首发精神分裂症病人血清微小 RNA-24-2、微小 RNA-30b 的检测水平及意义

雷雨，刘伟，包黎

作者单位：武汉市精神卫生中心精神科，湖北 武汉 430022

精神分裂症（episode schizophrenia，ES）是一种慢性、遗传性精神障碍，病因目前尚未明确，主要有免疫和病毒学假说，ES 病人临床症状主要有阳性症状、阴性症状及认知功能障碍、情绪异常等。首发的精神分裂症病人一般较为年轻、病程短、社会功能缺损程度较轻，其病人长期服用抗精神药物会引起心血管死亡，对病人病程发展和预后有着深远影响 ，但目前缺乏ES诊断相关的生物学指标。阳性与阴性症状量表（positive negative syndrome ccale ，PANSS）评分是为评定不同类型精神分裂症病人严重程度而设定的标准化量表评分，主要适用于成年人，由经量表使用训练的精神科医师对病人做检查，再综合有关信息进行评定，但一般ES病人临床症状与其它类精神疾病相似 ，难以正确判断。 微小 RNA（microRNA，miRNA）在中枢神经系统中含量非常丰富，可作为新的调节因子参与神经系统发育的各个阶段，目前许多种 miRNA 已被证实在 ES 病人体内异常表达，可能影响 ES 发病，其中 mir-24-2、mir-30b 在中枢神经系统疾病、精神类疾病病人中表达异常，进而引发神经系统紊乱，可能影响疾病发生。但是目前仍未有关于 ES 病人体内血清 mir-24-2、mir-30b 表达水平的研究。因此，本研究分别通过检测首发 ES（first ES，FES）病人血清中 mir-24-2、mir-30b 表达水平，探讨 FES 病人血清中mir-24-2、mir-30b 水平与 PANSS 评分的关系，为血清mir-24-2、mir-30b 作为生物学指标评价 ES 发生的早期危险性提供一定的参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

前瞻性选取 2016年 11月 至 2018年 9月于武汉市精神卫生中心就诊的 98例FES 病人为研究对象（FES 组），病程（16.27±3.31）月；同期选取 76例健康体检者作为对照（对照组）。本研究中所有病人均由主治医师明确诊断，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求，所有受试对象近亲属均由专业人员详细告知研究内容并签署知情同意书。

纳入标准：①符合国际疾病分类第十一次修订本（ICD-11）精神与行为障碍（草案）关于精神分裂症和其他原发性精神障碍诊断标准；② 智力正常者；③首次发病，入组前未服用过抗精神并药物者；④无攻击行为和自杀倾向。排除标准：①伴有急慢性感染疾病及各种免疫疾病者；②伴有严重的心、脑、肝、肾等器质性疾病者；③有其它精神障碍性疾病或脑器质性疾病，如：痴呆、抑郁症、癫痫、精神发育迟缓等；④妊娠期或哺乳期妇女；⑤精神活性药物滥用史。

收集病人入院时一般资料，包括性别、年龄、体质量指数（BMI）、FES 病人病程、受教育年限、吸烟史、饮酒史。

1.2 主要试剂与仪器

RNA提取试剂盒（货 号R1200-100），购自北京索莱宝科技有限公司；反转录试剂盒（货号 KL266），购自上海康朗生物科技有限公司；SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（货号 RR820A），购自北京百奥创新科技有限公司 ；Rox reference dye（货号 XY320），购自上海信裕生物科技有限公司。ABI 7700 实时荧光定量 PCR 仪，购自美国 Applied Biosystems 公司。

1.3 研究方法

1.3.1 样品采集及保存 采集两组受试者清晨空腹静脉血样，3 000 r∕min 离心 15 min 后收集血清，置于-80 ℃保存待测。

1.3.2 血清 mir-24-2、mir-30b水平测定采用

RNA 提取试剂盒提取两组受试者血清总 RNA，反转录试剂盒将 RNA 反转录为互补 DNA（cDNA）。采用实时荧光定量 PCR 仪对目的基因 mir-24-2、mir-30b和内参 U6 进行扩增。反应体系共 10 μL：cDNA 模板（50 mg∕L）1 μL，正反向引物（10 μmol∕L）各 0.4 μL，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（2×）5 μL，Rox reference dye（50×）0.2 μL，双蒸水 3.0 μL，引物由上海生工生物公司设计并合成（引物序列见表1）。反应条件：95 ℃ 10 min；94 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，40 个循环。每个样品重复 3 次。采用 2法对两组受试者血清中 mir-24-2、mir-30b 表达水平进行定量分析。

表1 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）引物序列

1.3.3 PANSS 评分PANSS 由 7 项阳性症状、7 项阴性症状及 16 项一般精神病理症状组成。本研究采用 PANSS 中的 P1、P3、P5、G9 项目评估阳性症状，N1、N2、N3、N4、N6、G7 项目评估阴性症状，P2、N5、G11 项目评估认知功能，P4、P7、G8、G14 项目评估兴奋状态，G2、G3、G6 评估抑郁情绪。每个项目分为 7级评分：7 分极重度，6 分重度，5 分偏重，4 分中度，3分轻度，2 分很轻，1 分无症状。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组性别、年龄等一般资料比较，均差异无统计学意义（

