泡囊草生品及不同炮制品的质量标准研究

苏日嘎拉图，敖民，乌云嘎，包东明，包明兰*

(1.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000；2、通辽市蒙中药产业发展研究中心，内蒙古 通辽 028000)

0 引言

囊草是茄科植物泡囊草Physochlainaphysaloides(L.)G.Don的干燥根。作为蒙药“混-好日苏”始载于藏、蒙医药经典著作《无误蒙药鉴》中，后《认药白晶鉴》等历代文献均有记载。1998年被收载于《中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)》，具有杀“黏”，消肿，杀虫，镇痛，解痉，清“协日乌素”，壮阳之功效。用于粘性胃痧，结喉，发症，虫疾，脑刺痛，头痛，阳痿[1,2]。现代药理学和临床研究表明泡囊草所含有的有效成分山莨菪碱、莨菪碱、东莨菪碱、红古豆碱和阿托品具有平喘止咳，安神镇静之功效[3]。由于泡囊草有大毒，蒙医常将泡囊草采用(1)用文火炒黄[4]；(2)用羊奶中浸泡后在草木灰中煨透[5]；(3)用牛奶浸泡后晒干[2,4,6]；(4)用水煎煮，制膏[2]等炮制方法处理后使用。目前，对泡囊草炮制品(牛奶制和制膏品)的化学成分及药效学研究只限于总生物碱的含量测定及抗炎镇痛、抗菌作用[7-8]。

本文采用薄层色谱法对泡囊草生品和炮制品中莨菪碱进行了定性鉴别；用HPLC 法对泡囊草生品和炮制品中莨菪碱和山莨菪碱进行定量分析，建立了质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 实验材料

莨菪碱和山莨菪碱对照品是由中国药品与生物检验所 购 买。( 批 号：100249-201303；11620-200402)。 泡 囊草由呼伦贝尔盟境内采取。泡囊草为茄科植物泡囊草 (PhysochlainaphysaloidesG.Don) 的干燥根，由内蒙古民族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定为泡囊草干燥根(批号：20180815；20180816；20180819)。薄层色谱硅胶G，硅胶G 均由青岛海洋化学试剂公司提供。其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器

BS210S 型(max210g d=0.1mg)电子天平(日本岛津)；ZF-1型紫外灯(上海)；HHS21-4 型恒温水浴锅(上海)；KQ-100 型双频超声波清洗器(昆山市)。高效液相色谱仪SHIMASZU SPD-M20A LC 20AT 型(日本岛津)；SPD-M10AVP 紫外分光光度计(上海)。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备

精密称取泡囊草生品、牛奶炮制品及浸膏品各2.0g，置于锥形瓶中加10mL 甲醇，加盖，称重，超声40min，置于室温放凉，称重，加甲醇补足减失的重量，过滤，即得泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏品的供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备

分别精密称取莨菪碱对照品5.0mg，置于10mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，再从溶液中吸取1mL，置于试管中加3mL甲醇，即得莨菪碱对照品溶液。

3 种供试品溶液和莨菪碱对照品溶液分别吸取3μl，按《中华人民共和国药典》(2015 版第四部0502)薄层色谱法[9-11]，分别点于同一羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板上，以乙醚-甲醇-氨水(17:2:1)为展开剂，展开10cm，晾干，在紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，见图1-1，1-2，1-3；再于硅胶G 薄层色谱板上以乙醚-乙醇-氨水(14:2:1)，正丁醇-乙醇-氨水(8:3:1)作为展开剂，展开验证时得到同样的结果，见图2-1，2-2，2-3；3-1，3-2，3-3。

图1-1：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.37图1-2：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.34图1-3：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.38

图2-1：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.29图2-2：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.43图2-3：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.46

图3-1：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.24图3-2：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.25图3-3：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪碱对照品Rf=0.34

2 定量测定研究

2.1 色谱条件

色谱柱：lnertsil NH2 Columns C18 300mm×4.6mm 5 μm；流动相：甲醇-水(15:85)，检测波长：215nm，柱温：35℃，流速：1.0mL/min。

2.2 供试品溶液的制备

样品溶液的制备：称取泡囊草生品和炮制品各1.0g，加入锥形瓶中加25mL 甲醇，加盖，称重，超声处理40min，室温晾干，称重，加甲醇补足减失的重量，过滤，滤液吸取1mL 置25mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，备用。

