脐灸联合穴位贴敷治疗阴性体质高血压病人血清microRNA-92a水平的变化

徐永娟，苏稼航，迟荣香，吕曙光

高血压是常见的心血管疾病之一，以动脉血压增高为基本特征，易损伤诸多靶器官，如心、肾、脑等，是影响现代人生活质量的主要因素[1-3]。该疾病发生、发展与高盐膳食、肥胖及饮食等诸多因素相关，目前，学术界比较认可的致病机制包括内分泌学说、肾素-血管紧张素-醛固酮学说、遗传学说等[4-5]。中医学认为，高血压疾病病理因素涉及虚、火、风、痰等，造成三脏(脾、肝、肾)功能失常，阴阳失衡。中医体质辨识，将高血压病人分为阴性体质及阳性体质。目前，临床治疗阴性体质高血压病人常以药物为主，虽可取得一定降压效果，但缺乏一种预测治疗效果的生物学标志物[6-7]。临床研究发现，炎性因子、内皮因子等均参与高血压疾病的发生过程，但白细胞计数(WBC)、同型半胱氨酸(Hcy)等标志物的灵敏度及特异度较低，而microRNA-92a是一种在内皮细胞特异性高表达的微小RNA，且与动脉粥样硬化、炎症反应及内皮功能障碍紧密联系，影响心血管疾病的预后[8]。目前，临床上已有关于血清microRNA-92a与高血压病人大动脉僵硬度关系的研究，但将血清microRNA-92a用于评估高血压治疗效果的研究并不多见。鉴于此，本研究监测纳入的100例阴性体质高血压病人血清microRNA-92a、WBC及Hcy的表达，并分析三者与脐灸联合穴位贴敷治疗阴性体质高血压病人血压控制效果的相关性，以判断血清microRNA-92a、WBC及Hcy水平是否可以作为血压控制水平的预测指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2017年9月—2018年12月就诊于我院的100例阴性体质高血压病人的临床资料，其中男55例，女45例；年龄51～65(56.75±5.13)岁；病程1～7(4.32±1.25)年；中医辨证分型：痰湿内阻证21例，肾精不足证28例，气血两虚证37例，冲任失调证14例。根据治疗后血压控制水平将病人分为4组：A组[血压<120/80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，20例]、B组[血压(120～139)/(80～89)mmHg，27例]、C组[血压(140～159)/(90～99)mmHg，45例]、D组(血压≥160/100 mmHg，8例)。本研究符合我院医学伦理委员会制定的标准。

1.2 诊断标准 西医诊断标准：符合《中国高血压基层管理指南》[9]中高血压诊治标准。中医诊断标准：符合《高血压中医诊疗指南》[10]中阴性体质辨证标准。①气血两虚，主证：口干心烦、眩晕时作、短气乏力，次证：纳呆、面白、心悸失眠、腹胀便溏；②痰湿内阻，主证：头重如裹，次证：少食多寐、呕吐痰涎、胸脘痞闷，舌脉：脉细、舌淡；③肾精不足，主证：耳鸣腰酸、心烦不寐，次证：失眠梦遗、心悸健忘等，舌脉：脉细数、舌红；④冲任失调，主证：妇女更年期前后或月经来潮时出现头痛、头晕，次证：心烦、失眠，舌脉：舌淡，脉弦细。

1.3 纳入与排除标准 纳入标准：①符合中西医诊断标准且为阴性体质者；②年龄18～80岁；③对本研究用药无过敏者；④治疗依从性较高；⑤临床资料完整。排除标准：①哺乳期、妊娠期女性；②存在继发性高血压者；③伴有严重肝肾功能衰竭、心肺疾病及重度糖尿病者；④严重认知功能障碍。

