核桃花化学成分的研究

李 倩

核桃花化学成分的研究

李 倩

河南农业大学食品科学技术学院，河南省食品加工与流通安全控制工程技术研究中心，河南 郑州 450002

研究核桃花的化学成分。利用正和反相硅胶、Sephadex LH-20及制备液相等柱色谱方法进行分离纯化，根据谱学数据及理化性质鉴定化合物结构，并采用MTT法检测化合物的体外细胞毒活性。从核桃花95％乙醇水提取物中分离得到12个黄酮类化合物和7个生物碱类化合物，分别鉴定为金合欢素（1）、柚皮素（2）、5,7-二羟基-6,8,4′-三甲氧基黄酮（3）、木犀草素（4）、草质素（5）、白杨素（6）、异野樱素（7）、3,5-二羟基-4′,7-二甲氧基黄酮醇（8）、槲皮苷（9）、异槲皮苷（10）、山柰酚（11）、槲皮素（12）、2-(4-羟基苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮（13）、吲哚-3-甲酸乙酯（14）、1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-1-酮（15）、3-醛基吲哚（16）、马齿苋酰胺E（17）、青兰素C（18）、-苯甲酰--苯丙氨酸（19）。除化合物4和9～12外，其余化合物均为首次从胡桃属中分离得到，其中化合物13为1个新的天然产物。化合物2、3和5具有抑制人结肠癌HCT-116细胞、人肝癌HepG2细胞、人胃癌BGC-823细胞、人肺支气管癌NCI-H1650 细胞、人卵巢癌A2780细胞的增殖作用。

核桃花；黄酮；生物碱；抗肿瘤；2-(4-羟基苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮；柚皮素；5,7-二羟基-6,8,4′-三甲氧基黄酮；草质素

核桃L.是胡桃科（Juglandaceae）胡桃属落叶乔木植物，在我国大部分地区作为观赏植物和经济植物广泛种植。其果实核桃仁深受大家喜爱，其未成熟的花絮也是我国一些民间地区流行的蔬菜。该植物具有多种药用价值，其干燥成熟种子被《中国药典》2020年版收录用于治疗疾病[1-2]。在我国一些民间地区，核桃花也被用来预防癌症。为进一步开发核桃资源的应用途径，在前期研究[3-5]的基础上，本实验对核桃花乙醇提取液的醋酸乙酯萃取物化学成分进行研究，从中分离得到19个化合物，12个黄酮类化合物分别鉴定为金合欢素（acacetin，1）、柚皮素（naringenin，2）、5,7-二羟基-6,8,4′-三甲氧基黄酮（5,7-dihydroxy-6,8,4′- dimethoxyflavone，3）、木犀草素（luteolin，4）、草质素（herbacetin，5）、白杨素（chrysin，6）、异野樱素（isosakuranetin，7）、3,5-二羟基-4′,7-二甲氧基黄酮醇（3,5-dihydroxy-4′,7-dimethoxyflavone，8）、槲皮苷（quercitrin，9）、异槲皮苷（isoquercitrin，10）、山柰酚（kaempferol，11）、槲皮素（quercetin，12）；7个生物碱类化合物分别鉴定为2-(4-羟基苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮[2-(4-hydroxyphenethyl)- isoindoline-1,3-dione，13]、吲哚-3-甲酸乙酯（1-indole-3-carboxylic acid-ethyl ester，14）、1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-1-酮（1,2,3,4-tetrahydronorharman- 1-one，15）、3-醛基吲哚（1-indole-3-carbaldehyde，16）、马齿苋酰胺E（oleracein E，17）、青兰素（dracocephin C，18）、-苯甲酰--苯丙氨酸（-benzoyl--phenylalaninol，19）等。除化合物4和9～12外，其余均为首次从胡桃属植物中分离得到，其中化合物13为1个新的天然产物。测定了该19个化合物对5种人癌细胞的细胞毒活性，结果表明，化合物2、3和5具有较好的抑制肿瘤细胞增殖的作用。

