贵州省黔西南布依族苗族自治州1例类孟买血型检测分析及输血策略

梁 艳，冯成龙，王贞欢，王兴霖，杨光婷，黄元君，武 林

黔西南州人民医院输血科，贵州黔西南 562400

根据国际输血协会(ISBT)的定义，红细胞血型是指使用人类同种抗体检测的红细胞表面抗原，它们是由基因所决定的一种遗传性状[1]。红细胞血型受ABO、FUT1、FUT2和FUT3等4个基因的影响。FUT1基因编码H转移酶，合成红细胞膜上和分泌液中的H物质，当FUT1基因发生突变时，酶活力减弱，表现为类孟买血型。类孟买血型在进行ABO血型鉴定时通常表现为正反定型不符，本文中的案例就是在对患者进行血型鉴定中被发现，经进一步的基因检测，证实为B型类孟买血型，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1病例资料 女性，38岁，因“反复上腹部疼痛1年余，再发10余天”就诊，门诊以“胆囊结石伴胆囊炎”收治入院，既往有贫血史7年，贫血原因考虑为“异常子宫出血”。否认手术、输血、外伤史；入院查体：腹平坦，未见胃肠型及蠕动波，右上腹压痛，无反跳痛及肌紧张，Murphy′s(-)，入院查血常规示：血红蛋白(Hb)为85 g/L，血细胞比容(Hct)为25.3%，平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)及平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)均在正常值范围内。

1.2仪器与试剂 血清学专用离心机、普通离心机、电热恒温振荡箱、冰箱。抗A、抗B单克隆试剂血清购自上海血液生物医药有限责任公司(批号：20191018)；抗H试剂血清购自上海血液生物医药有限责任公司(批号：20191121)；人ABO血型反定型用红细胞购自上海血液生物医药有限责任公司(批号：20205337)。

1.3方法 操作按参考文献[2]和试剂操作说明书进行。

1.3.1ABO血型血清学测定 (1)正定型:取洁净小试管 2支，标明抗A、抗B，分别加入抗A、抗B试剂血清各2滴于标识试管内，再用移液器取50 μL患者5%的红细胞悬液分别加入抗A、抗B试管，离心后观察结果。(2)反定型:取洁净小试管3支，标明 A、B 和O型细胞，在3支试管中都加入50 μL患者血浆，再用移液器分别加入 A、B 和O型5%试剂红细胞悬液50 μL混匀，离心后观察结果。

1.3.2H抗原测定 取洁净小试管3支，标明待检、成人O型和成人B型，在3支试管中分别加入50 μL抗H试剂，再用移液器分别加入5%待检红细胞、成人O型红细胞和成人B型红细胞各50 μL到对应试管中，混匀，离心后观察结果。

1.3.3A、B抗原吸收放散试验 取2支洁净试管，分别标识抗A、抗B，在每支试管中加入1 mL用生理盐水洗涤3遍的患者红细胞，再在相应试管中加入抗A试剂、抗B试剂各1 mL，混匀红细胞与抗体，在4 ℃冰箱中孵育1 h，孵育期间不时摇晃混匀，用大量低温生理盐水(4 ℃，每次10 mL)洗涤红细胞4～5次，留取部分最后一次的洗涤上清液进行平行检测。使用56 ℃热放散回收ABO抗体，检测放散液及洗涤液。

1.3.4血清吸收试验 取患者1 mL血清，用O细胞吸收后，再与标准A、B、O细胞反应，检测抗体。

1.3.5唾液中A、B、H血型物质检测 取适量患者唾液，离心后取上清液，在沸水浴中静置8～10 min去除唾液中的酶，再次离心收集清澈或轻微乳糜液。取4支洁净试管，分别标识抗A、抗B、抗H及盐水，在相应标识试管中分别加入标化血清与处理后的唾液，再分别加入2%～5%A、B、O型试剂红细胞作为指示红细胞，以检测患者唾液中的血型物质。

1.3.6FUT1、FUT2基因检测 抽取2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血送天津市秀鹏生物技术开发有限公司进行FUT1、FUT2基因检测。

