PD- 1、TIM- 3 的表达与乳腺癌临床病理参数的相关性

姚军

淄博市中医医院病理科，山东淄博 255000

乳腺癌是一种较为常见的恶性肿瘤， 较少发于男性。 虽然目前医学发展较快，乳腺癌治疗也相应取得一定进展，但仍有部分乳腺癌患者发生肿瘤转移，造成死亡，威胁女性健康[1-2]。 癌细胞具有较高的适应和诱变能力，可成功躲避免疫系统反击，且生存环境决定癌细胞生长发育速度， 因此乳腺癌的发生和恶化不仅和肿瘤性质有关，也和机体的免疫系统有关[3]。 最新研究表明，T 淋巴细胞的免疫功能和癌细胞的行为有关，可降低治疗敏感性。 但T 淋巴细胞不能消退肿瘤，有部分研究学者认为[4]，和程序性死亡受体1-（PD-1）、T 细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）的高表达有一定关系。 鉴于此， 该研究将该院2018 年1 月—2019 年3 月收治的39 例乳腺癌患者的肿瘤组织标本和癌旁组织标本作为研究对象，旨在分析PD-1、TIM-3 的表达与乳腺癌临床病理参数的相关性。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用回顾性分析方法收集该院收治的39 例乳腺癌患者的肿瘤组织标本和癌旁组织标本分别作为肿瘤组和癌旁组。 年龄28～67 岁，平均（48.57±6.24）岁；病程3 个月～6 年，平均（3.16±2.08）年。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准： ①临床经影像学和病理结果确诊为乳腺癌；②≥18 岁成人患者；③患者或其家属同意翻阅其病例报告。 排除标准：①合并心、肝、肾等重要器官功能性病变；②合并免疫缺陷等疾病；③合并全身感染等疾病；④伴有其他恶性肿瘤患者；⑤精神障碍或有家族精神遗传史者。

1.3 方法

①将所有收集的癌旁组织和肿瘤组织的标本剪碎经胰蛋白酶和胶原酶消化后， 行非连续密度离心法将其T 淋巴细胞提取出， 后放入1 mL 的Trizol 中混合均匀，后放置于-80℃下保存。 ②mRNA 表达量：于混合液中，提取出总RNA 和总蛋白，并使用琼脂糖凝胶电泳检测出RNA 质量。 蛋白表达量：行Western blotting 检测方法检测PD-1、 TIM-3 的蛋白表达量。

1.4 观察指标

比较肿瘤细胞和癌旁组织细胞中PD-1、 TIM-3 的mRNA 和蛋白的表达量； 分析乳腺癌患者的T 淋巴细胞中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达量和临床病理参数之间的关系； 采用双变量Pearson 分析乳腺癌患者的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达量之间相关性。

1.5 统计方法

2 结果

2.1 癌旁组织和肿瘤组织中PD-1、 TIM-3 的mRNA表达量和蛋白表达量

肿瘤组中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达量和蛋白表达量均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 癌旁组和肿瘤组中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达量和蛋白表达量对比（）

表1 癌旁组和肿瘤组中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达量和蛋白表达量对比（）

组别mRNA 表达量PD-1 TIM-3蛋白表达量（ng/mL）PD-1 TIM-3癌旁组(n=39)肿瘤组(n=39)t 值P 值1.36±0.34 3.24±0.41 22.042＜0.001 0.10±0.06 0.79±0.21 19.730＜0.001 1.68±0.34 3.14±0.38 17.881＜0.001 0.26±0.05 0.95±0.34 12.539＜0.001

2.2 肿瘤组中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达与临床病理参数关系

肿瘤大小≥2 的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达水平高于肿瘤大小＜2，T4 级的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表达水平＞T3 级＞T2 级＞T1 级， 淋巴结转移阳性的PD-1、TIM-3 的mRNA 表达水平高于阴性， 差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表2。