1 仪器与材料

Agilent 1100 series LC/MSD Trap SL型质谱仪（美国Agilent公司）；Mercury-400、Inova-500、VNS-600型核磁共振仪（美国Varian公司）；Bruker Avance-III-600型核磁共振仪（Bruker公司）；Perkin-Elmer 241型旋光仪（德国Perkin-Elmer公司）；薄层色谱用硅胶GF254和硅胶G以及柱色谱用硅胶（200～300目）均为青岛海洋化工厂生产；ODS-A-HG为日本YMC公司产品；MCI GEL为日本三菱公司产品；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；Agilent 1200型高效液相色谱仪；日本岛津Prominenece UFLC；日本岛津LC-6AD型制备型高效液相色谱仪（紫外检测器SPD-20A，PRC-ODS色谱柱250 mm×20 mm，5 μm）；色谱用水为杭州娃哈哈公司生产，其余用水为市售去离子水，分析纯试剂为北京化工厂生产，色谱纯试剂为美国fisher公司产品；实验用人结肠癌HCT-116细胞、人肝癌HepG2细胞、人胃癌BGC-823细胞、人肺支气管癌NCI-H1650细胞、人卵巢癌A2780细胞均由北京协和医学院药物研究所药理室提供。

实验用核桃花于2014年5月采自北京天坛公园，经中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为核桃L.的花序。植物标本（ID-S-2601）保存于中国医学科学院药物研究所植物标本室。

2 提取与分离

取干燥的核桃花75 kg，粉碎，用95%乙醇回流提取2次，分别为2、1 h，每次用溶剂量均以浸没过药材为度。合并乙醇提取液并浓缩；浓缩液用等体积的石油醚萃取3次；将醇溶液减压回收溶剂至无醇，加适量水混悬溶解；此混悬液用等体积的醋酸乙酯萃取3次，合并醋酸乙酯萃取液并减压浓缩，浓缩液（约3 L）用pH＝2的稀盐酸萃取3次（每次1.95 L），醋酸乙酯层用蒸馏水洗3次后，减压浓缩得中性醋酸乙酯部分450 g。将此醋酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱进行分离，以三氯甲烷-甲醇（25∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脱，经薄层色谱检测分为5个洗脱部分（Fr. 1～5）。

Fr. 1（58 g，三氯甲烷-甲醇25∶1）经反相MCI柱色谱，依次以30%、50%、70%乙醇水梯度洗脱，得到3个洗脱部分（Fr. 1.1～1.3）。Fr. 1.1（15 g，30%乙醇）经中压制备色谱（MPLC），依次以30%、50%、70%、100%甲醇梯度洗脱，得到4个洗脱部分（Fr. 1.1.1～1.1.4）。Fr. 1.1.1（2.48 g，30%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 1.1.1-8～1.1.1-9（80 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（60∶40）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得到化合物15（4 mg，R＝21 min）；Fr. 1.1.1-10～1.1.1-12（72 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（60∶40）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物2（24 mg，R＝28 min）；Fr. 1.1.3（2.1 g，70%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 1.1.3-5～1.1.3-6（70 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（65∶35）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长进行二次制备得化合物3（16 mg，R＝16 min）；Fr. 1.1.3-8（38 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（70∶30）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长进行二次制备得化合物4（4 mg，R＝37 min）；Fr. 1.3（11 g，70%乙醇）经MPLC，依次以40%、50%、60%、80%、100%甲醇梯度洗脱，得到5个洗脱部分（Fr. 1.3.1～1.3.5）。Fr. 1.3.4（2.5 g，80%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 1.3.4-12～1.3.4-15（160 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（70∶30）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物5（54 mg，R＝50 min）；Fr. 1.3.4-18～1.3.4-19（180 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（65∶35）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物6（7 mg，R＝29 min）、7（6 mg，R＝47 min）和8（7 mg，R＝93 min）。

