高效液相色谱在食品药品检测中的应用

2021-03-27

甘肃畜牧兽医 2021年2期

（甘肃畜牧工程职业技术学院，甘肃武威 733006）

1 高效液相色谱的原理和特点

高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是一种以经典的液相色谱为基础，使用高压输液泵将指定的流动相泵入色谱柱中以进行分离和测定。注入的待测样品通过流动相进入色谱柱内进行分析，分离出的各组依次进入检测器，由记录仪或数据处理系统记录色谱信号。高效液相色谱仪由五大系统构成。高压输液系统主要包括贮液器、脱气处理装置和高压输液泵，其目的是为分离系统提供稳定的能将混合物组分离的高压液体。进样系统由进样口、注射器和进样阀（或自动进样置）组成。其作用是有效地将分析试样送入色谱柱上，简而言之，其功能是取样和进样。分离系统包括预柱（保护柱）、分析柱（色谱柱）和柱温箱。色谱柱是分离系统的重要组成部分，要求分离度高、柱容量大、分析速度快。通用的分析色谱柱一般为10～30 cm长，增加柱长有利于组分的分离，但同时增加了柱压。检测系统由独立的检测器及附属部件构成，其功能是将物理或化学特性转变为可处理的电信号，控制和数据处理系统，记录、处理色谱分析的数据。

高效液相色谱技术具有操作简便、检测精度高以及节约时间等优点，在众多检测方法中脱颖而出。

2 高效液相色谱在食品药品检测中的应用

2.1 高效液相色谱在食品检测中的应用

HPLC可广泛地应用于食品中各营养成分的测定，如氨基酸、糖类、维生素、矿物质等。人体必需氨基酸有八种，传统的检测技术在其测定方面具有一定的局限性，无法保证结果的准确性。但HPLC对氨基酸的检测效率远高于经典的液相色谱技术，能确证其检测结果的准确性。除此之外，还被用于检测食品中添加剂的含量及抗生素的残留等。如在肉制品中防腐剂苯甲酸和山梨酸的测定，国家标准GB 5009.28-2016中采用乙酸锌-亚铁氰化钾来沉淀样品中的蛋白质，但易产生大量絮状沉淀，且提取后所得溶液中杂质成分较多，定量结果往往偏高。研究表明，苯甲酸、山梨酸分别在0.1～60μg/ml浓度下线性良好(R2=1.000)，其平均回收率分别为95.7%、92.8%，并且该方法具有良好的重复性、稳定性和精密度[1]。由于价格低廉，四环素类抗生素被广泛用于预防多种疾病和促进动物生长，进而提高畜禽的生产效率。但家禽和牲畜中四环素类抗生素的残留会间接或直接进入人体，从而大大增加了人体的耐药性，并对公众健康构成威胁。而四环素类抗生素最常用的化学检测方法是高效液相色谱法。王余磊等人[2]建立了同时测定鸡肉中3种四环素类药物残留（土霉素、四环素、金霉素）的方法，并优化了高效液相色谱条件。近年来，该分离技术在保健食品中的应用开始流行。缺乏叶黄素是夜盲症的主要原因。玉米、胡萝卜、蛋黄和一些藻类含有较多的叶黄素。采用HPLC测定保健食品中叶黄素的含量，既可有效地提取出叶黄素，又可快速准确地测定其含量，回收率达到96.57%～98.67%[3]。高效液相色谱技术的广泛研究使用，使得当前的食品安全检测水平飞速发展。

2.2 高效液相色谱在药品检测中的应用

药品不同于一般产品，药品质量直接关系到人民的健康和生命安全，为了在各个环节全面控制药物的质量，保障用药的安全和有效，药品分析检验就显得尤为重要。其中，药物的含量测定是药品分析检验的核心。目前，该技术已广泛应用于阿司匹林肠溶片、对乙酰氨基酚、盐酸普鲁卡因、头孢拉定、维生素类及巴比妥类药物的含量测定。以阿司匹林肠溶片为例，经典的两步滴定法操作简便，但由于本身的辅料比例较大，且滴定法易引起滴定终点的误差，导致测定结果高于理论含量。而高效液相色谱法可以避免辅料对阿司匹林肠溶片剂测定结果的干扰，获得准确的结果[4]。对于巴比妥类药物而言，滴定法、银量法等化学方法适用范围较窄，测定结果不准确，而HPLC能有效地解决上述问题[5]。除此之外，HPLC在药物杂质的检查中也常常使用。杂质作为药物质量管理控制的重要指标之一，影响药品的安全性和有效性。现如今，随着药物研究的不断深入发展，杂质的分析技术及研究方法正发生巨大变化。刘素艳[6]等人采用一种新的高效液相色谱法同时测定头孢拉定原料药中的六种杂质，为制剂研究奠定了理论基础。由于中药其成分复杂，往往难以检验，传统的检验方法局限性大，无法可靠保障其检验结果。采用HPLC可以更好地解决这一问题，降低分离难度的同时有效测定中药中有效成分。例如，丹参滴丸中黄芩苷和隐丹参酮的测定具有高精确度和分离度，这改善了传统定性检测方法的不足[7]。因此，实现中药有效成分定量控制，提升质量检验效率和质量的同时，促进了中药质量检验规范化和标准化发展。