酶标仪检测技术应用分析

张国斌 沈阳市疾病预防控制中心 （辽宁 沈阳 110032）

内容提要：目的：分析酶标仪检测技术在血液样本检验中的应用价值。方法：依照临床中化学检验操作规程，设计出与之相对应的工作程序。创建从采集血液、测定直至打印结果全部流程，探究酶标仪检测技术在血液样本检验中的应用价值。结果：在相关样本病毒活性增加到160KU之后，检测结果表现出非线性关系。在此刻应用等渗盐水把样本稀释处理再行检测。在10～90min，稳定性较强。在显色10min之后开展比色工作较为理想。血清样本批间CV为6.91%、5.62%以及5.11%，批内CV具体为4.51%、4.92%以及4.21%。标本回收率为93.41%、97.66%以及102.02%，回收率均值为97.61%。结论：在开展血液样本检验过程之中，利用酶标仪加以测定，能够取得满意成效。此法有着用时短、方便、简单、精准性高、稳定性强、进样微量等优点。可在根本上提升诊断效率，减少检验成本。

梅毒以及艾滋病在临床中较为常见。上述两类疾病均以性传播为主要途径。在患者发病之后，倘若未能在第一时间为其开展行之有效的治疗，不但会诱发其他种类疾病，如果情况严重还会威胁受试者生命安全。

全自动生化分析设备于临床检验中得以广泛应用[1]。这种检验方法效果显著，能够实现微量、快速分析。但值得注意的是，此类方式针对于设备的要求偏高，以当前水平来看，其在中国基础医院推广尚有难度。现如今，酶标仪于血液检验中取得了广泛应用[2]。这种方法有着效果精准、出具结果快速、微量等优点，可在一定程度上提升血液检验工作效率，结合实际情况，本文全面探究酶标仪检测技术在血液检验中的应用价值情况，现报告如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

本实验所使用的仪器为DG-3022A型酶标仪、规格为0.2mL聚苯乙烯离心管以及酶标板、RA-XT全自动生化分析设备、微量加样器、edp-2自动加样器与SLT400SF酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 实验准备

工作人员结合相关要求，把SLT400SF酶标仪编制为符合要求的程序。利用编制好程序分析光度值以及测定值，对其加以打印。在此同时，DG-3022A型酶标仪设备应当依照实验测定的具体内容有效校准波长，开展比色测定工作。朝向实现择取的酶标仪内加入到空白试剂，于酶标仪上实施比色。针对于各个孔的吸光度值进行打印。对于1edp-2自动加样器以及微量加样器进行校准处理。在根本上确保加样器的变异系数在1%以下，准确度误差在±1%以下。

1.2.2 血液样本收集方式

本实验所需要的血液样本量较小。通常需要在受试者的手指、耳垂等末梢位置，以常规方法采血，即可完成血液收集工作。后利用微量吸管吸住血液，并将血样本放入到规格为0.2mL离心管之内。等到血液样本完全凝固以后，开展离心工作，时间为5min，速率设定为3000r/min。将酶标本A1、A2视为空白对照组，A3以及A4视为标准孔。每个标准孔均属双控。剩余孔视为测量孔。测定总量设定为300μL。有关操作步骤以及程序应当严格遵守试剂盒以及仪器中的指南予以执行。

2.结果

2.1 线性范围

利用等渗盐水，将活性度高的艾滋病与梅毒血清样本视为试验标本。对其线性范围测定。结果表明：在相关样本病毒活性增加到160KU之后，检测结果表现出非线性关系。在此刻应用等渗盐水把样本稀释处理再行检测。

2.2 稳定性实验

选择一份血清样本测定艾滋病以及梅毒生成量情况。将其加入到浓度为0.4mmol/L NaOH显色处理，之后于不同的时间点开展比色工作。具体为5min、10min、15min、30min、60min、90min以及120min。结果表明：在10～90min，稳定性较强。在显色10min之后开展比色工作较为理想。