P

＞0.05），见表2。

表2 两组首发精神分裂症（FES）一般资料比较

2.2 两组 PANSS 评分比较

FES 组 PANSS 总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分显著高于对照组（

P

＜0.05），见表3。

表3 两组首发精神分裂症（FES）阳性与阴性症状量表（PANSS）评分比较∕（分）

2.3 两组受试者血清 mir-24-2、mir-30b 水平比较

FES 组血清 mir-24-2、mir-30b 水平显著高于对照组（

P

＜0.05），见表4。

2.4 FES病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平与PANSS 评分相关性

FES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平与 PANSS 总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关（

P

＜0.05），见表5。

表4 两组首发精神分裂症（FES）受试者血清 mir-24-2、mir-30b 水平比较

表5 首发精神分裂症（FES）病人血清中 mir-24-2、mir-30b水平与阳性与阴性症状量表（PANSS）评分相关性

2.5 血清中 mir-24-2、mir-30b 水平对FES的诊断价值

分别以血清中 mir-24-2、mir-30b 单个指标及两者联合预测值为检验变量绘制 ROC 曲线，结果显示 ，血清 mir-24-2 诊断FES的曲线下面积（AUC）为0.863（95%

CI

：0.808～0.919），截断值为 1.407，特异度为 93.4%，灵敏度为 68.4%；血清 mir-30b 诊断 FES的 AUC 为 0.856（95%

CI

：0.801～0.911），截断值为1.913，特异度 为 84.2%，灵敏度为 76.5%；两者联合诊断 FES 的 AUC 为 0.936（95%

CI

：0.899～0.973），特异度为 88.2%，灵敏度为 89.8%。

3 讨论

ES 是一组症状群组成的临床综合征，通常青壮年时期起病，ES 发病率、复发率、致残率均较高且治愈率低，病人需长期服用抗精神药物缓解，但长期服用此类药物易造成心源性猝死、心血管死亡等严重后果。因此寻找特异性较高的生物学指标，快速、客观地实现 ES 的正确诊断，是精神病学领域的一大难题。

miRNA 是一类高度保守的内源性单链非编码RNA，广泛存在于真核细胞内，长约 22 个核苷酸，可通过调控基因转录后过程调控细胞增殖和凋亡。miRNA 可与靶基因 mRNA3' 端非编码区特异性结合，结合后可影响神经网络模式，使其表达或沉默，进而干扰神经生物。miRNA 在神经细胞的增殖发育、分化、凋亡及突触塑形等过程中有着非常重要的作用，且目前有研究表明，许多 miRNA 在 ES 病人体内异常表达，可能与 ES 发病有关。Sun 等研究显示，miR-30 可调控大鼠神经生成影响海马区功能。而人类海马区与学习、记忆等高级认知功能密切联系，此外海马区神经功能的异常表达与精神疾病之间存在重要相关性。Sun 等研究结果中显示 mir-24 在脑梗死病人神经元细胞凋亡中发挥重要作用，提示 mir-24 可能与神经系统疾病关系密切。本研究结果表明，FES 组血清 mir-24-2、mir-30b 水平显著高于对照组。提示血清 mir-24-2、mir-30b 的高表达可能会影响 FES，且可能对 FES 发病机制和诊断的研究具有重要意义。PANSS 是为评价不同类型 ES 症状严重程度设计的评定量表，本研究结果显示 FES 组 PANSS 总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分显著高于对照组。FES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平与PANSS 总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关。提示血清中 mir-24-2、mir-30b 水平升高可能加重 FES 病人临床症状表现，即加重病人疾病程度。血清 mir-24-2、mir-30b 诊断 FES 的 AUC 分别为 0.863、0.856，特异度分别为 93.4%、84.2%，灵敏度分别为 68.4%、76.5%。提示两者对 FES 的诊断可能均有重要参考价值 ，且血清 mir-24-2的参考价值可能优于 mir-30b。两者联合诊断 FES 的 AUC 为 0.936，特异度为88.2%，灵敏度为 89.8%。提示两者联合检测有助于提高FES的诊断价值，临床中可将两者作为参考指标。

综上所述，ES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平高于正常人，血清中 mir-24-2、mir-30b 水平可能与ES 疾病的发生、发展密切相关。血清 mir-24-2、mir-30b 可能对评价 ES 发生的早期危险性有重要意义，对 ES 的诊断具有一定的参考价值。但本研究只通过查阅门诊及住院病例来研究，样本资料的质量、数据的准确性和完整性均会对结果造成一定的影响，此研究存在一定不足。且本研究中血清中 mir-24-2、mir-30b 水平影响 ES 的具体作用机制及两者之间的互作机制有待深入研究。