Fr. 2（72 g，三氯甲烷-甲醇20∶1）经硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100∶1、50∶1、25∶1、15∶1、5∶1），经薄层色谱检测分为5个洗脱部分（Fr. 2.1～2.5）。Fr. 2.1（14 g，三氯甲烷-甲醇100∶1）经MPLC，依次以30%、40%、50%、65%、80%、100%甲醇梯度洗脱，得到6个洗脱部分（Fr. 2.1.1～2.1.6）。Fr. 2.1.1（2.4 g，30%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 2.1.1-8～2.1.1-9（120 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（45∶50）为流动相，体积流量为6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物9（8 mg，R＝22 min）和10（15 mg，R＝27 min）；Fr. 2.1.2（3.5 g，40%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，得到4个洗脱部分（Fr. 2.1.2.1～2.1.2.4），其中Fr. 2.1.2.3（80 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（55∶45）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物16（10 mg，R＝18 min）；Fr. 2.1.3（2.5 g，50%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 2.1.3-1～2.1.3-4（180 mg）经反相制备色谱，以乙腈-水（40∶60）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物19（12 mg，R＝28 min）；Fr. 2.1.4（2 g，65%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 2.1.4-7～2.1.4-8（120 mg）经反相制备色谱，以乙腈-水（45∶55）为流动相，体积流量为6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物13（4 mg，R＝35 min）和14（5 mg，R＝44 min）；Fr. 2.1.6（2 g，甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 2.1.6～2.1.11（50 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（65∶35）为流动相，体积流量为6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物11（18 mg，R＝78 min）；Fr. 2.1.6-15～2.1.6-16（30 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（65∶35）为流动相，体积流量为6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物1（14 mg，R＝52 min）；Fr. 2.2（10 g，三氯甲烷-甲醇50∶1）经MPLC，依次以60%、70%、90%甲醇梯度洗脱，得到3个洗脱部分（Fr. 2.2.1～2.2.3）。Fr. 2.2.1（2 g，60%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 2.2.1-3（65 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（40∶60）为流动相，体积流量为6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物17（15 mg，R＝15 min）；Fr. 2.2.2（2.2 g，70%甲醇）经凝胶柱色谱，以甲醇洗脱，其中Fr. 2.2.1-12（100 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（55∶45）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长制备得化合物18（20 mg，R＝38 min）；Fr. 2.3（12 g，三氯甲烷-甲醇25∶1）经MPLC，依次以60%、80%、100%甲醇梯度洗脱，得到3个洗脱部分（Fr. 2.3.1～2.3.3）。Fr. 2.3.1-5（200 mg）经反相制备色谱，以甲醇-水（40∶60）为流动相，体积流量6 mL/min，以230 nm作为UV检测波长二次制备得化合物12（12 mg，R＝8 min）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末，ESI-MS/: 285 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.03 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.11 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.87 (1H, s, H-3), 6.49 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 3.85 (3H, s, -OMe)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 182.1 (C-4), 163.3 (C-2), 162.2 (C-4′), 164.1 (C-7), 161.9 (C-5), 128.8 (C-2′, 6′), 115.0 (C-3′, 5′), 103.4 (C-3), 99.2 (C-6), 94.4 (C-8), 56.0 (-OMe)。以上数据与文献报道一致[6]，故鉴定化合物1为金合欢素。

化合物2：黄色粉末，ESI-MS/:273 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.13 (1H, s, 5-OH), 10.76 (1H, s, 7-OH), 9.56 (1H, s, 4′-OH), 7.29 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.77 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 5.86 (2H, brs, H-6, 8), 5.42 (1H, dd,= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 3.25 (1H, dd,= 17.2, 13.2 Hz, H-3ax), 2.26 (1H, dd,= 17.2, 2.4 Hz, H-3ex)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 196.9 (C-4), 167.1 (C-7), 163.9 (C-5), 163.4 (C-9), 158.2 (C-4′), 129.3 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 102.2 (C-10), 96.2 (C-6), 95.4 (C-8), 78.9 (C-2), 42.4 (C-3)。以上数据与文献报道一致[7]，故鉴定化合物2为柚皮素。

