采用微柱凝胶法进行溶血三项试验诊断新生儿溶血病的效果研究

梁超坚，曾德理，庞丽丽，覃碧静

（广西壮族自治区妇幼保健院，广西 南宁 530000）

新生儿溶血病（Hemolytic disease of the newborn，HDN）是一种由母婴血型不合而诱发的新生儿免疫溶血性疾病。临床上最常见的HDN为新生儿ABO溶血病（指因母子ABO血型不合而导致的HDN），其次为新生儿Rh溶血病。肝脾肿大、黄疸是HDN患儿的主要临床表现，部分病情严重者可发生胆红素脑病[1]。对此病患儿的病情进行早诊断、早治疗是控制其病情、改善其预后的关键。目前，临床上主要是通过进行溶血三项试验（包括直接抗人球蛋白试验、抗体释放试验及游离抗体试验）来诊断HDN。微柱凝胶法是一种新型的将抗原抗体反应与凝胶层析技术相结合的检测技术。本文主要是探讨采用微柱凝胶法进行溶血三项试验诊断HDN的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年5月至2019年10月期间我院收治的500例疑似患有HDN的新生儿作为研究对象。在这些新生儿中，有男285例，女215例；其日龄为1～6 d，平均日龄为（1.93±1.01）d。

1.2 方法

采用微柱凝胶法对这500例新生儿及其母亲进行ABO血型及Rh（D）血型鉴定，方法是：抽取其静脉血2 mL，置于抗凝试管中，采用微柱凝胶卡式法进行血型鉴定。依据《全国临床检验操作规程》中的规定进行操作。微柱凝胶血型卡由长春博迅生物技术有限公司生产，检验过程中所用的抗-A、抗-B标准血清、ABO标准红细胞和Rh（D）血型鉴定试剂均由上海血液生物医药有限公司生产。采用微柱凝胶法对这500例新生儿进行溶血三项试验，方法是：1）直接抗人球蛋白试验。采集新生儿的静脉血2 mL，对血液标本进行离心处理，分离出红细胞。用生理盐水对分离出的红细胞进行多次洗涤，配制成0.8%的红细胞悬液。将50 μl的红细胞悬液加入到微柱凝胶孔中，进行10 min的离心处理（转速为1030 r/min），然后对结果进行观察、判读。若红细胞抗原与相应抗体在微柱中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，可认定检测结果呈阳性。2）游离抗体试验。配制0.8%的标准红细胞悬液。在微柱凝胶卡的A孔、B孔和O孔中分别加入50 μl的A、B、O红细胞和50 μl的血清。将上述标本置于37℃的凝胶卡孵育器中孵育15 min后进行10 min的离心处理（转速为1030r/min），然后对结果进行观察、判读。判定试验结果呈阳性的标准同上。3）抗体释放试验。将500 μl经过4次洗涤的红细胞置于试管中，并在试管中加入等量的生理盐水。将上述标本置于56℃的水浴箱中孵育10 min后进行1 min的离心处理（转速为3000 r/min），取上清液作为放散液。在微柱凝胶卡的A孔、B孔和O孔中分别加入50 μl的A、B、O红细胞，然后各加入100 μl的放散液，在37℃的凝胶卡孵育器中孵育15 min，之后进行10 min的离心处理（转速为1030 r/min）。对结果进行观察、判读。判定试验结果呈阳性的标准同上。

1.3 观察指标

观察对这500例新生儿及其母亲进行ABO血型及Rh（D）血型鉴定的结果。观察采用微柱凝胶法对这500例新生儿进行溶血三项试验的结果。

1.4 统计学方法

用SPSS 20.0软件处理本研究中的数据，计数资料用%表示，用χ²检验，计量资料用±s表示，用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对这500例新生儿及其母亲进行ABO血型及Rh（D）血型鉴定的结果

对这500例新生儿及其母亲进行ABO血型鉴定的结果显示，这些新生儿中ABO血型为A型的新生儿有225例（占45%），为B型的新生儿有275例（占55%），其母亲的ABO血型均为O型。对这500例新生儿进行Rh（D）血型鉴定的结果均呈阳性。对这500例新生儿的母亲进行Rh（D）血型鉴定的结果显示，其中鉴定结果呈阳性的新生儿母亲有498例，鉴定结果呈阴性的新生儿母亲有2例。