1.4 治疗方法 100例阴性体质高血压病人均接受脐灸联合穴位贴敷治疗。①脐灸。将茯苓、吴茱萸、肉豆蔻、五味子、补骨脂及白术等药方根据比例混合后并粉碎，密封备用。病人取仰卧位，将脐部充分暴露、消毒，用温开水将上述粉状物调制成上窄下宽圈状，内径等于脐部直径，于脐部处填满药末并抹匀，将大艾柱置于药末上，施灸10壮，时间维持在90 min。灸后保留脐部药末，借助无纺布敷贴固封神阙穴处，4 h后揭下。每日1次，连续治疗2周。②穴位贴敷。按照比例混合补骨脂、熟附块、吴茱萸、桑寄生、丁香、淫羊藿、麻黄、肉桂等药方，并超微粉碎，密封备用。在贴敷期间，取适量药末姜汁调制成稠糊状，制作成锥状药饼(直径为20 mm)。将涌泉、内关、三阴交3个穴位充分暴露、消毒，于无纺布(规格：60 mm×70 mm)中央处，将锥状药置入，并固定于穴位上，保留4～6 h，每日1次，连续治疗2周。

1.5 观察指标 ①血清microRNA-92a。于治疗2周后，根据Trizol试剂盒说明书，提取血浆总RNA，并检测RNA提取液的OD260吸光光度值，计算其纯度及浓度，通过琼脂糖凝胶电泳法对RNA完整性进行测定，通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定microRNA-92a的表达，并用CT值计算相对microRNA-92a表达水平，U6 snRNA为内参。microRNA-92a引物序列：5′-TATTGCACTTGTCCCGGCCTG-3′。②WBC及Hcy水平。于治疗2周后，采集病人3 mL空腹肘静脉血，3 000 r/min离心(半径为6 cm，离心10 min)，采用日本东芝生产的TBA-120FR全自动生化分析仪测定WBC及Hcy水平。

1.6 统计学处理 应用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理。符合正态分布的定量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析检验，组间两两比较采用SNK-q检验，经双变量Pearson直线相关性检验血清指标与血压之间的相关性，根据曲线下面积(AUC)检验各血清指标与血压的评估价值，AUC≤0.5无诊断价值，>0.5且<0.7诊断价值较低，0.7～0.9诊断价值中等，>0.9诊断价值高。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 4组临床资料比较 4组性别、年龄、病程及中医辨证分型比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 4组临床资料比较

2.2 4组血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平比较 microRNA-92a、WBC、Hcy水平比较，D组>C组>B组>A组，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 4组血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平比较 (x±s)

2.3 血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平与血压的相关性分析 双变量直线相关性检验结果显示，血清microRNA-92a、WBC、Hcy与血压呈正相关(P<0.05)。详见表3。

表3 血清microRNA-92a、WBC、Hcy与血压的相关性分析

2.4 ROC曲线检验各血清指标与血压水平的评估价值 将阴性体质高血压作为状态变量，将各血清指标与血压水平作为检验变量，得到ROC曲线，结果显示，血清WBC、Hcy预测阴性体质高血压病人血压控制水平的AUC分别为0.572，0.668，预测价值较低；而microRNA-92a预测阴性体质高血压病人血压控制水平的AUC为0.781，预测价值理想。详见表4、图1。

表4 ROC曲线结果

图1 血清WBC、Hcy、microRNA-92a预测阴性体质高血压病人血压控制水平的ROC曲线图

3 讨 论

高血压是诸多心血管疾病的高危因素，可导致平滑肌细胞及血管内皮细胞受到机械性损伤，增加血管壁通透性，进而激活凝血机制，导致管腔狭窄及血管壁增厚，提高动脉粥样硬化敏感度[11]。高血压属于中医学“眩晕”“头痛”范畴，头窍为其病位，其主要发病机制为阴虚阳亢，致使气血失衡以及火、虚、风等病理因素的发生[12]。《黄帝内经》中记载“诸风掉眩，皆属于肝”“肾虚则头重高摇，髓海不足则脑转耳鸣”，认为高血压与肝、肾等脏器病变有紧密关联，需将阴阳调节平衡，使经气运行正常，可有效控制高血压症状，使病情缓解。

