复方仙人掌软膏的制备及总黄酮的含量测定

廖梅 ，陈小平 ，蒙其其

作者单位：1 嘉应学院医学院，广东 梅州 514031；2 广东省山区特色农业资源保护与精准利用重点实验室，广东 梅州 514031

急性腮腺炎为常见的呼吸道传染病，主要由腮腺病毒引起。该病的临床表现以腮腺非化脓性炎症和腮腺区肿痛为主，冬季和春季发病率较高，多发于儿童和青少年，临床上多以对症治疗为主，兼顾抗病毒治疗的方法进行干预治疗。复方仙人掌软膏是我院的自制制剂，主要由仙人掌总黄酮 30份、青黛 6 份、冰片 1 份和软膏基质构成，以三氯叔丁醇为防腐剂、月桂氮酮为促渗透剂、维生素 C 为抗氧化剂，用于急性腮腺炎的辅助治疗，临床疗效较好。实践证明仙人掌汁液外敷或与青黛、冰片合用治疗腮腺炎疗效显著。仙人掌性味苦寒，具有清热解毒，散瘀消肿，健胃止痛，镇咳的功效，仙人掌总黄酮可以明显抑制肿胀反应及增加毛细血管通透性，可减轻局部炎症反应，其活性大小与总黄酮的剂量呈正相关，辅助治疗流行性腮腺炎。青黛性味咸寒，具有清热解毒、凉血消斑、泻火定惊、抗炎 镇痛等功效。青黛的抗炎镇痛作用能够有效缓解腮腺疼痛，其抗病毒作用则能有效对抗腮腺炎病毒。冰片具有通诸窍 ，散郁火，消肿止痛的功效，能够有效减轻腮腺炎所致的肿胀及疼痛。为了提高病人用药的依从性，保证制剂的工艺和质量稳定，确保临床用药安全，本实验于 2019年 6―12月优化复方仙人掌软膏的制备工艺并测定其总黄酮含量，初步评价该软膏剂质量，为该剂型的后续研究开发提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

MS103DU 电子分析天平（梅特勒-托利多）；KDC-140HR 型高速冷冻离心机（安徽中科中佳公司）；Zetasizer Nano ZS90 粒度及电位测定仪（英国马尔文仪器有限公司）；UV-1800 型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；85-2型恒温磁力搅拌器（金坛市新航仪器厂）。

1.2 材料

化妆品级液体石蜡（批号 P823840）、医用级白凡士林（批号 V820408）、药用级水溶性月桂氮酮（批号 A800359）、药用级甘油（批号 G810575）、药用级十二烷基硫酸钠（批号 S817788）、药用级三乙醇胺（批号 T819271）、药用级维生素 C（批号A800295）、药用级硬脂酸（批号 S817777）、药用级单硬脂酸甘油酯（批号 S818124）、药用级三氯叔丁醇（批号 T832418）和药用级 AB-8 大孔吸附树脂（批号A875381）均购于上海麦克林生化科技有限公司；芦丁（批号 B20771，纯度≥98%）购于上海源叶生物科技有限公司；其它试剂均为分析纯。食用仙人掌干品（批号 201910501）购自安徽亳州药材市场，经嘉应学院医学院附属医院张正伟副主任中药师鉴定为 米邦塔仙人掌

Opuntia Milpa

Alta，青黛（批号1001818）和冰片（批号 1001903）由广东恒祥药业股份有限公司提供，经鉴定符合中国药典 2015年版相关项下规定。

2 方法与结果

2.1 仙人掌总黄酮的提取及纯化

取仙人掌粗粉5.0 kg，加入 10 倍量 70% 乙醇浸泡 30 min，回流提取2 h，过滤，滤渣重复提取 1 次，过滤，合并 2 次提取液，提取液经减压浓缩至密度为 1.02～1.03 g∕mL（按总生药量计为 0.5 g∕mL），备用。取 AB-8 大孔吸附树脂装柱（5 cm×50 cm），预处理后，将上述提取液以1 BV∕h 进行上柱、吸附，用 1% 三氯化铁乙醇溶液检测流出液，待反应呈阳性停止上样。依次用 5 倍柱体积的水、30% 乙醇、70% 乙醇以 1 BV∕h 进行洗脱，收集 70% 乙醇洗脱液，经适当减压浓缩后冷冻干燥，得到棕色粉末 105 g，即为仙人掌总黄酮，备用。

