超高效液相色谱-串联质谱法分析动物源性食品中四环素类药物残留

苏志同 谢金彤 李龙 熊飞 杨健超 彭城

文章选取猪肉、鸡肉、鱼肉、牛奶、猪肝等基质中的四环素残留物作为基本检测样本，选择缓冲溶液作为提取液开展超声提取，经过C18固相萃取小柱净化和脱溶剂的处理之后额外使用甲醇水来对物质进行溶解，溶解处理之后将这些物质放置在超高效液相色谱串联质谱上完成检测，检测结果发现样本中四环素类残留在10ug/kg-2MRL范围内的回收率为75%左右，RSD<10%，基本上能够满足农业部门颁布的公告要求。

四环素类药物是一种广谱抗生素，在畜牧业、水生生物产业中得到了广泛的应用，能够对动物进行疾病的诊断、预防和治疗，从而更好地促进动物生长，提高饲料的转化率，带来良好的经济效益。但是从实际应用情况来看，四环素药物使用存在残留的现象，人们在长期食用含有四环素药物残留的动物食品会危害到个人健康。为此，需要相关人员按照规范的标准仔细检查动物源性食品中四环素类药物残留情况。

动物源性食品中四环素类药物残留检测实验

仪器设备和试剂

动物源性食品中四环素类药物残留检测实验所使用的仪器设备包含超高效液相色谱-质谱仪、R23型离心机、氮吹仪、均质器。试剂包含色谱纯、实验用水、缓冲液。另外，还需要按照规范的比例要求配比储备液、工作液。即分别称量各10mg的标准品，使用溶剂分解之后将其转移到100ml 的棕色容量瓶中定容处理，定容处理之后将其放置在零下20摄氏度的环境下保存。

仪器使用分析条件

超高效液相色谱条件

色譜柱的型号为RP18色谱柱，规格为100mmx2.1mm，1.7um;色谱柱的温度为30℃;样品室内温度为10℃;进样体积为10ul;流动相A为甲醇;流动相B为0.1%体积比例的甲酸水溶液。

超高效液相质谱条件

超高效液相质谱电离的方式是大气压电喷雾，电离电压的基本设定值为3.8KV，锥孔的电压为30V，离子源的温度为100℃，维孔反吹气流量为每小时85L，脱溶剂气的温度为300℃，脱溶剂的气流量为每小时400L，检测方式为多反应监测模式。超高效液相质谱条件基本情况如表一所示。

试验方法

提取

提取动物组织试样10g放置在100ml 的离心管中，在其中加入20ml 的溶剂均匀的提取3分钟，之后按照每分钟4000转的速度使用离心机转动5分钟，将上面的清液放置在不具备水硫酸钠的漏斗中，而后转移到鸡心瓶中，残渣使用溶剂反复提取，在一定时间之后进行最终的两次提取，合并形成提取液，而后将提取液放置在40℃的环境下减压快速浓缩到干燥的状态，准备净化。

净化和测定

在上文等待净化的提取液中加入比例在99.8%左右的甲酸水溶液0.8ml，按照涡旋的状态缓和搅拌处理，将溶解液转移到10ml的离心管中，按照每分钟4000转的离心机转动速度转动两分钟，对下层清液体过滤，过滤后的样品放置到样品瓶中，按照规范的标准来完成测试。

实验结果和讨论

优化前期处理条件

在对比乙腈和丙酮作为提取液后的提取率之后发现乙腈的提取效果良好，而出现这种现象的原因是乙腈的极性比丙酮大，对被检测物体的溶解性也比较强，因而在实验操作的时候会选择乙腈来作为基本提取溶液。

在净化优化的过程中考虑到动物组织中的油脂比较多，因而会使得仪器设备在开展污染检测的时候被背景干扰。为了达到理想的净化效果，需要对设备开展去油处理。同时，考虑到被检测物的极性比较大，和乙烷不会融合，因此使用正乙烷来去除油脂，减少基质对仪器设备测量的干扰。

色谱条件的优化

磺胺和喹诺酮药物和乙腈适合融合在一起，因此会选择乙腈和水的混合体来作为基本流动相。考虑到磺胺药物分子结构和喹诺酮药物的介质含量，因此，在检测的时候需要在流动相中加入甲酸这种物质，通过甲酸的增加来提升离子化效率。

一系列的试验结果证明，在甲酸和水溶液处于水相状态的时候，被检测物质的离子效率比较高，检测灵敏度也比较精准。因此，在试验操作的时候选择流动相体系来组成乙腈和甲酸水溶液。

色谱行为

在仪器工作条件下对每升1mg的混合标准溶液开展检测，各个兽药总离子流色谱图如图一所示。

图一：各个兽药总离子流色谱图

（1-10分别代表磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺苯、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉。）

标准曲线和检出限

为了能够消除基质效应对定量测定的影响，要重新配置包含磺胺、喹诺酮的混合溶液。在仪器工作环境中对一系列的试验进行分析，并绘制出标准的曲线，根据结果发现每一升范围内的各个标准物质在0.01mg到0.2mg的范围内会呈现出一种线性的关系，相关系数超过了0.996的比例，总体上会以三倍信噪比来作为基本检测方式。

方式回收率和精密度

在10m空白动物组织试样中分别加入0.01mg、0.05mg和0.2mg三个浓度的19种混合标准溶液作为基本回收检验的样本溶液， 平行测定五次，回收率和相对标准偏差如表二所示。

样品分析

规范的试样方式对市场上的肉类进行分析，最终发现磺胺喹恶啉、恩诺沙星、诺氟沙星在鸡肉中都有检出，其质量分数分别为0.1/0.01/0.01mg，鱼和熟肉串中检定出了恩诺沙星，质量分数均为0.01mg，牛肉和猪肉的试羊检测没有出现任何兽药。

综上所述，文章实验打造出了三种四环素类药物的LC-MS/MS检测方式，在实验操作的过程中对加标量的样品开展了检测，检测结果证明前处理方式回收率在95%到105%之间，回收率在标定的范围内。固相萃取方式稳定，且色谱柱的重现性比较高，由此证明这种方法适合应用在动物源性食品中四环素残留药物的检测工作中。

苏志同1   谢金彤1   李  龙2   熊  飞1   杨健超1   彭  城1

1.南京海关动植物与食品检测中心

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