中药穴位贴敷是一种经济便捷、操作简单的中医外治方法，以经络学说为主要指导方法，将药物贴敷在主要穴位上，药物吸收发挥作用，调节阴阳使其平衡，进而达到治疗疾病的目的。本研究采用吴茱萸、补骨脂、肉桂、淫羊藿、桑寄生、丁香等药物进行穴位贴敷及脐灸，其中吴茱萸可发挥止痛散寒、疏肝理气的功效；补骨脂具有补肾补脾、壮阳健胃的功效；肉桂则有补火助阳、引火归元之功效，可治肾虚作喘、眩晕目赤等症；淫羊藿、丁香具有补肝助阳、强健筋骨之功效；桑寄生有补肝肾的功效。且现代医学证实，在涌泉穴贴敷吴茱萸等药可降低细小动脉的外周阻力，在一定程度上可降低血压[13-15]。本研究结果发现，脐灸联合穴位贴敷治疗阴性体质高血压病人的疗效明显，可有效控制其血压水平。但目前临床上仍缺乏一种高效预测治疗效果的生物学标志物。因此，客观、准确地评估高血压病人病情，对指导早期合理治疗、评估预后均有重要意义，也是改善病人预后的关键所在。

高血压以原发性多见，具体发病机制尚未完全阐明，近年来研究报道microRNA与高血压发生、发展密切相关，可能通过影响肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)激活及胰岛素抵抗、神经、血管等而进行血压的调控[16]。microRNA属于一种高度保守及内源性的非编码RNA，一般由19～25个核苷酸构成，经阻碍靶基因转录后翻译参与细胞生理及病理过程，如增殖、分化、凋亡及免疫反应、机体代谢等。临床研究证实，在心肌梗死、糖尿病及肿瘤等诸多病人中，血清microRNA表达呈特异性，可见该指标可成为诊治、病情监测及判断预后的一项新型生物标记物[17]。microRNA-92a是一种可以对内皮细胞生长、迁徙、凋亡进行控制的microRNA，在体内诸多组织器官生长及发展调控中均具有重要意义，当病人血管内皮功能受到损伤时，血浆中microRNA-92a含量明显上升，缺乏microRNA-92a基因将减弱组织及细胞的增生修复能力[18]。本研究中，血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平比较，D组>C组>B组>A组，且均与血压水平呈正相关，进一步绘制ROC曲线进行预测价值分析，结果发现，microRNA-92a的AUC>0.7，而WBC、Hcy的AUC分别为0.572，0.668，可见，相比WBC、Hcy，microRNA-92a预测血压控制水平的价值理想，对指导高血压病人病情评估、临床治疗等均有较高的应用价值。microRNA-92a与高血压的作用机制体现在以下几点：①microRNA-92a与激素。高血压发病的经典途径为RAAS的激活，而microRNA-92a可经诸多途径对血压水平产生间接或直接影响，且与RAAS的过度激活相关[19]。②microRNA-92a与血管。在高血压的发生、发展过程中，血管平滑肌的迁移扩散及不同表型均发挥重要作用，而microRNA-92a有助于降低血管平滑肌的迁移及增殖。体内及体外研究发现，在血管系统及内皮细胞中，microRNA-92a呈高度表达，可损伤血管生成[20]。胎肝激酶-1、血管性血友病因子及内皮型一氧化氮合酶等均为microRNA-92a的靶基因，其可通过对上述靶基因进行靶向调节，进而影响内皮细胞功能。此外，高浓度葡萄糖、血管紧张素Ⅱ等均可增加microRNA-92a的表达，其通过作用于靶基因，进而激活内皮细胞炎症小体，加重内皮细胞炎症反应，促进动脉粥样硬化病变的发展[21]。

综上所述，血清microRNA-92a、WBC、Hcy水平与脐灸联合穴位贴敷治疗后阴性体质高血压病人的血压控制水平密切相关，其中microRNA-92a用于临床评估治疗效果的准确度较高，可考虑将其作为疗效评估的血清标志物。