2.3 精密度测定

为了在根本上确保设备于血液检验过程中具有针对性。本实验利用艾滋病以及梅毒视为样本，抽取共计3份血清。利用该法实施批间以及批内重复试验。结果证实：批间CV为6.91%、5.62%以及5.11%，批内CV具体为4.51%、4.92%以及4.21%。

2.4 回收率

于共计3个已然被确定为艾滋病以及梅毒单位的血清内加入艾滋病病毒以及梅毒病毒。经混合之后依照艾滋病以及梅毒的检验方法完成测定工作。结果证实：标本回收率为93.41%、97.66%以及102.02%，回收率均值为97.61%。

3.讨论

早在上世纪70年代初，酶联吸附免疫实验就已出台。这种方法主要以酶免疫组织化学基础上发展而成。现如今，在我国血站临床实验室工作之中酶联免疫吸附试验医院成为了重要的免疫测定技术之一。因为绝大多数ELISA最终都要实施比色测定，这也令酶标仪成为了ELISA测定的主要工具[3]。

酶标仪和变相光电比色计以及分光光度计差异并不大。酶标仪和其余几种设备的运行原理以及构造基本相同。其主要经过单色器光源灯或者滤光片所发出的光波生成单色光，就此进入到微孔板内待测样本。在进行测定工作中，有一部分带色光被样本完全吸收、而另一部分则透过样本返回到光电检测设备之内。酶标仪可以将强度不一的穿透光信号转变为电信号，后经电信号处理录入到电脑之中，开展数据分析计算处理工作[4]。经由打印机输出结果。于计算机的精力控制之下，酶标仪能够实现自动基因检测[5]。利用电路控制机械驱动结构Y方向以及X方向运动，最终实现背孔板移动。其余的酶标仪检测微孔板则通过手工法完成移动。其在一定程度上节省了X方向以及Y方向机械驱动以及控制电路过程，进而令设备实现简化。

本组实验研究结果证实：以酶标仪精密比色系统和相关设备软件为基础，加上一些较为简单的附件。结合具体的项目检验程序，参照中国现行临床检验操作方式，按照相关比例缩小处理，最终形成了采血检测直至打印结果的整体工作流程。

在本次实验内：为了在根本上确保酶标仪与血液样本检验中的针对性，将艾滋病以及梅毒为例子，分别择取血清利用本法开展批间以及批内重复试验。在此其中，批间CV为6.91%、5.62%以及5.11%，批内CV具体为4.51%、4.92%以及4.21%。

另外，在本实验中利用了等渗盐水将活性度高的艾滋病、梅毒血清视为样本。对具体的线性范围进行测定分析。结果表明：在病毒活性提高到160KU之后，检测结果表现出非线性关系。在此刻应利用等渗盐水稀释样本以后再行检测。

值得说明的是：酶标仪能够实现一机多用。其既可以进行多类化学检验、也可以进行免疫学检验。其有着试剂应用量少、微量采血、测试稳定等特征。在本实验内，针对于已经确定为艾滋病、梅毒单位的血清内加入了艾滋病和梅毒病毒，后依照具体的方法完成测定。结果证实：标本回收率为93.41%、97.66%以及102.02%，回收率均值为97.61%。

从酶标仪与比色法于血清三酰甘油以及胆固醇检测中的应用方面来看，主要为：总胆固醇以及血清三酰甘油的诊断方式可以被分为酶法、化学法以及色谱法。化学法的技术含量比较高，这种检验方式操作复杂，针对于仪器设备要求相当高。从现阶段而言，将此类方式在临床中广泛应用比较困难；色谱法与参照物质准确制备过程中有着比较高的应用价值。但不容忽视的是，色谱法样本处理步骤相当复杂且检测费用昂贵，这也在一定程度上限制了色谱法的普及。现如今，临床对于血清总胆固醇以及血清三酰甘油一般应用酶法实现检测。这种检测方法的优势在于精准度高、特异性强、简单方便。酶标仪比色法测定又被分成全自动法、半自动化和手工法三类。相对而言，手工法的检测成本比较高。且在开展该项实验过程中，需要使用很多试剂。自动化以及半自动化针对仪器设备要求较高，其在基层医院内普及起来比较困难。有文献证实：酶标仪比色法测定血清内总胆固醇以及三酰甘油所取得的精度和全自动生化设备检测精度基本相同。应用上述方法所取得的结果都在CLIA'88所允许的范畴之中。

