血清miR-760表达对早期胃癌的诊断价值

刘健

济南市章丘区人民医院，济南 251200

胃癌是临床上最常见的消化道恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。外科手术切除是治疗胃癌的重要方式，但胃癌起病隐匿，早期症状不明显，发现时患者多为进展期，经手术治疗后其5年生存率仍不足25%［1-2］。研究显示，早期诊断胃癌能够有效提高胃癌的治疗效果，提高患者生存率［3］。但目前传统的肿瘤标志物如血清癌胚抗原（CEA）、糖类抗原-19（CA-199）等肿瘤标志物，诊断胃癌的敏感性、特异性不高，不能令人满意［4］。而电子胃镜病理活检并不适宜作为胃癌早期病变的初筛手段。因此，探索新的胃癌肿瘤标志物对早期临床诊断胃癌至关重要。研究显示，微小RNA（miRNA）异常表达与恶性肿瘤的发生进展密切相关［5］。miRNA在循环血液系统不会被RNA酶消化，表达稳定，可重复性高，因此血清中异常表达的miRNA有可能成为胃癌的肿瘤学标志物［6］。miR-760是近年发现的肿瘤相关性mi RNA之一［7-8］，在胃癌组织中表达降低，作为抑癌基因发挥作用［9-10］，但在胃癌患者血清中的表达情况研究较少。因此，本研究探讨了早期胃癌患者血清miR-760表达变化及其对早期胃癌的诊断价值，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年2月—2019年12月我院收治的151例胃部疾病患者作为研究对象，其中早期胃癌98例（早期胃癌组）、萎缩性胃炎53例（萎缩性胃炎组）。纳入标准：临床资料完整；有明确的病理学诊断；患者依从性强，配合各项检查；年龄＞18岁。排除标准：合并其他肿瘤、消化系统疾病；既往有腹腔手术史，或检查前已接受相关治疗；合并自身免疫性疾病；入选前1个月内服用过质子泵制剂、H2受体拮抗剂等药物；妊娠期、哺乳期女性。早期胃癌组男57例、女41例，年龄33～67（53.02±12.38）岁。早期胃癌定义为癌组织局限于胃黏膜层及黏膜下层，不论其范围大小和有否淋巴结转移［11］。萎缩性胃炎组男37例、女16例，年龄30～65（52.83±12.50）岁。另选择同时期体检正常的30例健康者作为对照组，其中男19例、女11例，年龄30～68（52.97±12.44）岁。三组性别、年龄比较差异无统计学意义。本研究经医院医学伦理委员会批准，入试者均知情同意。

1.2 检测方法

1.2.1 样本采集 抽取所有入试者空腹肘静脉血5 mL，3 000 r/min离心10 min分离血清，-80℃冷存待检。

1.2.2 血清miR-760检测 采用实时荧光定量PCR技术。取部分血清标本，应用血清mi RNA提取试剂盒（德国Amibion公司）提取血清总RNA，紫外分光光度计测定提取的RNA的浓度和纯度，应用逆转录试剂盒（北京全式金生物技术有限公司）将RNA逆转录为cDNA，最后应用qRT-PCR检测试剂盒（北京全式金生物公司）进行PCR扩增反应。反应条件：95℃5 min；95℃15 s，55℃30 s，70℃30 s，共40个循环。miR-760引物正向序列：5'-TATTGCTTAAGAATACGCGTAG-3'，反 向 序列：5'-AACTCCAGCAGGACCATGTGAT-3'；U6引 物 正向 序 列：5'-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'，反向序列：5'-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3'。以U6作为内参，采用2-ΔΔCt法计算血清miR-760相对表达量。

1.2.3 血清CEA、CA-199检测 取部分血清标本，采用Access2全自动生化分析仪（美国贝克曼）以化学发光法检测血清中的CEA、CA-199。

1.2.4 血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ检测 取部分血清标本，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中的PGⅠ、PGⅡ，并计算PG比值（PGR），PGR=血清PGⅠ/PGⅡ，血清ELISA PGⅠ、PGⅡ检测试剂盒购自上海盈公生物公司。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。计量资料用xˉ±s表示，组间比较采用单因素方差分析；各指标之间的相关性分析采用Pearson相关分析；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析各指标对早期胃癌的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清miR-760、CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ、PGR比较 见表1。