2.2 软膏基质的制备

按基质处方量分别称取油相、水相于烧杯中，在水浴锅中加热至 75 ℃，搅拌均匀；控制水相温度高于油相温度 2～3 ℃，维持油相温度在 75 ℃下将水相缓慢加入到油相中，搅拌均匀，置磁力搅拌器中搅拌 5 min 至冷凝。

2.3 处方评价方法

2.3.1 外观评价 本实验采用多人评分取平均值的形式对软膏的色泽均匀度、质地细腻度、涂抹分散性、清洗容易度进行评分，各占 10 分，总分 40分。评分细则：8～10 分表示色泽均匀，细腻无颗粒感，易涂抹和清洗；5～7 分表示均匀度一般，有稍微颗粒感，较难涂抹和清洗；4 分以下表示不均匀，存在明显色块，粗糙有颗粒感，难以涂抹清洗。

2.3.2 离心稳定性试验 取基质 3 g 置于 10 mL 离心管中，2 500 r∕min 离心 30 min 后取出，涂抹于载玻片上 ，观察其有无油水分层 、破乳及变粗等现象。10 分以下为出现变粗、破乳、油水分层等显著异常现象；10 分以上无显著异常现象，总分 20 分。

2.3.3 耐寒耐热试验 取基质 3 g 装入密闭的塑料盒中，分别置于-18 ℃冰箱中静置 24 h 和 55 ℃烘箱中恒温 6 h，取出观察样品是否出现变粗、破乳以及油水分层等现象。10 分以下为出现变粗、破乳、油水分层等显著异常现象；10 分以上无显著异常现象，总分为耐寒试验与耐热试验各 20 分。

2.4 基质配比筛选

根据文献报道，参考其他中药软膏剂基质中油相、水相和乳化剂的用量，暂拟定 6种不同的基质处方（见表1），制备软膏基质，以“2.3”项下内容为评价指标，结果显示处方 5 评分最高，因此，选定处方 5 作为待考察基质处方。然后对基质成型性影响较大的硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、三乙醇胺和十二烷基硫酸钠用量进行单因素实验考察。固定基质中其他成分的用量不变，改变 1 种成分的用量，并按“2.2”项下方法制备软膏基质。以“2.3”项下内容为评价指标，优选每个因素的最佳用量范围。单因素结果显示当硬脂酸用量为 1.0 g、3.0 g、5.0 g，单硬脂酸甘油酯用量为 1 g、1.5 g、2.0 g，三乙醇胺用量为 0.12 g、0.14 g、0.16 g，十二烷基硫酸钠用量为 0.10 g、0.12 g、0.14 g 时，均能形成表面光滑、均匀细腻、涂布性能好、易于清洗且稳定性较好的软膏基质，符合软膏剂基本质量要求。

2.5 正交试验

根据单因素考察结果，选取硬脂酸（A）、单硬脂酸甘油酯（B）、三乙醇胺（C）和十二烷基硫酸钠（D）的用量为考查要素，按 L（3）因素水平表（见表2），进行正交设计试验，以“2.3”项下内容为评价指标，对正交试验结果计算并比较综合评分，筛选软膏最优处方组成及用量，结果见表3，4。从表4中直观分析的

R

值可得，A、B、C、D 四个因素对软膏成型的影响大小为 A ＞ D ＞ C ＞ B，最佳基质处方用量为 ABCD。表5 方差分析结果显示，A、B、C 和 D因素即硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、三乙醇胺和十二烷基硫酸钠的用量对软膏成型性的综合评分差异有统计学意义（