表2 肿瘤组中PD-1、TIM-3 的mRNA 表达与临床病理参数关系

表2 肿瘤组中PD-1、TIM-3 的mRNA 表达与临床病理参数关系

病理参数PD-1 TIM-3肿瘤大小（cm）＜2（n=26）≥2（n=13）t 值P 值肿瘤分级T1 级（n=12）T2 级（n=13）T3 级（n=8）T4 级（n=6）F 值P 值淋巴结转移阴性（n=21）阳性（n=18）t 值P 值2.67±0.34 3.69±0.61 6.735＜0.001 3.07±0.62 3.89±0.74 3.650 0.001 2.69±0.31 3.24±0.53 3.34±0.67 3.87±0.74 6.776 0.001 3.01±0.52 3.17±0.56 3.74±0.66 4.18±0.94 5.820 0.002 2.58±0.67 3.68±0.92 4.260＜0.001 3.25±0.54 4.07±0.81 3.771 0.001

2.3 乳腺癌患者T 淋巴细胞PD-1 和TIM-3 的mRNA 表达量之间的相关性分析

相关性分析显示，乳腺癌患者T 淋巴细胞中PD-1和TIM-3 的mRNA 表达量呈正相关（r=0.819，P＜0.001）。

3 讨论

准确寻找乳腺癌的预后标志物， 可有效预防乳腺癌的发生以及复发， 对改善乳腺癌患者预后具有重要作用[5]。 相关研究表明[6]，免疫抑制性分子可降低机体对肿瘤的抵抗作用， 因此提高机体抗肿瘤的免疫作用需降低机体中免疫抑制性分子水平， 也可通过检测人体中免疫抑制性分子水平初步判定机体抗肿瘤能力。

该研究结果显示， 肿瘤组织中T 淋巴细胞的PD-1、TIM-3 的mRNA 表达量[（3.24±0.41）、（0.79±0.21）]以及蛋白表达量[（3.14±0.38）ng/mL、（0.95±0.34）ng/mL]均高于癌旁组织[mRNA 表达量（1.36±0.34）、（0.10±0.06）]及蛋白表达量[（1.68±0.34）ng/mL、（0.26±0.05）ng/mL]，PD-1、TIM-3 的mRNA 表达量呈正相关 （r=0.819，P＜0.001），和沈辉等[7]研究结果一致，肿瘤组织淋巴细胞的PD－1、TIM－3 的mRNA 表 达 量 [（3.09±0.38）、（3.42±0.31）]和蛋白表达量[（0.66±0.08）ng/mL、（0.80±0.11）ng/mL]高于癌旁组织表达量[mRNA 表达量（1.26±0.23）、（1.57±0.29）及蛋白表达量（0.10±0.01）ng/mL、（0.26±0.02）ng/mL]， 表明PD-1、TIM-3 在乳腺癌患者中呈高表达，且直接参与了乳腺癌的发生以及发展过程。 且会随着肿瘤大小、肿瘤分级、肿瘤转移程度加深而升高。 分析其原因在于，人体的免疫机制工作原理是消耗机体中T淋巴细胞的，封闭PD-1 分子，并同时阻断PD-1 和配体1 的结合作用，最终恢复了T 淋巴细胞的应答，从而提高机体的抗肿瘤免疫作用[8]，因此该研究中肿瘤组织中PD-1 的mRNA 和蛋白水平均较高。 但也有部分研究学者认为，PD-1 和肿瘤患者预后有关的原因在于其表达抑制，使得其和其配体传递信号过程阻断，从而肿瘤患者症状有改善趋势。 还有部分研究学者认为，单独PD-1 不能够有效起到逆转T 淋巴细胞消耗， 需联合T淋巴细胞负调节物TIM-3 共同作用[9]，而该研究中肿瘤组织TIM-3 的mRNA 和蛋白水平较高，证实这一点。近年来， 联合多种免疫检查点为人们治疗乳腺癌提供了新的思路， 早期研究表明，PD-1、CTLA-4 联合作用，可将肿瘤微环境中T 淋巴细胞产生过程阻断， 降低髓系细胞和Treg 细胞的表达，从而增强机体抗肿瘤免疫应答[9-10]，由此可得，阻断PD-1 和TIM-3 的两个检验点的信号通路， 也可达到抑制肿瘤增长得目的。 PD-1、TIM-3的mRNA 和蛋白水平呈高表达， 从而降低T 淋巴细胞的应答作用，降低其抗肿瘤作用，增加了癌细胞的转移速率[11-12]， 因此在乳腺癌患者机体中，PD-1 和TIM-3的mRNA 水平呈正相关。

综上所述，PD－1、TIM－3 水平在乳腺癌患者中呈高水平表达且呈正相关，肿瘤越大、肿瘤分级越高以及淋巴结呈阳性，其水平越高。