表1 各组血清mi R-760、CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ、PGR比较（xˉ±s）

2.2 早期胃癌组血清miR-76与CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ、PGR的相关性 Pearson分析结果显示：早期胃癌组血清miR-760与CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ均呈负相关（r分别为-0.603、-0.231、-0.716、-0.450，P均＜0.05），而血清miR-760与PGR呈正相关（r=0.715，P＜0.05）。

2.3 血清miR-760、CEA、CA-199、PGR单独及联合对早期胃癌的诊断价值 见表2。

表2 miR-760、CEA、CA-199、PGR及四项联合诊断早期胃癌的价值

3 讨论

受饮食结构、生活方式及自然环境的改变，我国胃癌的发病率呈逐年上升趋势，且趋于年轻化［12］。外科手术是治疗胃癌的重要手段，但预后效果与临床分期密切相关［13-14］，接受根治术的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者5年生存率分别为91.8%、80.2%及39.5%［15］，胃癌分期越晚，预后越差。目前胃癌的病死率仍处于较高水平，主要因为胃癌不易早期发现，患者确诊时大多错失了最佳治疗时机。CEA、CA-199是目前筛查监测胃部肿瘤常用的辅助血清肿瘤标志物，特异性较差。血清PGⅠ、PGⅡ及PGR近期研究较多，证实在胃癌的诊断、术后监测及预后评估起一定作用［16］。但这些标志物在早期胃癌诊断中的价值仍然有限，尚不能满足目前临床需求。

miRNA是一类小分子非编码单链RNA，其本身并不翻译蛋白质，但可调控转录后基因表达从而参与细胞增殖、分化、侵袭、迁移等多种生物学过程。国内外大量研究表明，在胃癌、乳腺癌、胰腺癌等众多恶性肿瘤患者血清中均存在miRNA的差异表达［17］。血清中miRNA稳定性好，可能成为早期胃癌诊断的生物学标志物，已经成为目前的研究热点［19-20］。miR-760是近期发现的与恶性肿瘤密切相关的miRNA成员之一，在胃癌组织中表达下降，过表达miR-760能够抑制胃癌的发生进展［9］。GE等［10］发现，胃癌组织中miR-760的表达下降与胃癌患者的不良预后密切相关。本研究发现，早期胃癌组血清miR-760、PGR低于萎缩性胃炎组和对照组，血清CEA、PGⅠ、PGⅡ高于萎缩性胃炎组和对照组，提示早期胃癌患者血清miR-760异常低表达。萎缩性胃炎与胃癌之间的关系是消化领域的研究热点之一，且目前非萎缩性胃炎→萎缩性胃炎→肠化生→异型增生→胃癌的病变过程已经得到公认［21-22］，本研究也发现，萎缩性胃炎组miR-760水平低于正常组，提示在胃癌病变发生前，便已经发生了血清miR-760水平的改变。血清CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ及PGR与胃癌的关系已经得到较多的研究的验证，本研究通过Pearson相关分析发现，早期胃癌患者血清miR-760水平与PGR呈正相关，与CEA、CA199、PGⅠ、PGⅡ呈负相关，提示血清miR-760水平与胃癌的发生发展有关。

ROC曲线是用于反映连续变量敏感性和特异性的综合指标，为了进一步探索血清miR-760对早期胃癌的诊断价值，本研究通过ROC曲线分析显示，血清miR-760、CEA、CA199、PGR诊断早期胃癌的AUC分别为0.894、0.920、0.819、0.789，均具有一定的预测价值，四项指标联合诊断早期胃癌的AUC为0.976，四项指标联合诊断早期胃癌的价值明显优于单一指标，这说明多指标联合检测能够提高早期胃癌的诊断效能，具有更高的敏感性和特异性，在临床上筛查早期胃癌方面更具有优势。

总之，早期胃癌患者血清miR-760表达降低，并且血清miR-760联合CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ检测有助于提高早期胃癌的诊断效果。