脑胶质瘤术后外周血T淋巴细胞水平变化及其与颅内感染的关系

陈 洋 李琳坤 陈晓静

脑胶质瘤是一类起于中枢神经系统的恶性肿瘤，约占颅脑肿瘤的40%，该肿瘤侵袭性极高，经手术、化疗等传统治疗后，患者复发率高且中位生存期短，预后极差[1]。有研究[2-3]提出免疫治疗或能为脑胶质瘤的治疗提供新思路，因此，探究治疗过程中脑胶质瘤患者的免疫学变化是非常必要的。细胞免疫是机体免疫调节的重要方式之一，T淋巴细胞亚群在多种肿瘤组织中异常表达已被证实[4]。本研究以T淋巴细胞亚群为切入点，探究脑胶质瘤患者手术前后细胞免疫功能改变情况及其与术后颅内感染的关系，希望为胶质瘤患者术后病情评估提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月至2020年8月医院收治的92例脑胶质瘤患者，根据胶质瘤级别分为低级组(Ⅰ～Ⅱ期，n=42)、高级组(Ⅲ～Ⅳ期，n=50)。低级组，男性23例，女性19例，年龄28～66岁，平均(42.94±5.23)岁；体力状况(ECOG)评分(1.66±0.47)分。高级组，男性26例，女性24例，年龄24～65岁，平均(43.52±5.68)岁；ECOG评(1.58±0.49)分。2组一般资料比较无差异(P>0.05)。

1.2 纳入、排除标准

纳入标准：①经细胞学及组织学病理确诊为脑胶质瘤；②患者生存期>3个月；③患者自愿参与本研究。排除标准：①患有其他恶性肿瘤者；②合并严重感染及出血者；③术后复发或再次手术；④合并严重心肝肾功能障碍者；⑤孕妇或妊娠患者。

1.3 检测方法

入组患者均在手术前、术后7 d采集静脉血5 ml，取3 ml 6 h内进行染色处理，使用FACSCalibur流式细胞仪(美国BD公司生产)，FACScomp软件检查仪器灵敏度并设置实验条件，利用MultiSET软件对CD3+、CD4+、CD8+进行绝对计数分析，计算三者在T淋巴细胞中的百分比以及CD4+/CD8+值。

1.4 颅内感染评价标准

对入组患者行3个月的随访，通过住院、门诊、电话的形式进行。参考《医院感染诊断标准》[5]：①脑膜刺激征呈阳性，术后体温无确切原因保持上升；②脑脊液蛋白含量>0.45 g/l、白细胞>0.01×109/l；③脑脊液细菌培养阳性；④经影像学检查证实脑部存脓肿病灶。将同时出现①②，具备③、④中任一条即可确诊为感染。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 高级组和低级组手术前后T淋巴细胞水平对比

手术前，高级组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著低于低级组，CD8+显著高于低级组。术后7 d，2组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著高于术前，CD8+显著低于术前；其中，高级组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著低于低级组，CD8+显著高于低级组(P<0.05)，见表1。

表1 高级组和低级组手术前后T淋巴细胞水平对比

2.2 感染组和非感染组手术前后T淋巴细胞水平对比

92例行手术治疗的脑胶质瘤患者术后颅内感染率为16.30%(15/92)，其中高级别胶质瘤患者11例、低级别胶质瘤患者4例。手术前，感染组和非感染组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD8+比较未见差异(P>0.05)。术后7 d，非感染组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著高于术前，CD8+显著低于术前；感染组外周血CD4+显著高于术前(P<0.05)，CD3+、CD4+/CD8+、CD8+较术前未见差异(P>0.05)。术后7 d，感染组外周血CD3+、CD4+均显著低于非感染组，CD8+显著高于非感染组(P<0.05)，见表2。

