胸腹水癌细胞形态学检验的应用及临床价值评估分析

古丽扎提·阿哈泰，沙蕾

新疆医科大学附属中医院检验科，新疆哈密 830000

胸腹水癌细胞形态学检验是临床检验医学的重要检测项目，对于肿瘤疾病的诊断具有重要的意义[1]。临床上多种疾病可以导致胸腹水的出现，包括炎症疾病、癌症疾病等。胸腹水癌细胞形态学检验是临床鉴别疾病良性、恶性的重要参考，对于疾病的诊断具有重要的意义。目前检验医学对胸腹水癌细胞形态学检验的研究尚不够深入，容易在临床诊断的过程中出现差错。同时胸腹水癌细胞形态多样，严格规范胸腹水标本的处理和标本镜检对于提高癌细胞的检出率具有重要的意义。如何通过改进胸腹水标本的处理方法提高形态学检验的准确性是临床需要重点探究的问题。该研究纳入该院2019 年1—12 月收治的50 例患者探讨胸腹水癌细胞形态学检验的应用及临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入该院收治的50 例患者，其中男31 例，女19例；年龄 43～72 岁，平均（61.3±4.2）岁；其中肺癌 39例，肝癌 5 例，卵巢癌 3 例，胃癌 3 例。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：患者临床上确诊为恶性肿瘤癌性胸腹水，病历完整；患者签署该研究知情同意书。排除标准：妊娠期或哺乳期女性；合并精神分裂症等严重精神障碍性疾病的患者； 合并心肺功能失代偿的患者。该研究经该院伦理委员会审批通过。

1.3 方法

对纳入的所有患者进行胸腹水癌细胞形态学检验。将抽取的胸腹水装在乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2) 抗凝剂塑料带盖标识专用试管，将标本差速离心后弃去上清液进行Wright-Giemsa 混合染色和细胞免疫化学染色，晾干玻片。检验过程中对实验标本处理方法、放置时间和推片标本量进行调整。实验标本处理方法：第一种方法是离心处理后将试管内的上清液倒掉，第二种方法是离心处理后将试管管底细胞沉渣端朝着里面逐渐弃去上清液，同时使用棉球将残液吸走。放置时间为：分别将标本在专用是试管中放置1、2、4、16 h 后进行推片观察离心推片情况。推片标本量为：一种采用加厚推片，一种采用普通推片。

1.4 观察指标

观察不同处理方法残留细胞液和检出率；对比各个时间段离心推片情况；比较不同推片方法癌细胞检出率。

1.5 统计方法

采用SPSS 19.0 统计学软件分析数据，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用 χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同处理方法残留细胞液和检出率比较

第一种方法残留细胞液≥100 μL 高于第二种方法，第一种方法方法检出率42.00%低于第二种58.00%，差异有统计学意义（χ2=8.29，P＜0.05）。见表1。