2.2 采用微柱凝胶法对这500例新生儿进行溶血三项试验的结果

采用微柱凝胶法对这500例新生儿进行溶血三项试验的结果显示，试验结果呈阳性的新生儿有454例，阳性检出率为90.8%；其中进行直接抗人球蛋白试验的结果呈阳性的新生儿有58例，阳性检出率为11.6%；进行游离抗体试验的结果阳性的新生儿有268例，阳性检出率为53.6%；进行抗体释放试验的结果呈阳性的新生儿有454例，阳性检出率为90.8%。在这500例新生儿中，A型血新生儿和B型血新生儿中进行溶血三项试验结果呈阳性的新生儿所占的比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 采用微柱凝胶法对这500例新生儿进行溶血三项试验的结果[例（%）]

3 讨论

HDN是临床上常见的一种新生儿疾病。此病的发病原因主要是母体内的同种免疫抗体——免疫球蛋白G（IgG）经过胎盘进入胎儿的血液循环，与胎儿血液中的红细胞结合，引起免疫性溶血反应。有研究指出，对发生贫血或HDN风险较高的孕妇进行胎儿宫内输血术等能降低其HDN的发生率，但不能避免其发生HDN[2]。对新生儿进行溶血三项试验是临床上诊断其是否发生HDN最准确的方法。有研究指出，进行溶血三项试验不仅能评估新生儿是否发生溶血，还可为判断HDN是否恶化提供有力的依据[3]。溶血三项试验包括直接抗人球蛋白试验、抗体释放试验和游离抗体试验。进行直接抗球蛋白试验主要是通过抗球蛋白试剂直接与红细胞上吸附的不完全抗体相结合，在致敏红细胞间搭桥，形成凝集，来检测新生儿血液中的红细胞是否受到抗体致敏。进行直接抗球蛋白试验的结果呈阳性可提示新生儿血液中存在免疫性抗体IgG，导致其红细胞致敏。进行游离抗体试验主要是针对新生儿血液中是否存在与其红细胞不匹配的ABO外抗体和（或）IgG 抗-A（B）进行检测，进而明确其有无HDN。抗体释放试验是指通过某种方法将血液中的致敏红细胞抗体释放出来，并用已知抗原的红细胞来确定释放液中抗体的特异性，进而得出试验结果。本研究的结果显示，在这500例新生儿中，A型血新生儿和B型血新生儿中进行溶血三项试验结果呈阳性的新生儿所占的比例相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。这说明，新生儿的A、B血型与其发生新生儿ABO溶血病无关。这一结果与蔡大凤等[4]的报道基本一致。但秦华等[5]报道称，A型血的新生儿HDN的发生率高于B型血的新生儿。陈陆飞等[6]报道称，B型血的新生儿HDN的发生率高于A型血的新生儿。导致这一情况出现的原因可能是研究对象所在的区域不同，其血型基因频率分布存在差异。本研究的结果显示，进行直接抗人球蛋白试验的阳性检出率为11.6%，进行游离抗体试验的阳性检出率为53.6%，进行抗体释放试验的阳性检出率为90.8%。这说明，在溶血三项试验中，进行抗体释放试验的阳性检出率最高。一旦进行抗体释放试验的结果呈阳性，不论其他两项试验的结果如何，都可以确定新生儿发生HDN。导致直接抗人球蛋白试验阳性检出率偏低的原因可能是新生儿的红细胞中携带的抗原表位数只有成人的1/2～1/4，因此结合抗体的致敏红细胞较少[7]。微柱凝胶法是将抗原抗体反应与凝胶层析技术相结合的一种检测方法。用微柱凝胶法进行溶血三项试验具有操作简单、方便、标本用量少、结果准确易判断、诊断的敏感性高、特异性强、受人为因素影响小、与临床诊断的符合率高等优点[8]。另外，采用微柱凝胶法进行溶血三项试验还可直观地观察检测结果，无需借助显微镜进行观察。在同类研究中，张咏芳[9]和赵冬梅[10]均认为与采用试管法进行溶血三项试验相比，采用微柱凝胶法进行溶血三项试验的阳性检出率和诊断的准确率均更高。

综上所述，采用微柱凝胶法进行溶血三项试验诊断新生儿溶血病的效果较好，可在临床上推广应用。但本研究也存在一定的不足之处（如样本量少、结果未引用客观性指标进行评价及研究的时间短等），在今后的研究中我们将进一步加大样本量，在结果中引用具有说服力的指标，并延长研究时间，以进一步证实本研究结论。