表2 感染组和非感染组手术前后T淋巴细胞水平对比

2.3 外周血T淋巴细胞水平对脑胶质瘤患者术后颅内感染的预测价值

ROC曲线分析显示，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+四者联合预测脑胶质瘤患者术后颅内感染的AUC为0.892，高于单独检测的0.814、0.756、0.699、0.748，此时血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的截断点分别为59.64%、33.37%、30.64%和1.08，见表3，图1。

表3 外周血T淋巴细胞水平对脑胶质瘤患者术后颅内感染的预测价值

图1 外周血T淋巴细胞水平评估脑胶质瘤患者术后颅内感染的ROC曲线

3 讨论

传统观点[6-7]认为中枢神经系统中的脑血屏障可隔绝免疫细胞进入，属于免疫豁免区域，但随着研究深入，中枢神经实质可检测到T淋巴细胞，同时也发现了脑膜淋巴系统的存在，提示中枢神经系统并非完全免疫豁免区，但脑血屏障的确会导致中枢神经系统免疫功能被抑制、应答能力低下[8-9]。除此之外，胶质瘤细胞还能进行多种方式的免疫逃逸，因此机体免疫功能是否正常，将影响胶质瘤的发生发展过程[10-12]。

细胞免疫主要由T淋巴细胞参与，其中CD4+T淋巴细胞可诱导和辅助细胞毒性T淋巴细胞发展成熟，同时增强B淋巴细胞的抗体；CD8+通过自身及抑制因子的作用，抑制抗体的形成，可负向调节免疫反应，二者比值可以反应免疫功能敏感度。本研究中，手术前高级别胶质瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著低于低级组，CD8+显著高于低级组，以上结果提示，胶质瘤患者免疫抑制情况与肿瘤侵袭能力相关，高级别胶质瘤患者体内免疫抑制情况更严重，为肿瘤的增殖转移提供机会，与既往研究结论一致[13]，考虑原因：中枢神经系统免疫应答能力低下，胶质瘤细胞可在免疫系统未觉察的情况下增殖、转移，高级别胶质瘤患者外周血中CD4+等T淋巴细胞下调、CD8+上调，机体免疫功能抑制情况更严重[14-15]。经手术治疗后，脑胶质瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著高于术前，CD8+显著低于术前，其中高级组外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著低于低级组，CD8+显著高于低级组。以上结果提示，手术治疗可以减轻胶质瘤患者免疫抑制情况，可能原因有2种：①肿瘤移除；②手术应激或其它相关因素影响，但具体原因有待实验探究。

徐春华等[16]的研究认为低级胶质瘤患者的中位生存期显著高于高级别患者，这是因为肿瘤恶性程度越高、机体免疫抑制情况越严重，机体缺少对肿瘤的抑制作用，将直接导致生存期缩短，除此之外，术后生活质量评分、是否开放脑室、是否合并术后感染等都是影响其预后的因素。本研究对入组患者进行随访，发现术后颅内感染率为16.30%(15/92)，其中高级别胶质瘤患者感染率22.00%(11/50)略高于低级别感染率9.52%(4/42)，考虑是因为细胞免疫在术后抗感染过程中发挥作用，而高级组患者机体免疫功能抑制严重，术后发生颅内感染的风险更高。本研究中，术后7 d感染组外周血CD3+、CD4+/CD8+、CD8+比较未见差异(P>0.05)，提示术后发生颅内感染的患者机体免疫抑制情况无显著改善；此外，术后7 d感染组外周血CD3+、CD4+均显著低于非感染组，CD8+显著高于非感染组(P<0.05)，以上结果提示，与非感染组相比，脑胶质瘤围术期发生颅内感染的患者机体免疫抑制情况更加严重，与既往研究一致[17]。经ROC曲线分析，脑胶质瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+四者联合预测术后颅内感染的AUC为0.892高于单独检测，提示脑胶质瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平对术后发生颅内感染有一定预测价值。

综上所述，脑胶质瘤患者经手术治疗可显著改善外周血T淋巴细胞水平，高级别胶质瘤患者术后出现颅内感染的比例高于低级别组，围术期监测患者外周血T淋巴细胞水平有助于评估术后颅内感染情况。