th17免疫反应。本研究发现急性肾损伤患者的Treg细胞表面TIGIT的表达低于健康对照组。

综上所述，可以推测TIGIT介导了Treg细胞功能减退，导致下游CD4+T细胞免疫反应增强，促进急性肾损伤的发展。TIGIT可能是介导Treg细胞影响急性肾损伤发展的关键因素之一。