有文献分析了酶标仪于细菌溶液浓度检测中的应用价值。其指出：细菌溶液浓度测定针对微生物酵解过程之中控制工艺来讲意义重大[6]。以往所使用的细菌溶液浓度检测方式包含平板计数法、血球计数法、比浊法等。这些方法的工作量比较重，误差精度比较低，很难取得实时检测的根本性要求。而分光光度法测定细菌容易浓度水平有着精准度强、操作简单等优势。因而其在实际工作中在广泛应用。但不容忽视的是，这种检测方法也有着耗费时间长、操作繁琐等不良问题。酶标仪测定细菌溶液浓度水平的原理和分光光度法这原理相差不大。以上方式均有着检验结果精准度高、操作简单等优点。另外值得说明的是：酶标仪检测法能够实现大批量操作。因而在根本上提升了细菌溶液浓度的检测效率水平。另有文献全面分析了大肠杆菌在发酵时分光光度法与酶标仪分别测定菌液浓度的结果情况，表明以上两类方式有着一致的检测精度水平。但和分光光度法相比，酶标仪法能够单次处理多个样本。应用此法开展检测工作，可以在很大程度上提升检验人员的工作效率水平[7]。

从酶联免疫吸附法应用于梅毒检验中的情况来看，主要为：现如今在我国临床中开展梅毒检验时，一般应用酶联免疫吸附法完成该项工作。经此法开展检验可取得满意效果。有实验择取共计500例梅毒样本视为研究对象。分别为其实施甲苯胺红非加热血清实验以及酶联免疫吸附法实验。结果表明：相较于甲苯胺红不加热血清实验所得出的结果，应用酶联免疫吸附法所得出的结果阳性率明显更高，组间数据存在统计学意义，P＜0.05。且不容忽视的是，酶联免疫吸附试验所出具的结果阳性预测值、阴性预测值、特异性以及敏感性均比甲苯胺红不加热血清实验要高，组间数据存在统计学意义，P＜0.05。相关工作人员在开展梅毒检验工作过程之中，使用酶联免疫吸附法完成这项工作，能够实现大样本数据筛查[8,9]。

就酶联免疫吸附实验法丙型肝炎病毒抗体检测中的应用方面来看，主要为：当前中国临床抗丙型肝炎病毒检测试剂一般使用酶联免疫吸附试验试剂盒。而这种试剂盒的质量情况直接对丙型肝炎病毒检出概率和患者的输血安全造成影响。现如今，随着中国酶联免疫吸附实验试剂盒生产技术的不断提升，使用第三代产品有着比较好的灵敏性以及特异性。有文献研究证实：针对以往临床所使用的胶体金快速吸附法来讲，应用酶联免疫吸附实验开展丙型肝炎病毒抗体测定，所出具的阳性率明显更高，组间数据存在统计学意义，P＜0.05。可以这样讲，现如今酶标仪已经被广泛应用到检测细菌溶液浓度水平、血清三酰甘油以及血清总胆固醇、梅毒丙型肝炎病毒抗体检测之中。且取得了满意效果。相信随着日后有关技术的不断进展，酶标仪一定会在更多的领域检测中体现出良好作用[10]。

总而言之，在开展血液样本检验过程之中，利用酶标仪加以测定，能够取得满意成效。此法有着用时短、方便、简单、精准性高、稳定性强、进样微量等优点。可在根本上提升诊断效率，减少检验成本。