化合物3：黄色粉末；ESI-MS/:345 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.71 (1H, s, 5-OH), 8.00 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.11 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.54 (1H, s, H-3), 3.84 (3H, s, 8-OMe), 3.77 (3H, s, 4′-OMe), 3.73 (3H, s, 6-OMe)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 182.4 (C-4), 127.8 (C-2′, 6′), 114.6 (C-3′, 5′), 102.4 (C-3), 60.5 (8-OMe), 59.4 (6-OMe), 55.0 (4′-OMe)。以上数据与文献报道一致[8-9]，故鉴定化合物3为5,7-二羟基-6,8,4′-三甲氧基黄酮。

化合物4：黄色粉末；ESI-MS/: 287 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.75 (1H, s, 5-OH), 10.46, 9.78, 9.67 (各1H, brs, 7, 3′, 4′-OH), 7.70 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.67 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.97 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.87 (1H, s, H-3), 6.47 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.24 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 181.4 (C-4), 122.0 (C-6′), 116.0 (C-5′), 113.6 (C-2′), 103.8 (C-3), 99.2 (C-6), 94.5 (C-8)。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定化合物4为木犀草素。

化合物5：淡黄色固体；ESI-MS/:344 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.71 (1H, s, 5-OH), 10.74 (1H, s, 3-OH), 8.00 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.11 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.55 (1H, s, H-6), 3.84, 3.77, 3.74 (各3H, s, 3×OMe)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 178.7 (C-4), 161.8 (C-4′), 157.9 (C-7), 155.8 (C-5), 152.9 (C-2), 152.1 (C-9), 138.1 (C-3), 131.6 (C-8), 130.5 (C-1′), 122.7 (C-2′, 6′), 114.7 (C-3′, 5′), 105.2 (C-10), 94.5 (C-6), 60.5 (7-OMe), 60.2 (8-OMe), 55.9 (4′-OMe)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物5为草质素。

化合物6：浅黄色针状结晶（丙酮）；ESI-MS/: 255 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.82 (1H, s, 5-OH), 8.07 (2H, d,= 7.2 Hz, H-2′, 6′), 7.58 (3H, m, H-3′～5′), 6.96 (1H, s, H-3), 6.51(1H, d,= 1.2 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,= 1.2 Hz, H-6)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 182.3 (C-4), 165.3 (C-7), 163.6 (C-2), 161.9 (C-9), 158.0 (C-5), 132.5 (C-4′), 131.2 (C-1′), 129.6 (C-3′, 5′), 126.9 (C-2′, 6′), 105.6 (C-3), 104.3 (C-10), 99.6 (C-6), 94.6 (C-8)。以上数据与文献报道一致[12-13]，故鉴定化合物6为白杨素。

化合物7：淡黄色固体；ESI-MS/:287 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.12 (1H, s, 5-OH), 9.64 (1H, s, 7-OH), 7.32 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.10 (1H, s, H-6), 6.08 (1H, s, H-8), 5.48 (1H, d,= 12.8 Hz, H-2), 3.78 (3H, s, -OMe), 3.32 (1H, overlapped, H-3a), 2.72 (1H, dd,= 17.2, 2.4 Hz, H-3b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.0 (C-4), 167.4 (C-7), 163.2 (C-5), 162.8 (C-9), 157.8 (C-4′), 128.4 (C-2′, 6′), 126.5 (C-1′), 115.2 (C-3′, 5′), 102.6 (C-10), 94.7 (C-6), 93.8 (C-8), 78.6 (C-2), 55.9 (4′-OMe), 42.0 (C-3)。以上数据与文献报道一致[6]，故鉴定化合物7为异野樱素。

化合物8：黄色固体；ESI-MS/: 315 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.04 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.15 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.46 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,= 1.6 Hz, H-6), 3.88, 3.81 (各3H, s, -OMe)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物8为3,5-二羟基-4′,7-二甲氧基黄酮醇。