P

＜0.05）。因此，综合分析确定软膏的最优处方组成为 ABCD。即硬脂酸用量为 1 g、单硬脂酸甘油酯用量为 1 g，三乙醇胺用量为 0.16 g、十二烷基硫酸钠用量为 0.14 g。

表1 复方仙人掌软膏制备基质处方筛选结果∕g

表2 复方仙人掌软膏制备正交实验因素水平表∕g

表3 复方仙人掌软膏制备 L9（34）正交实验结果

表4 复方仙人掌软膏制备直观分析结果

表5 复方仙人掌软膏制备方差分析结果

2.6 乳化温度和时间的确定

报道显示软膏剂的乳化温度一般为70～95 ℃，乳化时间一般为 5～10 min。按照最佳基质处方用量制备软膏基质，考察不同乳化温度和时间对软膏基质成型性的影响，以“2.3”项内容为评价指标结合粒径大小和分散性系数（PDI 值）综合分析。结果显示乳化温度为 75 ℃和 85 ℃时制得的软膏外观均匀细腻、易涂抹、易清洗；乳化温度为 90 ℃时软膏较难清洗和涂抹，肤感较差；乳化温度为 75 ℃、乳化时间为 5 min 时制备的软膏粒径和 PDI 值较小，细腻松软，有光泽，外观良好。因此，选择乳化温度 75 ℃，乳化时间 5 min。

2.7 复方仙人掌软膏的制备

分别称取硬脂酸 1.0 g、单硬脂酸甘油酯 1.0 g、液体石蜡 3.0 g、白凡士林1.5 g 于烧杯中，作为油相；另称取甘油 3.0 g、十二烷基硫酸钠 0.14 g、三乙醇胺 0.16 g、三氯叔丁醇 0.15 g、月桂氮酮 0.15 g、纯化水 19.85 g，作为水相。精密称取 1.5 g 仙人掌总黄酮加入到水相中，0.3 g 青黛研磨成极细粉后加入到油相中。将水相与油相分别在 75 ℃下搅拌至混匀，维持油相温度在 75 ℃，将水相缓缓加入到油相中，待基质冷至 40 ℃时加入用0.5 mL 无水乙醇溶解的冰片 0.05 g 和维生素 C 细粉0.05 g，边加边搅拌，置磁力搅拌器中继续搅拌至冷凝，即得浅灰色软膏。

2.8 验证实验及初步质量评价

采用最佳处方配比，放大 10 倍量，按“2.7”项下方法分别制备复方仙人掌软膏，共制备 3 批，按“2.3”项下的评价方法对软膏色泽均匀度、质地细腻度、涂抹分散性、清洗容易度和稳定性进行考察。结果见表6，三批验证试验所制备的软膏细腻均匀，无粗糙感，膏体松软，稠厚适中，有光泽，易涂展，质量稳定。

称取 1 g 软膏于烧杯中，蒸馏水稀释 400 倍，混匀呈浅灰色液体，粒径测定实验结果显示软膏剂平均粒径为 633.5 nm，PDI 为 0.531，表明该软膏的平均粒径较小、分布均匀，符合软膏剂粒径要求。

2.9 复方仙人掌软膏总黄酮的含量测定

2.9.1 总黄酮测定方法 参照文献［19］，取一定体积的样品溶液置于 25 mL 容量瓶中，加 70% 乙醇至6 mL，加 5% 亚硝酸钠溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min，加 10% 硝酸铝溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min，加 4% 氢氧化钠溶液 10 mL，加 70% 乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以不加仙人掌总黄酮的空白制剂按上述操作得到空白溶液，在 510 nm 处测定溶液吸光度。

