瓜蒌当归降脂颗粒质量标准研究*

2021-04-08朱建勇顾伟鹰时扣荣张春燕

中国药业 2021年6期

李媛，朱建勇，顾伟鹰，时扣荣，刘娟，张春燕，罗兰

（上海中医药大学附属第七人民医院，上海 200137）

瓜蒌当归降脂方由当归、瓜蒌、泽泻、决明子、山楂5 味中药组方，为上海市名老中医叶景华教授的经验方，临床应用20 余年，对高脂血症有显著疗效。其临床应用剂型为汤剂，保质期短，口感欠佳，服用不便，且不便于贮存和运输。运用现代技术将其剂型由汤剂改为颗粒剂，对于该方的临床应用有积极意义。本研究中采用薄层色谱（TLC）法对制剂中当归、决明子、山楂进行定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法测定阿魏酸及橙黄决明素的含量，为建立瓜蒌当归降脂颗粒的质量标准提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国Agilent 公司）；BD-Ⅱ型多功能紫外分析仪（北京启航博达有限公司）；CP225D 型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；DL720-A 型超声清洗仪（上海之信仪器有限公司）；HWS28 型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；SHZ-DⅢ型循环水式真空泵（郑州博科设备有限公司）；DNG-9140A 型电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；RV-10 型旋转蒸发仪（德国IKA公司）。

1.2 试药

瓜蒌当归降脂颗粒（医院制剂，批号分别为20190901，20190902，20190903）；熊果酸对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号为L03A6Y1，含量≥98%）；阿魏酸对照品（批号为110773-201614，含量≥98%），橙黄决明素对照品（批号为111900-201605，含量≥98%），大黄酚（批号为110796-201922，含量≥98%），均购于中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水；瓜蒌、当归、泽泻、决明子、山楂药材均购于上海康桥药业有限公司，经上海市第七人民医院药剂科副主任中药师公丕君鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

决明子［1-3］：取样品 10 g，加水 100 mL，超声（功率600 W，频率 40 kHz，下同）处理30 min，滤过，取续滤液50 mL，加入盐酸1 mL，用50 mL 水饱和正丁醇振摇提取2 次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液。取橙黄决明素、大黄酚对照品各适量，加无水乙醇 -乙酸乙酯（2 ∶1，V ／ V），制成质量浓度均为1 mg／mL 的单一对照品溶液。按瓜蒌当归降脂颗粒处方工艺制备缺决明子的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。按2015 年版《中国药典（一部）》通则0502 项下方法试验，分别取上述4 种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶 GF254薄层板上，以石油醚 - 丙酮（2 ∶1，V ／ V）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 A。

当归［4-5］：取样品 10 g，加水 100 mL，超声处理 30 min，滤过，取续滤液50 mL，加入盐酸1 mL，用100 mL 二氯甲烷振摇提取2 次，合并萃取液，蒸干，残渣加1 mL 甲醇使溶解，作为供试品溶液。取阿魏酸对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg／mL 的对照品溶液。按瓜蒌当归降脂颗粒处方工艺制备缺当归的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。按2015 年版《中国药典（一部）》通则0502 项下方法试验，分别取上述3 种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯 - 甲酸（4 ∶2 ∶2 ∶0.1，V ／ V ／ V ／ V）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。

山楂［6-8］：取样品 10 g，加水 100 mL，超声处理30 min，滤过，取续滤液50 mL，用石油醚振摇提取2 次，每次100 mL，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液。取熊果酸对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg／mL 的对照品溶液。按瓜蒌当归降脂颗粒处方工艺制备缺山楂的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。按2015 年版《中国药典（一部）》通则0502 项下方法试验，分别取上述3 种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶 GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20 ∶4 ∶0.5，V ／ V ／ V）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下及紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 C。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件［9-14］

色谱柱：Agligent C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1%磷酸溶液（A）-甲醇（B），梯度洗脱（洗脱程序见表 1）；流速：1.0 mL ／min；检测波长：284 nm；进样量：10 μL；柱温：25 ℃。

表1 流动相梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution programs of the mobile phase

2.2.2 溶液制备

精密称取阿魏酸、橙黄决明素对照品各适量，加50%甲醇溶解，制成阿魏酸、橙黄决明素质量浓度分别为10，20 μg ／mL 的混合对照品溶液。取样品约 1.5 g，精密称定，加入50%甲醇25 mL，超声处理10 min，放冷至室温，补足减少的体积，经0.45 mm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按瓜蒌当归降脂颗粒处方工艺制备缺当归、决明子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：取 2.2.2 项下 3 种溶液各适量，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图 2。结果显示，阴性对照品溶液在与阿魏酸、橙黄决明素对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。

线性关系考察：分别精密量取2.2.2 项下混合对照品溶液 1，2.5，5，10，15，20 μL，按 2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分进样量（X，μL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得阿魏酸、橙黄决明素回归方程 Y1＝1 638.542 6X1+1.415 6（r1＝0.999 7），Y2＝ 819.271 3 X2+1.415 6（r2＝ 0.999 7）。结果，阿魏酸、橙黄决明素进样量分别在 0.01 ～0.20 μg和 0.02 ～ 0.40 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2.2 项下混合对照品溶液适量，按2.2.1 项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果阿魏酸、橙黄决明素峰面积的 RSD 分别为0.25%和 0.50%（n ＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2.2 项下供试品溶液适量，分别于室温下放置 0，2，10，18，24 h 时按 2.2.1 项下色谱条件进样测定。结果，阿魏酸、橙黄决明素峰面积的 RSD分别为 1.92%和 0.99%（n ＝ 5），表明供试品溶液在室温放置24 h 内基本稳定。

重复性试验：称取样品（批号为20190901）适量，精密称定，按 2.2.2 项下方法制备供试品溶液，再按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果阿魏酸、橙黄决明素平均含量分别为1.67%和6.09% ，RSD 分别为 0.37% 和 0.34% （n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为20190901）适量，共6 份，分别加入一定质量浓度的对照品溶液，按 2.2.2 项下方法制备供试品溶液，再按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n ＝6）Tab.2 Results of recovery tests（n ＝ 6）

2.2.4 样品含量测定

取3 批样品各适量，分别按2.2.2 项下方法制备供试品溶液，再按2.2.1 项下色谱条件进样测定，平行测定3 次，记录峰面积，并计算样品含量。结果见表3。

3 讨论

本研究中当归、决明子、山楂的TLC 鉴别主要参考2015 年版《中国药典（一部）》的方法［15］。当归的 TLC鉴别中，药典采用乙醚提取当归药材中的阿魏酸，在样品的制备过程中考虑到安全性及阿魏酸的物理性质，先用盐酸调酸性，再用二氯甲烷分步萃取，作为供试品溶液。药典以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4 ∶1 ∶1 ∶0.1，V ／ V ／ V ／ V）为展开剂，本研究中采用应用范围较广的石油醚代替环己烷，并将比例调整为4 ∶2 ∶2 ∶0.1（ V ／ V ／ V ／ V），荧光斑点显色清晰，分离度效果较好。决明子的TLC 鉴别中，药典采用乙醚提取，后以三氯甲烷溶解。鉴于2 种试剂的安全性差，以及结合橙黄决明素的物理性质，本研究中采用正丁醇提取，制备供试品溶液，结果表明该制备方法可行，效果良好。山楂的TLC 鉴别中，预试验中分别用乙酸乙酯和石油醚萃取，前者干扰杂质较多不易分离，而采用石油醚萃取后制备供试品溶液，效果较好。