化合物9：黄色粉末；ESI-MS/: 449 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): 12.69 (1H, s, 5-OH), 7.33 (1H, brs, H-2′), 7.28 (1H, brd,= 8.5 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.42 (1H, brs, H-8), 6.24 (1H, brs, H-6), 5.28 (1H, brs, Rha-H-1), 4.00 (1H, brs, Rha-H-2), 3.51 (1H, brs, Rha-H-3), 3.24 (1H, m, Rha-H-5), 3.19 (1H, m, Rha-H-4), 0.84 (3H, d,= 6.0 Hz, Rha-Me)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 178.3 (C-4), 157.0 (C-2), 148.8 (C-4′), 145.6 (C-3′), 134.7 (C-3), 121.6 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.9 (C-2′), 101.7 (Rha-C-1), 98.6 (C-6), 93.5 (C-8), 17.9 (Rha-C-6)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物9为槲皮苷。

化合物10：黄色粉末；ESI-MS/: 465 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): 12.66 (1H, s, 5-OH), 10.88 (1H, s, 7-OH), 9.74 (1H, s, 3′-OH), 9.17 (1H, s, 4′-OH), 7.70 (1H, brd,= 8.0 Hz, H-6′), 7.55 (1H, brs, H-2′), 6.84 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.43 (1H, brs, H-8), 6.23 (1H, brs, H-6), 5.41 (1H, d,= 8.0 Hz, Glc-H-1), 3.68～3.33 (6H, m, Glc-H-2～6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 177.3 (C-4), 156.8 (C-2), 148.5 (C-4′), 145.0 (C-3′), 133.9 (C-3), 121.8 (C-6′), 116.3 (C-5′), 115.7 (C-2′), 100.7 (G-1), 98.5 (C-6), 93.4 (C-8), 61.2 (C-6)。以上数据与化合物10相比，二者黄酮母环的数据一致，最大的区别在于糖的差异。该数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物10为异槲皮苷。

化合物11：黄色粉末，ESI-MS/: 329 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.93 (1H, s, -OH), 8.07 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.02 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.55 (1H, brs, H-8), 6.49 (1H, brs, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 176.2 (C-4), 156.1 (C-4′), 147.1 (C-2), 136.0 (C-3), 129.4 (C-2′, 6′), 115.8 (C-3′, 5′), 98.5 (C-6), 93.8 (C-8)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物11为山柰酚。

化合物12：黄色粉末，ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.45, 10.73, 9.54, 9.31, 9.26 (各1H, s, 5×OH), 7.64 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2′), 7.50 (1H, dd,= 8.4, 2.0 Hz, H-6′), 6.84 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.36 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 6.15 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 176.3 (C-4), 164.3 (C-7), 161.2 (C-9), 156.6 (C-5), 148.1 (C-4′), 147.2 (C-2), 145.5 (C-3′), 136.2 (C-3), 122.4 (C-1′), 120.4 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.5 (C-2′), 103.5 (C-10), 98.6 (C-6), 93.8 (C-8)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物12为槲皮素。

化合物13：黄色油状物；HR-ESI-MS/:268.095 6 [M＋H]+（计算值268.089 5，C16H14NO3）；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.20 (1H, s, -OH), 7.84 (4H, m, H-4～7), 6.97 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.63 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 3.74 (2H, t,= 7.2 Hz, H-8′), 2.78 (2H, t,= 7.2 Hz, H-7′)；13C- NMR (150 MHz, DMSO-6): 168.1 (C-1, 3), 156.2 (C-4′), 134.8 (C-5, 6), 131.9 (C-4a, 7a), 129.9 (C-2′, 6′), 128.6 (C-1′), 123.4 (C-4, 7), 115.6 (C-3′, 5′), 40.5 (C-8′), 33.3 (C-7′)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物13为2-(4-羟基苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮。该化合物系首次从天然产物中分离获得，为1个新的天然产物。

化合物14：白色粉末，ESI-MS/: 190 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.04 (1H, s, H-2), 7.98 (1H, d,= 7.6 Hz, H-7), 7.46 (1H, d,= 7.6 Hz, H-4), 7.17 (2H, m, H-5, 6), 4.26 (2H, q,= 6.8 Hz, H-1′), 1.32 (3H, t,= 6.8 Hz, H-2′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 164.9 (C=O), 136.8 (C-2), 132.9 (C-7a), 126.1 (C-4a), 122.8 (C-4), 121.7 (C-6), 120.9 (C-5), 112.8 (C-7), 107.1 (C-3), 59.4 (C-1′), 15.0 (C-2′)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物14为吲哚-3-甲酸乙酯。

