干式免疫荧光法在C-反应蛋白检测中的应用分析

陈维刚

(泸县第二人民医院检验科，四川 泸州 646105)

0 引言

C-反应蛋白(CRP) 是一种由肝脏合成的急性时相反应蛋白，与全身性炎症反应过程密切相关，可激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，清除侵入机体的病原微生物和损伤、坏死、凋亡的组织细胞，正常人血清含量低于10mg/L。在心肌梗塞、风湿活动、组织损伤、恶性肿瘤、手术创伤及各种急性或慢性感染等情况下，CRP 在4-6h 后可迅速增高，随着病情的好转，又会迅速下降至正常[1]。因此临床对C-反应蛋白值进行检测对于疾病的辅助诊断及病情的监测具有重要意义。2019 年3 月，我院检验科引入一台国产干式荧光免疫分析仪进行C-反应蛋白检测，为探究干式免疫荧光法在C-反应蛋白检测中的应用效果，本次试验选取我院收治的50 例患者血液标本作为观察对象，采用干式免疫荧光法与免疫透射比浊法分别检测C-反应蛋白并进行对比分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年4 月至2019 年6 月间我院收治的接受C-反应蛋白检测的50 例患者血液标本作为观察对象，50 例患者中有男性31 例，女性19 例，患者的年龄区间为18-74 岁，平均年龄(40.12±3.32) 岁，患者中病情包括高血压、肿瘤、各类感染性疾病等，其中肿瘤患者已接受相关病理学检查确诊[2]。所有患者均分别接受免疫透射比浊法与干式免疫荧光法C-反应蛋白检测。

1.2 方法

检验前1d 叮嘱患者不吃过于油腻、高蛋白食物，避免饮酒，血液中的乙醇成分会直接影响检验结果。采血前一天的20:00 以后，应开始禁食12 小时，以免影响检测结果[3]。检测当天于患者空腹状态下取静脉血5mL 分别置于专用检测试管中分两管保存，分别为未抗凝血(3mL) 与EDTA 抗凝血(2mL)，对未抗凝血进行血清分离，其中EDTA 抗凝血用于干式免疫荧光法检测，分离血清用于免疫透射比浊法检测。分别应用干式免疫荧光法与免疫透射比浊法对所有患者标本进行C-反应蛋白检测。其中干式免疫荧光法检测仪器为飛测FS-301 全自动干式荧光免疫分析仪(广州万孚生物产)，并结合配套试剂(荧光免疫层析法，批号：C1940F)、质控品，按照SOP 文件及仪器使用说明书进行操作；免疫透射比浊法采用BECKMAN COULTER 全自动生化分析仪(AU680)，试剂为四川沃文特生物技术有限公司生产的C-反应蛋白测定试剂盒(批号：1904011)，按照SOP 文件进行操作，对患者的C-反应蛋白进行检测。

1.3 观察指标

统计所有患者C-反应蛋白检测结果中C-反应蛋白值，记录干式免疫荧光法与免疫透射比浊法检测结果中阳性病例数的具体情况。在检测结果中，免疫透射比浊法设定C-反应蛋白检测值高于8mg/L 为阳性，干式免疫荧光法设定C-反应蛋白检测值高于10mg/L 为阳性[4]。

1.4 统计学分析

将试验涉及数据进行统一处理，处理软件为SPSS 21.00统计学信息软件，输入数据后，计数资料与检验方式分别为χ2、%；计量资料与检验方式分别为()、t检验，P值表示组间数据的差异性，P＜0.05 时组间差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对比两种方法检测C-反应蛋白值结果

免疫透射比浊法检测C-反应蛋白值结果明显低于干式免疫荧光法检测C-反应蛋白值结果，(P＜0.05)。见表1。

表1 两种方法检测C-反应蛋白值结果比较

2.2 对比两种方法检测C-反应蛋白阳性率

两种方法检测C-反应蛋白阳性率结果相比无明显差异，(P＞0.05)；但干式免疫荧光法检测C-反应蛋白灵敏度略高于免疫透射比浊法。见下表2。

表2 两种方法检测C-反应蛋白阳性率对比

3 讨论

C-反应蛋白是一种急性时相反应蛋白，与肺炎链球菌C多糖体反应形成复合物，在组织损伤后迅速增加，其作用是激活补体；促进单核细胞对黑色素瘤细胞的破坏作用；促进粒细胞和巨噬细胞的运动与吞噬；影响淋巴细胞对促细胞分裂物质的反应性，并与部分T 淋巴细胞结合，抑制其功能；抑制混合淋巴细胞反应；对血小板凝集和血块收缩有抑制作用[5-6]。

在当前临床C-反应蛋白检测中有血清散射、透射比浊法、免疫荧光法机免疫扩散法、化学发光法等多种方法，其中免疫透射比浊法利用抗原抗体反应，人血清中C-反应蛋白与其相应抗体致敏的乳胶颗粒在液相中相遇发生免疫反应，产生凝集，引起浊度上升，通过测定特定波长吸光度变化值，与同样处理的校准品比较，即可计算出样本中C-反应蛋白浓度，采用全自动生化分析仪进行检测，操作简单方便，具有较好的可重复性，能够应用于大部分批量测定中，检测效果好[7]。干式免疫荧光法(荧光免疫层析法)采用免疫荧光双抗体夹心法定量测定全血、血浆、血清样本中C-反应蛋白浓度，当样本与缓冲液混匀，并滴加到测试卡加样孔后样本中的C-反应蛋白抗原与荧光标记的C-反应蛋白抗体结合形成反应复合物，反应复合物随层析作用沿硝酸纤维素膜前移，被硝酸纤维素膜检测线上的C-反应蛋白抗体捕获，样本中的C-反应蛋白捕获量与荧光抗体的信号强度正相关，通过干式荧光免疫分析仪进行检测[8]，该方法灵敏度高，所需检测血量较少，采用全血即可检测，在门、急诊快速单个测定中适用性较高。C-反应蛋白作为一种存在血浆中的急性时相反应蛋白，能够在机体受到感染、组织挫伤等情况时激活补体，使细胞的吞噬作用增强，能够有效清除机体入侵的病原微生物、损伤及凋零的细胞，从而达到调理作用，在机体的自身免疫调节体系中具有至关重要的作用。近年来，随着临床研究的逐渐深入，C-反应蛋白在机体中的作用被越来越重视，C-反应蛋白能够在细菌感染、炎症等心血管疾病的发病中起到关键作用，能够作为细菌感染的首选鉴别指标[9]。在本次研究中：免疫透射比浊法检测C-反应蛋白值结果明显低于干式免疫荧光法检测C-反应蛋白值结果，(P＜0.05)；两种方法检测C-反应蛋白阳性率结果相比无明显差异，(P＞0.05)；但干式免疫荧光法检测C-反应蛋白灵敏度略高于免疫透射比浊法。本次试验结果表明免疫透射比浊法和干式免疫荧光法对于高血压、肿瘤、各类感染性疾病的C-反应蛋白检测结果差异并不明显，因此在临床应用中，可在病情判定及预后过程中选择同一种方法，进而保证检验的连贯性，从而减少检验误差的产生。

综上所述，干式免疫荧光法与免疫透射比浊法在C-反应蛋白的检测中均具有较好的检测效果，但干式免疫荧光法在C-反应蛋白检测中标本用量少，全血标本即可检测，检测速度快，灵敏度高，线性范围广，对于门、急诊快速单个测定中适用性较高。