表1 不同处理方法残留细胞液和检出率比较

2.2 各个时间段离心推片情况比较

2 h 内离心推片情况无明显变化，4 h 以后离心推片核固缩、碎裂明显。见表2。

表2 各个时间段离心推片情况比较

2.3 不同推片方法癌细胞检出率比较

加厚推片癌细胞检出率68.00%高于普通推片42.00%，差异有统计学意义（χ2=12.36，P＜0.05）。见表3。

表3 不同推片方法癌细胞检出率比较

3 讨论

恶性肿瘤疾病是临床研究的重点难点问题，近年来随着人口老龄化趋势的发展和生活环境的不断恶化，恶性肿瘤疾病的发病率呈现逐年上升的趋势[2]。恶性肿瘤疾病癌细胞容易发生侵犯和转移，并伴有相关的并发症。癌细胞侵犯胸膜、腹膜组织后容易引起胸水、腹水，严重时对患者呼吸等功能活动产生影响[3]。胸水对胸膜腔的压迫可以导致局部肺泡舒张障碍，局部血氧交换受到影响，患者出现不同程度的呼吸困难症状。腹水严重时患者可以出现腹部膨胀、腹胀、腹痛等不适。然而，临床上炎性疾病也可以出现胸腹水，临床需要将炎性胸腹水和癌性胸腹水进行鉴别，胸腹水的形态学检验结果对于疾病的诊疗具有重要的影响。胸腹水癌细胞形态学检验是临床诊断肿瘤疾病最重要的方法之一，通过寻找胸腹水中癌细胞可以为临床疑难肿瘤疾病的诊断提供重要的诊断证据。胸腹水癌细胞形态学检验对于检验技术的要求较高，遗漏胸腹水癌细胞的诊断对于患者的病情治疗将带来严重的危害。浓缩细胞量的处理方法有利于检验过程中获得更高的癌细胞检出率。虽然通过将胸腹水进行多次离心后进行形态学检验可以提高单位容积中癌细胞的量，但该方法对于胸腹水标本量的要求较高，同时需要繁多的操作步骤，在较长时间的检验过程中对于标本的抗凝要求也更加苛刻。既往临床采用直接弃去离心管上清液的方法进行检验，但检验癌细胞检出率较低。该研究探讨胸腹水癌细胞形态学检验的应用及临床价值。结果表明，第一种方法残留细胞液≥100 μL 高于第二种方法，第一种方法方法检出率42.00%低于第二种 58.00%（χ2=8.29，P＜0.05）。加厚推片癌细胞检出率 68.00%高于 普 通 推 片 42.00%（χ2=12.36，P ＜0.05）。该研究结果和高礼信[4]的研究结果一致性较高，其研究结果表明研究组方法残留细胞液≥100 μL高于第二种方法，第一种方法方法检出率40.00%低于第二种57.14%（P＜0.05）。加厚推片癌细胞检出率70.00%高于普通推片 47.00%（P＜0.05）。结合研究结果分析，离心处理后上清液的处理对于提高癌细胞的检出率具有重要意义，同时需提高对于加厚推片的重视。通过对处理方法进行改进，将离心后的试管倾斜80～90℃30 s 并用一颗棉球吸去过多的残余液体，从而使得细胞得以更进一步的浓缩，使得沉淀的残余液量比一般方法减少1/2 以上。单位体积内细胞的增加有利于推片的制备。由于标本中细胞越多越容易检出癌细胞，将推片量由3 μL 提高到 6 μL，在研究中发现体液脱落细胞学检查制成的推片以厚片更加适宜。研究中发现5～6 μL 的加厚推片可以更加清晰地显示细胞的结构情况，分析具体原因为加厚推片使得细胞大量在局部聚集，可以减少临床检验科工作人员镜下观察耗费的时间，更容易找到目标癌细胞并对细胞的来源进行初步评判，从而提高癌细胞的检出率。同时在观察胸腹水癌细胞形态的过程中需要考虑到过多红细胞癌细胞检出的影响。癌细胞对胸腹膜中小血管的侵犯损害不可避免带来红细胞，使得胸腹水中的红细胞增多并对观察造成影响。胸腹水中的红细胞层会影响残留细胞液量，临床检验过程中可以向离心管中加入适量的低渗氯化钾溶液破坏红细胞结构，从而在离心操作的步骤中将沉淀物制片。细胞的退行性改变也会对胸腹水细胞学检验造成一定的影响，胸腹水标本的及时检验有利于维持标本的新鲜程度。胸腹水标本在放置的过程中会逐步出现细胞的退化、 空泡、核碎裂和固缩等改变。通过检验发现胸腹水标本放置2 h 以内细胞形态不会发生明显的改变，而在放置4 h后进行观察可以看到明显的核固缩、碎裂改变。同时，部分胸腹水标本细胞形态改变在标本获得时已经出现，临床在检验过程中需要加强对不同病理状态下的细胞形态识别，需要重点区分细胞形态改变是否由推片机械性因素造成类似退化性变化。同一张标本中，当部分区域细胞退化而部分区域细胞结构清晰时，即为假性细胞退化。单核巨噬细胞、中性粒细胞是标本中最容易出现空泡改变的细胞，然而其对镜下癌细胞形态的观察影响不大。淋巴细胞是最不容易发生形态变化的细胞，空泡改变和退化改变较少，但淋巴细胞可以在尾部出现涂抺改变影响观察。癌细胞和间皮细胞是标本中最容易出现退化的细胞，在放置的过程中两种细胞发生相似的形态学改变，从而对镜下观察造成干扰。胸腹水标本细胞形态学的观察至关重要，癌细胞胞体和胞核多表现为不规则形态，细胞体积较大或可以成簇分布，核仁通常大而明显，胞质多为丰富而染色不均。退行性改变的癌细胞也会具有明显的恶性形态改变，尤其是胞核的畸形和大核仁仍然较为明显[5-6]。相比之下，间皮细胞退化后形态与退化后的癌细胞存在明显的差异，有利于临床观察的鉴别。细胞免疫化学染色对于细胞肿瘤的鉴别也具有一定的作用。胸腹水标本细胞容易受到其他多种外界因素的干扰，包括疾病病因、体液营养渗透压、体液营养成分、试管中标本量、试管的材质、温度等多种因素。通过查阅相关的文献并结合该研究的相关结果建议在处理胸腹水标本的方法上可以采用EDTA-K2 抗凝剂塑料带盖标识专用试管盛装标本并对标本在2 h 内及时送检处理。临床上有遇到夜间进行胸腹水抽取的病例，对于来不及送检的夜间标本可以防止于4 ℃冰箱次日及时送检处理，该过程不会对细胞形态造成较大的影响[7]。镜检工作人员的经验也对癌细胞的检出具有一定的影响，低倍和油镜是镜检的两个重要环节，通常在镜检的过程中需要采用低倍镜寻找可疑的癌细胞然后再用油镜下观察。低倍镜观察的过程中需要重点关注尾部区域，同时也不能忽视推片边端和头部区域。推片的体部不作为推片镜检过程中重点考虑的缓解，该部位细胞的情况不会对镜检结果带来较大的影响。建议临床中对于细胞数目较少的标本和阴性标本必须采用至少3 张或以上的标本数目进行更加详细的观察； 同时对于高度可疑的病例采用更多的标本进行低倍镜观察，从而最大限度地提高癌细胞的检出率[4，,8]。

综上所述，胸腹水癌细胞形态学检验的应用价值显著，检验过程中加强标本处理、标本放置时间、涂片厚度等处理有利于提高癌细胞的检出情况，避免误诊、漏诊。胸腹水癌细胞形态学检验值得临床高度重视。