化合物15：淡黄色粉末，ESI-MS/:187 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 11.57 (1H, s, 9-NH), 7.58 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 7.55 (1H, s, 2-NH), 7.38 (1H, d,= 8.4 Hz, H-8), 7.21 (1H, t,= 7.6 Hz, H-7), 7.05 (1H, t,= 8.0 Hz, H-6), 3.50 (2H, t,= 6.8 Hz, H-3), 2.92 (2H, t,= 6.8 Hz, H-4)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 162.3 (C-1), 137.5 (C-8a), 127.7 (C-9a), 125.4 (C-4b), 124.5 (C-7), 120.6 (C-6), 119.8 (C-4a), 118.6 (C-5), 112.9 (C-8), 41.6 (C-3), 20.8 (C-4)。以上数据结合HMBC实验，与文献报道一致[20]，故鉴定化合物15为1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-1-酮。

化合物16：黄色粉末；ESI-MS/: 146 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 9.92 (1H, d,= 0.8 Hz, -CHO), 8.26 (1H, d,= 1.2 Hz, H-2), 8.07 (1H, d,= 7.6 Hz, H-4), 7.49 (1H, d,= 7.6 Hz, H-7), 7.24 (1H, t,= 6.4 Hz, H-6), 7.20 (1H, t,= 6.4 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 185.4 (-CHO), 138.9 (C-2), 137.5 (C-7a), 124.6 (C-3a), 123.9 (C-6), 122.6 (C-5), 121.3 (C-4), 118.6 (C-3), 112.9 (C-7)。以上数据与文献报道一致[21]，故鉴定化合物16为3-醛基吲哚。

化合物17：白色粉末，ESI-MS/: 220 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.79 (1H, s, 8-OH), 8.75 (1H, s, 9-OH), 6.49 (1H, s, H-10), 6.48 (1H, s, H-7), 4.57 (1H, t,= 8.0 Hz, H-10b), 3.94 (1H, m, H-5a), 2.89 (1H, m, H-5b), 2.58 (2H, m, H-6), 2.57 (1H, m, H-1a), 2.38 (1H, m, H-2a), 2.19 (1H, m, H-2b), 1.57 (1H, m, H-1b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 172.0 (C-3), 144.2 (C-8), 144.0 (C-9), 128.4 (C-10a), 123.7 (C-6a), 115.4 (C-7), 111.6 (C-10), 55.5 (C-10b), 36.6 (C-5), 31.2 (C-2), 27.4 (C-6), 27.3 (C-1)。以上数据与文献报道一致[22]，故鉴定化合物17为马齿苋酰胺E。

化合物18：黄色粉末，HR-ESI-MS/:356.114 1 [M＋H]+（计算值355.105 6，C19H17NO6）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6):12.75 (1H, s, 5-OH), 7.49 (1H, s, -NH), 7.31 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.80 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 5.94 (1H, s, H-8), 5.43 (1H, dd,= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 5.07 (1H, dd,= 9.2, 5.2 Hz, H-5′′), 3.25 (1H, m, H-3a), 2.71 (1H, dd,= 17.2, 2.0 Hz, H-3b), 2.17 (2H, m, H-4′′), 2.05 (2H, m, H-3′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.4 (C-4), 177.3 (C-2′′), 165.8 (C-7), 162.0 (C-5), 161.9 (C-9), 158.2 (C-4′), 129.3 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 109.3 (C-6), 101.7 (C-10), 95.2 (C-8), 78.8 (C-2), 46.8 (C-5′′), 42.2 (C-3), 30.9 (C-3′′), 25.8 (C-4′′)。以上数据与文献报道一致[23]，故鉴定化合物18为青兰素。