2 结 果

(1)ABO 血型鉴定与H抗原鉴定结果显示，患者ABO血型正定性表现为O型，反定型A1c管中有4+凝集、Bc管中有1+凝集、Oc管中有2+凝集，正反定型不符，患者红细胞上未检测到H抗原。(2)红细胞A、B抗原吸收放散试验结果显示，放散液与A、 B 试剂细胞反应均无凝集。血清吸收试验结果显示，Oc吸收后血清与 Ac反应凝集强度(4+)，与Bc和Oc反应无凝集，表明血清中含有抗A抗体。(3)唾液血型物质检测结果显示，抗A(++++)、抗B(-)、抗H(++)。(4)FUT1、FUT2基因检测结果显示，FUT1基因发生了658C>T的纯合突变，FUT2基因发生了c.357C>T纯合突变，突变前与突变后表达的氨基酸一致，不影响基因的表达。

3 讨 论

类孟买血型因红细胞上缺乏H抗原而导致A、B血型物质不能正常表达，在血型鉴定时易误定为O型，这不仅给血型鉴定工作带来了困难，同时对安全输血也带来了一定隐患。因此，在血型鉴定工作中，对正反定型相符但反定型弱反应或者Ac、Bc之间凝集强度差异>2+的标本加做反定型Oc对照及抗H抗体的检测极其重要，可进一步区分亚型、自身抗体、孟买血型及类孟买血型[3]。

尽管血清学凝聚试验是经典的血型检测方法，具有不可替代性，但同时也存在一定的局限性，它常常受患者生理和病理变化、近期输血史、妊娠史、操作人员的操作方法及对结果的主观判读影响[4]，而基因检测可以作为一种新的检测方式弥补血清学检测的不足。随着对ABO血型系统的不断研究，类孟买血型的分子机制也逐渐清晰，有学者还对中国人群中FUT1基因和FUT2基因比较常见的突变种类进行了深入分析[5-9]。为了明确该例患者的血型，本研究将患者的全血送至天津市秀鹏生物技术开发有限公司进行FUT1和 FUT2基因检测，检测结果显示FUT1基因发生了658C>T的纯合突变，符合h3型的突变，FUT2基因发生了c.357C>T纯合突变。

本例患者血清学检测结果显示，红细胞表面未检测到 A、B、H 抗原，血清中存在抗A抗体，唾液中检测出B和H血型物质，尽管吸收放散试验中未检测到A或B抗原，考虑主要因血液标本量不足有关，结合患者以上血清学试验结果与FUT1、FUT2基因检测的结果，推论该患者为B型类孟买血型。

类孟买血型患者若需要进行输血治疗，首选是输同型血，但由于此血型罕见，血源的获得十分困难，因此有学者建议在紧急情况或者无法获得同型血液的情况下，可以选择37 ℃与患者血清无反应的同型A(B)或O型红细胞进行输血治疗[10]，但目前尚无足够的数据支撑这种输血方式的安全性，笔者建议若在紧急情况下采取这种输血方式，应在输注全过程密切观察患者是否出现输血不良反应，以便能及时采取抢救措施。对于择期手术的患者，建议患者进行自体输血，同时在术中实行血液保护措施(如术中自体血回输、控制性低血压、血管阻断术等)，减少异体血输注的风险。本研究中患者拟行胆囊切除术，但患者Hb仅有85 g/L，存在术中输血的可能，根据类孟买血型人群具有家族性遗传的特点，首先建议对该患者进行家系调查，寻找同型血液，但该患者父母年迈，子女年幼，兄弟姐妹均在外省务工，无法进行家系调查寻找同型血液。本例患者贫血是因功能失调性子宫出血所致，且属于择期手术，因此，建议患者先治疗功能失调性子宫出血，当贫血情况得到改善后，进行自体血储存，再进行手术治疗，保障手术安全。

随着输血医学的不断发展，近几年类孟买血型的报道也逐渐增加，因为类孟买血型罕见，笔者建议各临床医疗机构在发现孟买血型或类孟买血型患者时，应积极与当地采供血机构联系，由采供血机构对孟买血型或类孟买血型者建立管理档案，并成立稀有血型联盟，关键时刻能实现互帮互助，同时动员符合献血条件的稀有血型人员献血，将其红细胞制备为冰冻红细胞进行长期保存，以便解决稀有血型的血液供应问题。