莨菪碱对照品溶液的制备：精密称取莨菪碱对照品12.5mg，置5mL 容量瓶中加甲醇至刻度，混匀，备用。

山莨菪碱对照品溶液的制备：精密称取山莨菪碱对照品12.5mg，置5mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，备用。

2.3 线性关系及其工作范围的考察

上述制备的对照品溶液中分别精密吸取5.0μL，7.0μL，10.0μL，12.0μL，15.0μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积(A)，并以峰面积(Y)对对照品的进样量(X)进行线性回归，得莨菪碱回归方程：Y=136224.6072X -6206.3726，r=0.9999。结果表明，莨菪碱对照品进样量在0.75μg ～2.25μg 范围内与峰面积具有良好的线性关系，相关性显著；山莨菪碱回归方程：Y=34845.2654X-3612.5605，r=0.9999。结果表明，山莨菪碱对照品进样量在3.00 ～ 9.00μg 范围内与峰面积具有良好的线性关系，相关性显著。结果见表1。

表1 线性关系检测结果

2.4 精密度试验

从“2.2”制备样品溶液中精密吸取10μL，按上述色谱条件进样6 次，计算其峰面积RSD%。结果泡囊草生品、牛奶制炮制品和浸膏中莨菪碱和山莨菪碱的峰面积RSD(%)分别为：0.60、0.36,0.45、0.87,0.46、0.53。表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

从“2.2”制备样品溶液中精密吸取10μL，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12h 进样一次，计算其峰面积RSD(%)，结果泡囊草生品、牛奶制炮制品和浸膏中莨菪碱和山莨菪碱的峰面积RSD(%)分别为：1.00、0.64，,080、0.83,0.82、0.38。表明供试品溶液在12h 内稳定。

2.6 重复性试验

泡囊草(批号20180815)样品精密称取1.0g(5 份)，照“2.2”方法制备供试品溶液5 份，分别精密吸取10μL，按上述色谱条件，测定其峰面积，并计算含量，结果泡囊草生品中莨菪碱和山莨菪碱的平均含量(mg/g)为2.67、11.62，RSD(%)为0.83、0.56；泡囊草牛奶炮制品中莨菪碱和山莨菪碱的平均含量(mg/g)为1.10、5.07，RSD(%)为0.65、1.06；泡囊草浸膏炮制品中莨菪碱和山莨菪碱的平均含量(mg/g)为2.65、13.66，RSD(%)为0.73、0.47。

2.7 回收率实验

精密称取泡囊草牛奶炮制品约0.10g，6 份。分别加莨菪碱对照品及山莨菪碱对照品，照上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定峰面积，按公式计算其加样回收率，结果见表2。

回收率(%)=[测得量(mg)—样品中含量(mg)/加入对照品量(mg)] ×100%

2.8 含量测定

按照“2.2”法制备的样品溶液，精密吸取10μL，按上述色谱条件下测峰面积，计算其含量，泡囊草生品及不同炮制品中莨菪碱和山莨菪碱的含量结果见表3。

3 结论

用3 种不同展开系统对泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏炮制品中莨菪碱进行薄层鉴别研究。结果在本试验条件下，在泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏炮制品中均能检出与莨菪碱对应的清晰的薄层斑点。用HPLC 法测定泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏炮制品中莨菪碱和山莨菪碱的含量。结果本实验条件下，莨菪碱和山莨菪碱的含量在牛奶制泡囊草中的含量比泡囊草生品中的含量明显降低而浸膏品中的含量比生品有所增加。

泡囊草主含的山莨菪碱、莨菪碱、东莨菪碱、阿托品、红古豆碱等既是泡囊草的有效成分也是毒性成分。泡囊草经炮制降低毒性而增强临床疗效。泡囊草经牛奶浸泡莨菪碱和山莨菪碱的含量降低。临床上经牛奶浸泡后入汤、散剂内服而保障临床安全有效与所含的莨菪碱和山莨菪碱含量可能有关。泡囊草浸膏品中的莨菪碱和山莨菪碱的含量有所增加，浸膏多外用，主要用于肿毒、乳腺炎、腮腺炎等严重病的治疗，认为通过炮制提高有效成分含量而增强其肿毒、乳腺炎、腮腺炎等严重病的治疗效果。实验结果符合蒙医辩证治疗理论和通过临床需要来辩证炮制理论。

本研究方法操作简便、可行可靠，重现性好，专属性强，可用于泡囊草及含泡囊草蒙药制剂的质量标准研究提供方法学基础。

表2 回收率实验结果

表3 含量测定结果