化合物19：白色粉末，ESI-MS/: 256 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.16 (1H, d,= 8.0 Hz, H-4′), 7.78 (2H, d,= 7.6 Hz, H-2′, 6′), 7.49 (1H, t,= 7.2 Hz, H-4′′), 7.43 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′, 5′), 7.26～7.15 (4H, m, H-2′′, 3′′, 5′′, 6′′), 4.15 (1H, m, H-2), 3.50 (1H, dd,= 10.8, 5.6 Hz, H-1a), 3.42 (1H, dd,= 10.4, 6.4 Hz, H-1b), 2.95 (1H, dd,= 13.6, 5.2 Hz, H-3a), 2.78 (1H, dd,= 13.6, 9.2 Hz, H-3b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 166.4 (C=O), 139.9 (C-1′), 135.2 (C-1′′), 131.4 (C-4′), 129.5 (C-4′′), 128.6 (C-3′, 5′), 128.5 (C-3′′, 5′′), 127.7 (C-2′′, 6′′), 126.3 (C-2′, 6′), 63.4 (C-1), 53.7 (C-2), 36.9 (C-3)。以上数据与文献报道一致[24]，故鉴定化合物19为-苯甲酰--苯丙氨酸。

4 体外细胞毒活性的筛选

采用MTT法及文献实验方法[25]，以紫杉醇和1-羟基-2-甲氧基-12-甲基-[1,3]二氧并[4',5':4,5]苯并[1,2-]菲啶-12-盐酸盐（NK109）[26]为阳性对照药，测定了化合物1～19对5种人癌细胞的细胞毒活性。结果表明，化合物2、3和5具有抑制HCT-116、HepG2、BGC-823、NCI-H1650和A2780肿瘤细胞株增殖的作用，化合物2的半数抑制浓度（IC50）值分别为2.22、2.45、2.45、2.20、1.00 μmol/L；化合物3的IC50值分别为0.84、1.23、0.90、0.88、0.65 μmol/L；化合物5的IC50值分别为3.87、3.96、7.61、4.14、2.87 μmol/L。阳性对照药紫杉醇的IC50值分别为0.000 2、0.007 6、0.000 6、＞1和0.020 4 μmol/L，NK109的IC50值分别为3.94、1.19、1.84、1.75和0.90 μmol/L。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Chemical constituents from flowers of

LI Qian

Henan Province Engineering Research Center for Food Safety Control of Processing and Circulation, College of Food Science and Technology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China

To investigate the chemical constituents from the flowers of.The compounds were isolated and purified by various column chromatographies, and their structures were identified by physiochemical properties and spectroscopic data. MTT assay was used to detect the cytotoxic activity of the compounds.Ninteen compounds were isolated from the EtOH extract of the flowers of, which were identified as acacetin (1), naringenin (2), 5,7-dihydroxy-6,8,4′-dimethoxyflavone (3), luteolin (4), herbacetin (5), chrysin (6), isosakuranetin (7), 3,5-dihydroxy-4′,7- dimethoxyflavone (8), quercitrin (9), isoquercitrin (10), kaempferol (11), quercetin (12), 2-(4-hydroxyphenethyl) isoindoline-1,3-dione (13), 1-indole-3-carboxylic acid-ethyl ester (14), 1,2,3,4-tetrahydronorharman-1-one (15), 1-indole-3- carbaldehyde (16), oleracein E (17), dracocephin C (18),-benzoyl--phenylalanine (19).All compounds were isolated from this genus for the first time except for compounds 4, 9—12. Compounds 2, 3 and 5 exhibited significantgrowth inhibitory activity against the HCT-116, HepG2, BGC-823, NCI-H1650, and A2780 cancer cell lines.

flowers of; flavones; alkaloids; anticancer; 2-(4-hydroxyphenethyl) isoindoline-1,3-dione; naringenin;5,7-dihydroxy-6,8,4′-dimethoxyflavone; herbacetin

R284.1

A

0253 - 2670(2021)24 - 7413 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.24.002

2021-03-25

河南农业大学科技创新基金资助项目（KJCX2021A19）

李 倩，女，博士，讲师，从事天然产物活性成分研究。E-mail: lgql1991@163.com

[责任编辑 王文倩]