血清IL-29及TLR4在小儿过敏性紫癜临床诊断中的应用价值研究

钱 宇，王桂兰，吴小波，贾晓彧，李秋平

(1.秦皇岛市第一医院 儿科,河北 秦皇岛066000；2.秦皇岛市第一医院 检验科,河北 秦皇岛066000)

临床上又将过敏性紫癜称为“许兰-亨诺综合征”(Henoch-Schonlein purpura，HSP)”可发生于任何年龄段，但是以学龄前及学龄期儿童常见，是临床上较为常见的一种自身免疫反应介导的全身性血管炎，主要临床表现包括：出血性皮疹、腹部疼痛、便血、关节肿痛、蛋白尿以及血尿等[1-2]。诱发HSP发病的原因较多，主要包括病原微生物感染、食物、药物等，然而直接致病因素却很难确定。近年来，很多文献研究结果显示[3-4]：感染是HSP发病的首要诱发因素，HSP对患者生活质量造成极大的影响。本研究选择2014年9月至2019年2月秦皇岛市第一医院儿科就诊的200例年龄为3-14岁的患儿为研究对象，着重探讨了血清白介素-29(IL-29)及钟样受体4(Toll receptor 4，TLR4)在小儿HSP临床诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2014年9月至2019年2月秦皇岛市第一医院儿科就诊的200例HSP患儿作为研究对象，均符合诸福棠实用儿科学(第7版)中关于HSP的临床诊断标准[5]，其中男112例，女88例；年龄3-14岁，平均(7.28±0.63)岁。另外选择同期于秦皇岛市第一医院门诊体检中心健康体检儿童150名作为对照组，其中男82例，女68例；年龄3-14岁，平均(7.34±0.70)岁。经分析，对照组与观察组儿童在基础资料差异均无统计学意义。

1.2 入选及排除标准入选标准：①包括首发及复发HSP患儿；②智力正常，无精神类疾病患儿；③均依据伦理学原则征得患儿家属及患儿本人同意，自愿配合本研究。排除标准：①排除特殊遗传代谢性疾病与血液系统疾病患儿；②排除自身免疫性疾病患儿；③不愿配合本研究者。

1.3 研究方法首先采集研究对象清晨空腹状态下肘静脉血10.0 ml，使用EDTA抗凝剂进行抗凝处理，于2 000 rpm转速下离心10 min，静置，分离血清与血浆，均于-80℃下进行保存，待测。

1.3.1外周血TLR4表达量检测方法 采用聚蔗糖密度梯度方法将外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)进行提取。细胞总RNA采用Trizol法进行提取，然后逆转录为cDNA。以此作为模板，开展PCR扩增反应。TLR4引物均购自于上海生工生物有限公司。引物上游：5’-TACGCTAGCGACTAGCTACT-3’，下游：5’-GCGTACGTACGCTAGCGCAT-3’。扩增条件为：95℃下扩增5 min，95℃下扩增0.5 min，55℃下扩增0.5 min，72℃下扩增0.5 min，上述过程共计40个循环。目的基因相对含量计算：RQ=2-ΔΔCt。

1.3.2IL-29测定方法 采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA法)进行测定分析，试剂盒均购自于北京晶美生物医学工程公司。

1.3.3T细胞亚群水平检测方法 采用流式细胞仪[贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司生产，型号为：CytoFLEX LX型]对Th17/Treg细胞比值进行检测。

2 结果

2.1 两组TLR4表达量及IL-29水平对比观察组患儿外周血TLR4及IL-29水平均分别显著高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组TLR4表达量及IL-29水平比较

2.2 两组患儿外周血Th17、Treg及Th17/Treg对比观察组Th17及Th17/Treg水平均分别显著高于对照组(P均<0.05)，观察组Treg水平显著低于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 两组患儿外周血Th17、Treg及Th17/Treg比较

2.3 TLR4、IL-29与Th17/Treg相关性分析经Pearson分析，TLR4、IL-29与Th17/Treg均存在相关性(P均<0.05)，见表3。

表3 TLR4、IL-29与Th17/Treg相关性分析结果

3 讨论

HSP是临床上较为常见的一种多发于儿童人群的免疫性血管炎性疾病，其发病机理尚未完全明确[6-7]。患儿主要临床表现包括：腹部疼痛、皮疹以及关节炎性症状等。HSP发病主要与机体免疫功能紊乱以及T淋巴细胞免疫应答失衡存在一定的相关性，而且患儿各类细胞因子的分泌异常也会引起HSP发病[8]。临床研究证实：Th17是近年来发现的不同于Th1、Th2的T淋巴细胞亚群，在自身免疫性疾病中发挥作用[9]，Treg属于一类对T淋巴细胞功能产生抑制作用的细胞群体，能够有效维持以及调节细胞正常免疫功能。Th17/Treg比值能够对机体正常免疫功能、炎性反应以及自身免疫性疾病等均具有维持效果。

HSP发病与IL-21及IL-10存在显著的相关性[10]。刘红军[11]研究结果显示：HSP发病与IL-23及IL-15存在显著相关性。但是，关于HSP发病与IL-29之间的相关关系的研究却非常少见。该细胞因子属于一种功能多样化的炎性细胞因子，常常会引起机体发生炎性反应[12]。IL-29在多种自身免疫性疾病(系统性硬化病、类风湿性关节炎等疾病)扮演重要的角色[13]。程广坤等[14]研究结果表明，HSP急性期患儿外周血IL-29 mRNA水平显著高于对照组，此结果提示IL-29与HSP发病之间存在非常紧密的关联性，而且也表明HSP患者IL-29在转录水平已出现变化。IL-29在HSP发病过程中具有十分重要的作用，其机理可能为：外周血IL-29水平上升，对NF-κB信号通路具有激活作用，从而促使Th17过度活化与外周血中的其他细胞因子水平显著升高[15]。TLR4参与了机体多种自身免疫性疾病发病过程。相关文献报道称：TLR4活化可能与通过MyD88所依赖的途径而参与了HSP的发病过程[16]。陆烨等[17]研究结果显示：HSP患儿外周血TLR4表达水平要显著高于健康儿童(P<0.05)。本研究结果显示：观察组患儿外周血TLR4与IL-29水平显著高于对照组，且经相关性分析，此两种指标与Th17/Treg呈正相关性。此结果与文献[18-20]结果相一致。另外，朱海涛等[21]选择与TLR4性质接近地TLR2作为研究对象，同样得出如上述相接近的结果。

综上所述，血清IL-29及TLR4在小儿HSP临床诊断中具有较高的应用价值，可能与机体免疫应答之间存在一定的关联性。