2.9.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品 25 mg 精密称定，置 25 mL 容量瓶中，加 70% 乙醇适量，超声30 min 使其完全溶解，放冷至室温，70% 乙醇定容至刻度，即得 1 g∕L 的对照品溶液。

2.9.3 供试品溶液的制备 精密称取复方仙人掌软膏 5.0 g，加入 70% 乙醇 80 mL，水浴回流 1 h，微孔滤膜过滤至 100 mL 量瓶中，加 70% 乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液，精密量取该供试品溶液 1 mL置于 25 mL 容量瓶中按“2.9.1”项下步骤测定分析。

2.9.4 标准曲线关系考察 精密量取对照品溶液 0 mL，0.25 mL，0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2 mL，2.5 mL 分别置于 25 mL 容量瓶中，按“2.9.1”方法进行测定。以第一瓶溶液作为空白对照调零，以芦丁浓度

C

为横坐标，吸光度

A

为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：

A

=11.546

C

+0.009 6，

R

²=0.999 5。结果表明芦丁在 0.01～0.10 g∕L 范围内呈良好线性关系。

表6 复方仙人掌软膏制备验证实验结果

2.9.5 精密度试验 精密量取对照品溶液 1 mL 置于 25 mL 容量瓶中，连续测定 6 次吸光度，计算相对标准偏差（RSD）值。结果显示其 RSD 为 0.45%，结果表明该方法仪器精密度符合分析要求。

2.9.6 重复性试验 取同一批次（1901）软膏样品 6份，按照“2.9.3”项下同法操作，测定各样品的吸光度，计算其总黄酮含量。结果显示其计算值的 RSD值为 2.05%（

n

=6），说明该方法重复性良好。2.9.7 回收率实验 称取已知含量的软膏 2.5 g，平行称定 6 份，加入对照品适量，按照“2.9.3”项下方法制备供试品溶液，计算其加样回收率。结果显示，总黄酮的平均加样回收率为93.60%，RSD 值 为2.40%（

n

=6），表明该方法准确可行。见表7。

表7 复方仙人掌软膏总黄酮的含量测定回收率实验结果（n=6）

2.9.8 含量测定 分别称取各批次样品 5.0 g，按照“2.9.3”项下制备供试品溶液，平行制备 3 份，依法测定并计算其含量。3 批样品的总黄酮量含量分别为（32.62±0.15）、（33.19±0.23）、（31.46±0.09）mg∕g，平均含量为（32.42±0.77）mg∕g，其 RSD 值 为 2.39%，结果表明该方法制备的软膏质量稳定。见表8。

表8 复方仙人掌软膏总黄酮的含量测定结果（n=3）

3 讨论

软膏剂具有涂展性和黏附性良好、安全、不良反应少等优点。经皮给药相对较为安全，病人的用药依从性较高，不良反应发生少，在治疗流行性腮腺炎时，能够持续对腮腺部位产生长效作用。在 O∕W 型乳膏剂基质中，多选择十二烷基硫酸钠、三乙醇胺、聚山梨酯 80 作为乳化剂。本实验从 6 种较为常用的软膏基质处方筛选出十二烷基硫酸钠、三乙醇胺合用作为乳化剂。在考察乳化温度和乳化时间发现，乳化温度为 90℃时，乳化时间为 5 min、10 min、20 min 时制备的软膏难以清洗和涂抹，黏稠度大。推测原因为在磁力搅拌器的作用下，随着温度和时间的增加，基质中的水份逐渐减少，乳化程度逐渐增大所致。

4 结论

本实验在前期预实验的基础上，采用正交设计法确定最佳基质处方，同时考察乳化温度和时间对基质成型性的影响，对复方仙人掌软膏进行制备工艺优化，最终得到浅灰色软膏。质量评价研究表明该法制备的软膏细腻均匀、质量稳定。本实验确定了复方仙人掌软膏的制备工艺并初步评价该软膏剂质量，进一步扩大和开发了仙人掌的药用价值，为该制剂的后续开发提供了研究基础。